姜海
- 作品数：126 被引量：649H指数：14
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 基于微滴式数字聚合酶链式反应技术检测布鲁氏菌病患者血液中布鲁氏菌核酸的研究
- 2024年
- 目的本研究旨在建立一种基于微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)的检测方法,能够实现对布鲁氏菌病(布病)患者血液中布鲁氏菌核酸的定量与精准检测。方法以布鲁氏菌Bcsp31基因为靶基因,设计引物与探针并构建pUC57-Bcsp31重组阳性质粒,评价ddPCR方法检测布鲁氏菌的灵敏度、重复性与特异度。此外,收集疑似布病患者血液120份,采用ddPCR方法对样本中布鲁氏菌DNA载量进行定量检测。结果本研究建立的ddPCR检测布鲁氏菌的方法具有很高的灵敏性,最低检出限为100拷贝/μL,并且对布鲁氏菌的检测呈现出良好的特异性与准确性。120份血液样本中,ddPCR方法检出阳性103份,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法检出阳性52份。105份抗体阳性样本中,ddPCR方法与qPCR方法分别检出阳性93份和51份,阳性率分别为88.57%和49.52%。15份抗体阴性样本中,两种方法分别检测出阳性12份和1份。结论本研究建立了一种基于ddPCR方法的高灵敏度、高特异度的检测布鲁氏菌的方法,能够实现布病患者血液样品中布鲁氏菌核酸的定量与精准检测。尤其对于抗体阴性的疑似患者早期布病筛查具有重要意义。
- 刘海雯徐玲范玉包桂英陈俊杰张天承徐晴晴赵鸿雁朴东日田国忠任锋姜海
- 关键词：布鲁氏菌
- 基于血清的布鲁氏菌感染快速检测方法
- 本发明提供了基于血清的布鲁氏菌感染快速检测方法，涉及蛋白质谱检测技术领域。本发明根据布鲁氏菌感染血清和健康人血清的质谱数据，通过ClinProTools软件的SVM模型算法构建感染布鲁氏菌血清的标准检测模型，并获得了用于...
- 肖迪姜海张慧芳张炳华王磊杨文涛李天一赵飞
- 文献传递
- 布鲁菌多位点可变数目串联重复序列分析的分型研究被引量：6
- 2016年
- 目的采用多位点可变数目串联重复序列分析（MLVA）方法对山西省分离的布鲁菌进行基因型分析。方法2012、2013年，在山西省布鲁菌病（简称布病）监测点，采集已确诊的布病患者血液，进行血培养，对培养出的布鲁菌进行传统的生物分型鉴定。选取MLVA的16个位点[分为2组：panel 1、panel 2（包括panel 2A、panel 2B）]．对分离的布鲁菌进行MLVA分型，并对分型结果进行聚类分析。结果2012、2013年，共分离47株羊种3型布鲁菌；MLVA分型后进行聚类分析，发现分离的菌株高度同源，均为东地中海型；菌株可分为A群和B群。A群为优势基因群；panel 2B的Bruce04、Bruce16及Bruce30位点的变异度较高。结论在同一年份，相邻地区的布鲁菌菌株MLVA分型结果一致或相近，对追溯传染源、分析布病的流行和爆发有重要意义。Danel 2B的Bmce04、Bruce16及Bruce30位点的变异度高，提示这3个位点对分析研究同一生物型菌株的变异情况有价值。
- 杨红霞张秋香郝瑞娥姚素霞张凡非李虹崔步云姜海
- 关键词：布鲁菌基因聚类分析
- 布鲁氏菌104M疫苗株A抗原组分解析与候选蛋白筛选
- 2024年
- 目的探究布鲁氏菌104M疫苗株A抗原的主要成分,从A抗原中筛选潜在候选蛋白,为布鲁氏菌新型疫苗的研制提供基础。方法本研究利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝染色、鲎试剂检测脂多糖、脂多糖银染对布鲁氏菌104M疫苗株A抗原的主要成分进行解析,通过与免疫绵羊血清的蛋白免疫印记实验,选取有印迹的部分切胶酶解,利用液相色谱–串联质谱对这部分蛋白进一步解析,通过抗原分析工具VaxiJen和毒力蛋白分析工具VirulentPred,筛选布鲁氏菌A抗原评分0.6以上的毒力相关蛋白作为潜在的候选疫苗。结果布鲁氏菌A抗原是一种淡黄色棉花糖状、质量较轻的物质,主要由蛋白和脂多糖构成,对A抗原的蛋白质组鉴定显示,104M A抗原共有1142种蛋白,能够与绵羊血清反应的蛋白有172种,VaxiJen抗原性评分在0.6以上的有87种蛋白,其中毒力相关蛋白有38种。结论布鲁氏菌104M疫苗株A抗原的主要成分是蛋白质和脂多糖,对筛选到的A抗原中的候选蛋白需要进一步的实验来测试这些蛋白质的免疫原性和保护水平以设计出针对布鲁氏菌病更为有效和安全的疫苗。
- 韩阔赵鸿雁朴东日肖迪王磊范玉徐晴晴田国忠姜海
- 关键词：脂多糖疫苗
- 实时荧光定量PCR检测布鲁菌的应用研究被引量：5
- 2019年
- 目的 建立一种能快速检测布鲁菌的实时荧光定量PCR(RT-PCR)初步筛查方法。 方法 根据编码布鲁菌外膜蛋白omp10和omp31的碱基序列设计4对引物和对应探针,即omp10、omp10-1、omp31和omp31-1,应用实时荧光定量PCR技术,将设计的引物和探针分别用于检测6个种类的19份已知生物型的标准布鲁菌株DNA、10份云南玉溪分离的布鲁菌株DNA和224份阴性对照菌株DNA,包括35份巴尔通体菌、103份小肠结肠炎耶尔森菌(其中包括4份O∶3型和9份O∶9型)和86份杂菌,根据检测结果评价引物和探针的特异性。 结果 omp10、omp10-1可对19种标准布鲁菌株DNA进行扩增,omp10的起峰时间和扩增曲线优于omp10-1,且omp10不能扩增阴性布鲁菌株的DNA;omp31-1可对16种标准布鲁菌株DNA进行扩增;omp31不能扩增标准布鲁菌株DNA。omp10、omp10-1和omp31-1检测10份玉溪分离的布鲁菌株,DNA的平均循环(Ct)值分别为:19.87,、19.14、17.52。 结论 omp10特异性强,只对布鲁菌有特异性扩增,可用于布鲁菌的快速检测。
- 杜清春王鹏董珊珊姜海丁奕博杨向东
- 关键词：RT-PCR特异性
- 一种快速检测布鲁氏菌抗体的量子点免疫层析试纸条
- 本发明提供了一种快速检测布鲁氏菌抗体的量子点免疫层析试纸条，由样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫相互重叠1～1.5mm依次粘贴在PVC底板上制得，所述层析膜是由一条检测线和一条质控线组成的固相硝酸纤维素膜，所述检测线包被有布...
- 姜海李广强王升启荣振赵鸿雁
- 文献传递
- 多位点可变数目串联重复序列分析方法在布鲁杆菌病监测中的应用被引量：15
- 2012年
- 目的建立多位点可变数目串联重复序列分析方法（MLVA），并评价其在布鲁杆菌菌株鉴定及流行病溯源中的价值。方法使用MLVA方法，对16株羊种菌、22株牛种菌、21株猪种菌和10株犬种菌株进行分析，使用BioNumerics（Version5．0），对16个位点进行聚类分析，聚类方式用平均连锁聚类法（UPGMA）。计算每个位点的差异指数，菌株的基因型通过MLVA2010数据库确定。结果使用MLVA方法，通过Brace06、Bruce08、Bruce11、Bruce12、Bruce42、Bruce43、Bruce45、Bruce55共8个位点可以区分布鲁杆菌的种；通过Bruce04、Bruce07、Bruce09、Bruce16、Bruce30共5个位点可以对菌株进行溯源，确定菌株流行病学相关性。结论MLVA技术是一种分辨率高且易于在省级疾病防控系统监测实验室使用的标准化分型技术。可以加强布病监测能力。
- 赵鸿雁杨杰张旭朴东日田国忠李金平崔步云姜海
- 关键词：基因
- 布鲁氏菌微滴式数字PCR方法的建立与应用被引量：10
- 2021年
- 目的建立可对布鲁氏菌准确定量的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)方法。方法使用以布鲁氏菌bscp31基因为靶标的引物和探针,摸索最佳的引物和探针工作浓度,确定反应体系和扩增条件,评价所建立方法的灵敏性、特异性及对疫情相关血液标本的检测效果。结果ddPCR反应体系中最佳引物和探针浓度分别为0.8μmol/L和0.4μmol/L;最佳扩增条件:95℃10 min;95℃30 s,60℃1 min,循环40次;98℃酶失活10 min。布鲁氏菌核酸DNA为0.96 ng/反应~3.68 fg/反应时,ddPCR检出靶标基因拷贝数为2.00×105拷贝/反应~1拷贝/反应,ddPCR测得值的对数值与DNA浓度的对数值有线性关系。在疫情相关血液标本DNA的检测中,ddPCR阳性率远高于培养法和试管凝集法;16份人血液标本中靶标基因浓度为5~65拷贝/mL血液(平均29拷贝/mL血液),5份羊血液标本中靶标基因浓度为25~245拷贝/mL血液(平均98拷贝/mL血液)。结论ddPCR灵敏性高,可检测微量核酸DNA,适合临床血液标本的检测以及布病病原体的分子流行病学调查。
- 田国忠姜海薛盼盼朴东日赵鸿雁杨晓雯张京云
- 关键词：荧光定量PCR布鲁氏菌
- 用于鉴定布鲁氏菌自然感染或免疫接种家畜的方法
- 本发明提供一种用于鉴定布鲁氏菌自然感染或免疫接种家畜的方法，其是将Omp31蛋白或含His标签的重组Omp31蛋白作为布鲁氏菌种间差异标识蛋白，且以Bp26蛋白或含His标签的重组Bp26蛋白作为阳性对照蛋白，对于布鲁氏...
- 崔步云姜海杨星雅田国忠赵鸿雁朴东日
- 文献传递
- 基于质谱技术的布鲁氏菌快速检测试剂盒
- 本发明提供一种快速检测血液样本中布鲁氏菌的试剂盒，涉及蛋白质指纹图谱检测技术领域。本发明基于质谱技术，构建了针对血液中布鲁氏菌检测的特异性多肽质谱模型，以及使用质谱技术进行布鲁氏菌检测的试剂盒。本发明试剂盒能够通过特异性...
- 肖迪张建中姜海崔步云张慧芳
- 文献传递
