孙鹏
- 作品数：10 被引量：21H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脑心肌炎病毒（EMCV）3C真核表达载体的构建及其功能鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的EMCV的pEGFP-3C真核表达载体的构建及功能鉴定。方法RT—PCR扩增EMCV功能蛋白3c基因并克隆至pEGFP—C3载体中，经双酶切和测序鉴定。将重组质粒分别转染到BHK-21细胞和293T细胞48h后，Western—Blot检测3c蛋白酶的表达，以及对PABPl的切割，共聚焦显微镜观测3c荧光表达位置。结果EMCV的pEGFP-3C重组质粒经双酶切及测序鉴定构建正确。表达的GFP融合蛋白相对分子质量约为49×10^（3），可切割PABPl，并表达于细胞核内。结论成功构建了EMCV的3c蛋白酶的真核表达载体pEGFP-3C，为进一步研究该蛋白酶的功能及作用奠定了基础。
- 李梅宋娟孙鹏宋芹芹盛琳君卢明枝迟苗苗王宝栋韩俊
- 关键词：脑心肌炎病毒基因质粒
- 肠道病毒71型抵抗I型干扰素诱导的抗病毒作用被引量：6
- 2012年
- 目的研究肠道病毒71型（EV71）抵抗I型干扰素（interferon，IFN）诱导的抗病毒作用。方法将1000U／ml的I型干扰素（α，β）加入HeLa细胞后，去除上清中的干扰素，感染带有GFP的重组单纯疱疹病毒（HSV-1）和EV71，观察GFP的表达和PCR检测HSV-1核酸，判断I型干扰素对HSV，1的作用。通过RT—PCR方法检测EV712A基因的表达从而判断EV71病毒的复制能力。结果I型干扰素（α，β）诱导HeLa细胞产生抗病毒蛋白而有效地抑制重组HSV-1GFP的表达和核酸扩增。而EV712A的RT—PCR结果证实EV71可在I型干扰素（α，β）作用后的HeLa细胞中有效增殖。结论I型干扰素（α，β）诱导产生抗病毒蛋白；EV71可在I型干扰素（α，β）诱导产生抗病毒蛋白的HeLa细胞中有效增殖。
- 崔雨宋娟宋芹芹孙鹏甘星李公启王克霞韩俊
- 关键词：肠道病毒属干扰素I型
- AlphaLISA技术的发展及应用被引量：2
- 2011年
- AlphaLISA技术是一种基于微珠的化学发光的新型均相检测技术,与传统的ELISA技术相比具有更高的敏感性、精确性、均一性、背景低、广泛的动态检测范围,而且无需洗涤及样本需求量极少等特点.该技术可用于多种组织、细胞来源的生物分子的检测,如细胞因子、抗原抗体的检测、蛋白相互作用及蛋白质与核酸相互作用的检测以及药物分析等研究.随着AlphaLISA技术的发展,该技术已在医学及分子生物学领域得到了广泛的应用.
- 王颖宋娟崔雨甘星孙鹏王克霞韩俊董小平
- 关键词：分子检测
- CVB32A蛋白酶抑制帽样结构依赖的蛋白翻译
- 2013年
- 目的探讨CVB3的蛋白酶2A对真核细胞帽样蛋白翻译和内部核糖体进入位点（IRES）翻译机制的影响。方法构建表达载体pcDNA3．1—2A，将此表达载体分别与pEGFP—N1、pGL3（F-luc）以及pIRES-GFP载体共转染细胞后，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达，检测荧光素酶蛋白的表达。WesternBlot检测CVB3病毒和pcDNA3．1-2A对真核生物翻译起始因子4GI（eIF4GI）及多聚A尾结合蛋白（PABP）的影响。结果pcDNA3．1之A可以减少帽样依赖的GFP和荧光素酶蛋白的表达，但可以促进IRES依赖的GFP表达。CVB32A基因质粒转染和CVB3感染后，均可发现细胞内elF4G的切割现象；同时CVB3对PABP也有降解作用，而CVB32A基因转染对PABP无明显作用。结论CVB3的蛋白酶2A抑制真核细胞帽样途径蛋白翻译，促进IRES途径的翻译。
- 卢明枝宋娟孙鹏宋芹芹盛琳君王宝栋迟苗苗姚海兰李朝品韩俊
- 关键词：柯萨奇病毒感染蛋白激酶类核糖体
- EV71通过2A蛋白酶切割Nup62而抑制核转运被引量：6
- 2013年
- 为了解EV71病毒对细胞核转运机制的影响,本研究构建了具有核定位信号的绿色荧光蛋白表达载体(pG-FP-NLS)。将此表达载体转染细胞后,使用EV71病毒感染转染细胞,结果发现EV71病毒可以有效阻止绿色荧光蛋白的核转移。将EV71病毒的2A蛋白酶真核表达载体与pGFP-NLS共转染RD细胞,可以发现2A蛋白酶可阻止具有核定位信号的绿色荧光蛋白的核转移而使绿色荧光蛋白表达于细胞浆。为了进一步研究病毒阻止核转移的机制,病毒感染细胞或通过转染2A蛋白酶真核表达载体进行Nup62的Western blotting检测,结果显示病毒以及2A蛋白酶均可引起Nup62表达下降。证明EV71可通过2A蛋白酶切割Nup62从而抑制核转运。
- 张亚洲甘星宋娟孙鹏宋芹芹李公启盛琳君王宝栋卢明枝李灵敏韩俊
- 关键词：肠道病毒71型核转运
- EMCV3C蛋白酶抑制真核细胞蛋白质合成的研究被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨脑心肌炎病毒（EMCV）的3C蛋白酶对真核细胞转录及翻译机制的影响.方法 构建真核表达载体pcDNA3.1-3C,将表达载体分别与帽样依赖的绿色荧光蛋白（GFP）表达载体pEGFP-N1和萤火虫荧光素酶（Fluc）载体pGL3载体共转染细胞后,检测GFP和Fluc的表达.Western Blot检测EMCV病毒和pcDNA3.1-3C对真核生物翻译起始因子4GI（eIF4GI）及多聚A尾结合蛋白（PABP）的影响.RT-PCR检测pcDNA3.1-3C对GFP mRNA转录水平的影响.结果 EMCV-3C可以抑制帽样依赖的GFP和Fluc的表达.EMCV 3C和EMCV病毒感染均导致细胞内PABP发生切割,而对eIF4GI均无明显作用.EMCV-3C也可导致GFP基因mRNA转录水平下降.结论 EMCV的蛋白酶3C通过mRNA转录水平的抑制和PABP的切割而抑制真核细胞帽样结构依赖途径的蛋白翻译,从而抑制蛋白质的合成.
- 王宝栋宋娟孙鹏宋芹芹盛琳君卢明枝迟苗苗任云青韩俊
- 关键词：脑心肌炎病毒蛋白质工程
- 柯萨奇病毒B3蛋白酶2A干扰核因子κB p65的二聚体形成和核转移
- 2014年
- 为探讨柯萨奇病毒B3(CVB3)蛋白酶2A是否通过干扰核因子κB(NF-κB)的核定位而影响细胞因子表达,构建CVB3蛋白酶2A的表达载体pcDNA3.1-2A。将此表达载体与核转录因子NF-κB基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-NF-κB promotor-Luc共转染细胞,经肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激,检测荧光素酶表达;通过免疫荧光和蛋白免疫印迹检测CVB3蛋白酶2A对NF-κB核定位和二聚体形成的影响。结果显示,CVB3蛋白酶2A可减少NF-κB二聚体形成,并干扰其核转移。本研究证实,CVB3蛋白酶2A可通过干扰NF-κB二聚体形成和核转移而影响细胞因子分泌。
- 盛琳君宋芹芹卢明枝宋娟孙鹏王宝栋迟苗苗韩俊
- 关键词：柯萨奇病毒B3核因子ΚB
- PrP106-126多肽诱导凋亡细胞中14-3-3β的降解被引量：2
- 2012年
- 本研究将PrP106-126多肽和HeLa细胞共孵育4h和8h,采用Hoechst染色分析发现PrP106-126诱导凋亡细胞细胞核出现不同程度的染色质浓集,固缩及碎裂的细胞凋亡征象。Western blotting检测发现PrP106-126诱导细胞中的多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)降解,提示PrP106-126通过caspase3途径引起细胞凋亡现象。PrP106-126诱导的细胞中14-3-3β在不同孵育时间也出现降解,而Real-time PCR检测14-3-3βmRNA未发生变化。本研究证明PrP106-126通过caspase3诱导HeLa细胞凋亡,并可导致抗凋亡蛋白14-3-3β的降解而加速凋亡的形成。
- 孙鹏宋娟张瑾宋芹芹甘星崔雨高晨博晓真韩俊
- 关键词：凋亡
- PrP106—126多肽抑制14—3—3β蛋白二聚体形成的研究
- 2013年
- 目的探讨PrP蛋白和PrP106-126多肽对14—3．3蛋白二聚体形成的影响方法将重组表达纯化的0．25μg、0．5μg和1μgPrP蛋白、人工合成的PrP06—126肽分别与重组的14—3—3β共孵育，分别通过非变性聚丙烯酰胺凝胶的WesternB1ott检测PrP蛋白和PrP106-126肽对14．3．3B二聚体和多聚体的形成影响。将不同浓度的PrP与250μmo1／L的PrP106．126肽和14-3-3蛋白共孵育，检测PrP蛋白对PrP106—126肽对14-3-3β二聚体和多聚体的形成影响。随后，将200g,mo1／L、100μmo1／L、50μmo1／L的PrP106—126多肽分别作用于HeLa细胞8h后，检测细胞内的14-3-3二聚体形成。结果PrP蛋白与14-3—3蛋白共孵育后，14—3—3二聚体和多聚体的信号随着PrP浓度的增加明显增强；PrP106—126多肽共孵育时，14-3—3二聚体和多聚体的信号随着PrP浓度的增加而减弱；不同浓度的PrP蛋白可以拮抗PrP106—126多肽对14-3-3B二聚体的形成。而且PrP106．126多肽可以干扰HeLa细胞中的二聚体形成。结论PrP蛋白促进14—3—3二聚体的形成，而PrP106-126多肽干扰二聚体的形成，且PrP蛋白具有拮抗PrP106-126肽干扰14-3-3二聚体形成的作用。
- 宋芹芹孙鹏宋娟盛琳君张瑾韩俊
- 关键词：蛋白质工程肽类二聚作用
- 甲型肝炎病毒IgM AlphaLISA检测方法的初步建立被引量：2
- 2012年
- 目的建立甲型肝炎病毒抗体IgM的AlphaLISA检测。方法浓缩甲型肝炎病毒抗原并生物素化，通过dot—Blot法摸索出生物素化的甲型肝炎病毒的最适量为6×10-8ng。优化供体珠、受体微珠、血清等实验反应条件，建立了甲型肝炎病毒的AlphaLISA的IgM检测方法。并对23份感染甲型肝炎病毒的IgM阳性患者和70份健康人的血清进行检测。结果AlphaLISA甲型肝炎病毒的IgM方法检测：灵敏度（真阳性率）为78％；特异度（真阴性率）为98．5％；假阳性率为1％；假阴性率为22％；阳性预测值为95％；阴性预测值为93％；准确度为94％。结论建立了均相、快速检测AlphaLISA甲型肝炎病毒IgM检测方法并得到初步应用。
- 甘星王颖宋娟崔雨孙鹏高晨李朝品韩俊
- 关键词：免疫球蛋白M
