庄永华
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- pSIREN/PB1 siRNA重组质粒抗甲型流感病毒研究
- 2007年
- 目的研究重组质粒pSIREN/PB1在鸡胚尿囊液中干扰甲型流感病毒复制的效果。方法设计1对编码PB1siRNA的寡核苷酸序列,经退火互补形成双链,再克隆至带有U6启动子的RNAi ready pSIREN-shuttle线性化载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,双酶切和测序鉴定重组质粒pSIREN/PB1。大量提取重组质粒pSIREN/PB1,用脂质体进行包裹后,按每只鸡胚90μg质粒量接种于10日龄鸡胚尿囊腔,4血凝单位甲型流感病毒液分别于质粒接种后0h、24h、48h接种于鸡胚尿囊腔,流感病毒接种48h后收集无色澄清尿囊液进行血凝实验检测流感病毒效价。结果甲型流感病毒PB1基因的siRNA编码序列成功克隆至pSIREN质粒载体。经酶切和测序分析,重组质粒pSIREN/PB1中的siRNA编码序列均完全正确。将脂质体包裹的pSIREN/PB1质粒和病毒液同时注射入鸡胚尿囊腔后,收获的甲型流感病毒效价最低。结论成功构建了表达甲型流感病毒PB1siRNA的重组质粒pSIREN/PB1,并且它可以抑制鸡胚中流感病毒复制。此研究进一步证实了RNA干扰对流感病毒复制的抑制作用,为开发流感基因防治新方法奠定了基础。
- 杨晓芳赵培李虹李婉宜庄永华蒋忠华李明远
- 关键词：流感病毒质粒载体
- RNA干扰及其抗病毒作用被引量：1
- 2004年
- RNA干扰 (RNAi)是一种新发现的通过 ds RNA介导的特异同源靶基因沉默途径。 RNAi主要包括两个步骤 :RNase 样核酸酶切割 ds RNA而生成 2 1- 2 3nt的 si RNA和 si RNA引导 RNA诱导的沉默复合体 (RISC)降解同源性靶基因 m RNA。在某些生物体中 RNAi具有放大效应。通过将 - 2 1nt si RNA导入哺乳动物细胞的 RNAi技术不仅可避免非特异干扰素反应 ,更重要的是还可介导序列特异的基因沉默。最近将 RNAi应用于许多病毒性疾病的治疗研究均取得了显著的基因沉默效果 ,预示 RNAi有望成为一种预防、治疗病毒性疾病的新手段。
- 庄永华李明远
- 关键词：RNA干扰小干扰RNA基因沉默抗病毒
- 用髓鞘碱性蛋白建立豚鼠变态反应性脑脊髓炎模型
- 2004年
- 目的 :用髓鞘碱性蛋白 (MBP)诱导实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)豚鼠模型。方法 :提取MBP并经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)鉴定后 ,用MBP +完全弗氏佐剂 (CFA)免疫豚鼠 ,观察豚鼠的临床症状和中枢神经系统 (CNS)的病理改变。结果 :实验组豚鼠均表现出典型的EAE症状 ,发病率为 10 0 % ,并在光镜下可见CNS血管周围炎性细胞浸润和白质脱髓鞘病理改变。结论 :用MBP +CFA成功地诱导了豚鼠的EAE模型 ,具有模型稳定、发病率高、动物价廉易得的优点 ,是研究多发性硬化 (MS)
- 陈明琪李虹庄永华蒋中华贾怡李明远
- 关键词：实验性变态反应性脑脊髓炎髓鞘碱性蛋白自身免疫性疾病
- HPV-16E4原核表达系统的建立和表达特性研究被引量：2
- 2006年
- 目的克隆人乳头瘤病毒-16型(HPV-16)E4基因(E4),构建E4蛋白表达重组工程菌,探索表达条件和鉴定表达产物特性。方法以临床HPV-16阳性宫颈炎患者上皮细胞提取物为模板,PCR扩增E4完整基因,并定向克隆到pET32a(+)原核表达质粒中,经双酶切和测序鉴定后转入大肠杆菌BL-21(DE3),获得工程菌(BL-21/E4)。经IPTG诱导,表达蛋白用SDS-PAGE和Westernblot鉴定。结果克隆到完整E4基因为342bp,与HPV-16东亚型的同源性为99%,与其他HPV16型的同源性高于97%。在28℃和37℃,0.1mmol/L的IPTG诱导18h时,重组蛋白(rE4)表达量分别占菌体总蛋白的12.2%和12.8%;SDS-PAGE和Westernblot证明rE4蛋白与表达载体的标签蛋白形成相对分子质量约34×103的可溶性融合蛋白(rE4/His)。结论成功构建了表达带标签的融合重组蛋白(rE4/His)的重组大肠杆菌BL-21/E4表达系统,这为高纯度HPV-16E4蛋白的制备和相关研究奠定了基础。
- 王保宁施桥发李虹张卫东庄永华杨靖蒋忠华李明远
- 关键词：HPV-16原核表达
- RNA干扰及其抗病毒作用
- 本文首先论述了RNAi发现简史，并从RNAi的作用机制、RNAi的放大效应机制、哺乳动物细胞中的RNAi技术、RNAi的抗病毒治疗作用研究四个方面阐述了RNA干扰的抗病毒作用。
- 庄永华李明远
- 关键词：RNA干扰靶基因基因沉默抗病毒作用
- 文献传递
- DT390-IL2重组质粒治疗实验性变态反应性脑脊髓炎的初步研究被引量：3
- 2005年
- 目的:研究DT390-IL2重组质粒对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果。方法:提取髓鞘碱性蛋白(MBP)并经SDS-PAGE鉴定后,用MBP+CFA诱导豚鼠的EAE模型;采用亚精胺法进行DT390-IL2重组质粒的大量制备,并经肌注DT390-IL2重组质粒对EAE进行治疗,观察豚鼠临床症状和中枢神经系统病理改变。结果:①所提取的MBP,其分子量在17kD左右,并具有良好的生物学活性,成功地建成了豚鼠的EAE模型;②通过DT390-IL2重组质粒治疗豚鼠EAE,各治疗组与未治疗组相比,其差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:DT390-IL2重组质粒治疗EAE有效。
- 陈明琪张林李虹蒋中华庄永华贾怡李明远
- 关键词：实验性变态反应性脑脊髓炎髓鞘碱性蛋白免疫毒素
- 流感病毒血凝素基因HA1区的克隆及其真核表达载体的构建被引量：6
- 2005年
- 目的 克隆甲型流感病毒血凝素基因HA1区及构建其真核表达载体。方法 从接种人流感病毒株A/PR/ 8/ 34(H1N1)的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA ,用特异引物进行RT PCR ,扩增血凝素基因HA1区。将所扩增片断克隆入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+) ,转化感受态大肠杆菌JM 10 9并筛选阳性克隆。结果 经双酶切、PCR及测序鉴定证实血凝素基因HA1区的真核表达载体构建成功。结论 甲型流感病毒血凝素的HA1区是与宿主细胞膜表面受体结合的部位并起着诱导机体产生保护性抗体的作用 ,HA1区的克隆和其真核表达质粒的构建将为防治病毒侵入宿主细胞及核酸疫苗的研究打下基础。
- 曹康张卫东李虹李婉宜蒋中华庄永华李明远
- 关键词：流感病毒血凝素PCDNA3.1(+)
