宿世杰
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校优势学科建设工程资助项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 3株不同宿主源弓形虫分离株GRA7基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2017年
- 对分离于江苏地域的3株不同宿主源弓形虫YZ-1(ChineseⅠ基因型)、YZ-2(ChineseⅠ基因型)和KS(基因型Ⅰ型)分离株的GRA7基因的全长序列进行克隆与序列分析,结合GenBank中的相关序列进行遗传进化分析。结果表明:KS株的GRA7基因完整开放阅读框长711 bp,与RH参考株完全一致;YZ-1和YZ-2株GRA7基因序列均为708 bp,与KS株相比在290-292位点缺失3个碱基;氨基酸序列和抗原表位分析显示,YZ-1和YZ-2株的GRA7蛋白在97位缺失1个谷氨酸,但比KS和RH株多1个抗原表位。结果表明,GRA7基因可区分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型虫株,ChineseⅠ型与Ⅱ型虫株的亲缘关系最近;ChineseⅠ型GRA7基因在290-292位点缺少3个碱基,其GRA7蛋白多1个抗原表位。
- 赵振兴侯照峰乐建铭刘丹丹黄杰宿世杰马艺飞李巧巧许金俊陶建平周永华
- 关键词：刚地弓形虫克隆
- 毒害艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA文库的构建
- 2015年
- 本文采用Trizol试剂提取毒害艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA,用oliogo（d T）磁珠法纯化m RNA后,采用SMART技术构建了毒害艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA噬菌体表达文库。经鉴定,原始文库容量为2.14×106pfu/m L,扩增后的文库容量为4.47×1010pfu/m L,扩增文库的重组率为90%。随机挑取100个单克隆,通过菌液PCR检测得知文库插入片段长度以400～1000 bp为主。本研究结果为毒害艾美耳球虫新基因的筛选和功能研究奠定了基础。
- 蔡秀清刘丹丹宿世杰王乐乐贾传礼许金俊陶建平
- 关键词：毒害艾美耳球虫第二代裂殖子CDNA文库
- 大量制备毒害艾美耳球虫配子体方法的研究被引量：4
- 2016年
- 鸡经嗉囊接种毒害艾美耳球虫孢子化卵囊148 h后,从鸡小肠中段分离成熟的第二代裂殖子;经外科手术方法,将第二代裂殖子直接注入鸡盲肠内,使第二代裂殖子同步发育至配子体;手术后30 h剖检鸡,刮取盲肠黏膜,随后依次通过透明质酸酶消化、滤膜过滤、红细胞裂解、Percoll密度梯度离心等步骤,分离、纯化毒害艾美耳球虫配子体。结果显示,通过本方法分离、纯化的配子体纯度高、数量多,可用于基因转录组学、蛋白质组学、免疫学和疫苗等方面的研究。
- 贾传礼宿世杰侯照峰王乐乐刘丹丹许金俊陶建平
- 关键词：毒害艾美耳球虫配子体纯化
- 毒害艾美耳球虫氧化还原酶EnOXIO1的原核表达与定位分析被引量：1
- 2022年
- 旨在探析毒害艾美耳球虫氧化还原酶EnOXIO1的功能。提取毒害艾美耳球虫扬州株配子体总RNA,应用RT-PCR获取EnOXIO1编码基因,构建原核表达载体pET-28a(+)-EnOXIO1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),体外诱导表达,对重组蛋白进行抗原性分析,应用制备的多抗进行激光共聚焦免疫荧光定位。结果显示,获得的EnOXIO1基因全长为2535 bp,体外重组表达的蛋白大小约100 ku,主要以包涵体的形式存在,表达量约为0.5 mg·mL^(-1)。Western blot分析结果显示,该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体识别,同时能被制备的鼠多抗以及毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明该重组蛋白具有较好的反应原性和交叉反应原性。激光共聚焦免疫荧光定位结果显示,EnOXIO1基因表达产物主要存在于配子体内的成壁体上,参与了卵囊壁的形成。本研究成功克隆和表达了毒害艾美耳球虫EnOXIO1蛋白,并将其定位于配子体和卵囊壁上,为进一步解析EnOXIO1蛋白参与卵囊壁形成的分子机制奠定基础,为研制新型免疫阻断型球虫亚单位疫苗提供重要靶抗原。
- 叶状王乐乐汪飞燕刘悦彭月梅宿世杰宿世杰许金俊陶建平许金俊
- 关键词：毒害艾美耳球虫克隆表达免疫荧光定位
- 基于转录组测序分析鉴定毒害艾美耳球虫子孢子入侵宿主细胞的关键分子
- 毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)是鸡球虫病的主要病原,可引起鸡的急性发病死亡。球虫子孢子入侵宿主细胞并成功建立感染是鸡球虫病发生的首要条件,因此分析鉴定与子孢子入侵细胞的关键分子可为球虫病防控寻找出新靶...
- 高阳苏丁泽阳宿世杰汪飞燕刘丹丹许金俊候照峰陶建平
- 文献传递
- 巨型艾美耳球虫配子体蛋白EmGAM56的原核表达及其抗原性鉴定被引量：1
- 2017年
- 本研究将巨型艾美耳球虫Emgam56基因去除信号肽后的ORF序列连接至pET-28a(+)载体,构建表达载体pET-28-Emgam56,转化表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达;分析表达产物的可溶性和重组蛋白的分子相对质量,并进一步鉴定重组配子体蛋白rEmGAM56的抗原性。SDS-PAGE分析表明,表达载体能表达56000左右蛋白质,主要以可溶性蛋白的形式存在;Western blot检测表明,rEmGAM56蛋白能被鼠抗rEmGam56多克隆抗体和巨型艾美耳球虫感染鸡的康复血清特异性识别,显示重组蛋白具有良好的抗原性。本研究结果为研制重组配子体抗原亚单位疫苗奠定了基础。
- 宿世杰候照峰许金俊陶建平
- 关键词：巨型艾美耳球虫原核表达抗原性
- 柔嫩艾美耳球虫配子体基因Etgam56的克隆表达与鉴定被引量：1
- 2020年
- 提取柔嫩艾美耳球虫(扬州株)配子体基因组DNA,PCR扩增配子体基因Etgam56,经克隆和序列分析后,优化密码子,连接至pET-28a(+),构建原核表达载体pET-28a(+)-Etgam56,优化条件进行体外诱导表达,Western blot分析其抗原性。结果显示,Etgam56基因全长1425 bp,为一个完整开放阅读框,共编码474个氨基酸;体外表达重组蛋白的大小约为56 ku,IPTG终浓度为0.10 mmol/L,37℃诱导3 h时的表达量最高,且主要以包涵体形式存在。Western blot结果显示,该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体、柔嫩艾美耳球虫鸡康复血清和毒害艾美耳球虫鸡康复血清识别,表明该重组蛋白为特异性表达的蛋白,具有很好的抗原性和交叉反应性。本研究将为进一步探析柔嫩艾美耳球虫配子体蛋白的功能与研制鸡球虫基因工程疫苗奠定基础。
- 刘悦汪飞燕叶状宿世杰侯照峰侯照峰陶建平许金俊
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫克隆原核表达
- 毒害艾美耳球虫钙调素依赖性蛋白激酶基因的原核表达及其在不同发育阶段的表达分析
- 2019年
- 在前期分析比较毒害艾美耳球虫第二、三代裂殖子和配子体的转录组时,发现基因代号为ENH00078000的钙调素依赖性蛋白激酶(CaMK)基因呈差异表达。为了研究毒害艾美耳球虫钙调素依赖性蛋白激酶(EnCaMK)的功能,研究首先人工合成了该基因,构建pET-28a-EnCaMK表达载体,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,并进一步分析EnCaMK在毒害艾美耳球虫第二、三代裂殖子和配子体中的表达情况。结果显示:重组蛋白大小为48 ku左右,以包涵体形式为多,能被组氨酸(His)单克隆抗体特异性识别和鸡抗毒害艾美耳球虫多克抗隆抗体血清识别;用抗重组蛋白的鼠多克隆抗体在第三代裂殖子和配子体蛋白中检测到35 ku左右的EnCaMK条带,且在第三代裂殖子中表达量较高,显示差异表达。研究结果为进一步研究EnCaMK的酶活性与功能奠定了基础。
- 朱玉宿世杰苏丁泽阳高阳刘丹丹刘丹丹许金俊陶建平
- 关键词：毒害艾美耳球虫CAMK裂殖子
