唐红英
- 作品数：8 被引量：40H指数：4
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- 整合素β1对人表皮干细胞增殖与分化的影响被引量：12
- 2007年
- 目的构建针对整合素（intergrin）β1特异性的siRNA表达载体，并转染人表皮干细胞（KSC），探讨整合素β1对KSC增殖与分化的影响。方法针对目的基因intergfinβ1，选择RNA干扰作用靶点特异性的寡核苷酸序列，构建到siRNA表达质粒pSilencer3．1／H1中，并转染人KSC，转染分组为转染siIntegrinβ1组、非转染组、转染空载体组、转染siNegative组。通过蛋白质印迹法观察intergrinβ1及外皮蛋白的表达变化；应用流式细胞仪观察细胞周期变化；挑选干细胞克隆传代培养14d后用1％罗丹蓝染色计算克隆形成率。结果重组载体siIntegrinβ1转染人KSC能够抑制intergrinβ1的蛋白表达，抑制效率达70％；KSC中外皮蛋白表达较对照组增加50％；G0／G1期细胞较对照组明显减少（P〈0．01）、G2期及S期细胞较对照组增多（P〈0．05）；干细胞克隆形成率较对照组显著降低（P〈0．01）。结论重组载体转染人KSC能下调intergfinβ1的表达，下调intergrinβ1的表达可能是表皮干细胞走向分化的重要调控因素之一。
- 唐红英伍素华陈建梁光萍苏踊跃孙荣距罗向东
- 关键词：表皮干细胞整合素Β1RNA干扰分化
- 体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究被引量：11
- 2005年
- 目的探讨用5-氮胞苷(5-aza)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的最佳条件。方法用Percoll密度梯度离心法分离培养、纯化大鼠MSCs,取第3代MSCs随机分为A、B、C 3组,分别加入5、10、20μm ol/L5-aza;每组分别孵育12、24、48 h,继续培养28 d。相差显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测细胞肌动蛋白(α-ac-tin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达,并通过W estern印迹法对细胞cTnT进行定量分析。结果MSCs经5-aza诱导培养28 d后,电镜下见细胞胞浆有散在肌丝样结构,免疫组化检测α-actin和cTnT表达均呈阳性;5μm ol/L的5-aza孵育48 h、10μm ol/L孵育24 h培养28 d的细胞cTnT表达量与10μm ol/L的5-aza孵育48 h、20μm ol/L 3种孵育时间各组比较无显著性差异,且细胞生物学特性未受到明显影响。结论MSCs在体外经5-aza诱导后可分化为心肌样细胞;5μm ol/L的5-aza孵育48 h和10μm ol/L的5-aza诱导24 h是MSCs体外诱导分化心肌样细胞的理想条件。
- 朱淑霞宋治远罗向东仝识非苏踊跃梁光萍唐红英
- 关键词：骨髓间充质干细胞5-氮胞苷诱导分化心肌样细胞
- 整合素与表皮干细胞被引量：4
- 2004年
- 唐红英罗向东伍素华
- 关键词：整合素表皮干细胞基因敲除技术细胞分化
- RNA干扰抑制整合素β_1在人表皮干细胞中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的观察整合素β_1对人表皮干细胞(KSC)增殖与分化的影响。方法选择人整合素β_1RNA干扰靶点特异性的寡核苷酸,连接到小干扰RNA(siRNA)表达质粒pSilencer 3．1/HI上,将其转染到KSC中,并根据转染的方式将KSC分为非转染、转染空载体、转染8i整合素β_(1-1)、转染si整合素β_(1-2)、转染siNegative 5个部分。通过蛋白质印迹法检测各部分KSC整合素β_1蛋白的表达水平,并筛选出最有效的阳性载体,将其命名为si整合素β_1进行后续实验；通过逆转录聚合酶链反应检测各部分KSC整合素β_1mRNA的表达水平,上述检测均重复测定5次。结果非转染、转染空载体的KSC不能抑制整合素β_1蛋白的表达；转染si整合素β_(1-1)、si整合素β_(1-2)的KSC能够在蛋白水平抑制整合素β_1的表达,并且后者效果强于前者,抑制效率达到60%～70%,将其命名为si整合素β_1；si整合素β_1使KSC中整合素β_1mRNA水平明显下降,抑制效率约达70%。结论重组质粒转染KSC后可下调整合素β_1mRNA及其蛋白的表达。
- 唐红英伍素华苏踊跃陈建刘月明梁光萍孙荣距罗向东
- 关键词：RNA干扰转染表皮干细胞
- 整合素β1小干扰RNA载体构建及其在表皮干细胞干扰效应检测被引量：5
- 2004年
- 目的 设计和构建整合素 β1(integrinβ1)特异性的小干扰RNA表达载体 ,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法 设计靶点特异性的寡核苷酸 ,连接到经BamHⅠ HindⅢ酶切线性化的pSlincer3 .1 H1质粒上。转染重组质粒到表皮干细胞 ,通过免疫印迹 (Westernblotting)实验检测靶基因的抑制情况。结果 构建的小RNA干扰质粒siIntegrinβ1转染表皮干细胞能够抑制靶基因整合素 β1的表达。 结论 成功构建了针对整合素 β1的siRNA质粒 ,为进一步研究整合素在表皮干细胞增殖与分化调控中的作用奠定了基础。
- 唐红英伍素华罗向东刘月明陈建苏踊跃孙荣距
- 关键词：RNA干扰表皮干细胞整合素Β1转染
- siCASK重组载体构建及效应检测被引量：1
- 2004年
- 目的 构建针对人CASK基因的siRNA质粒 ,建立CASK下调表达的细胞模型 ,为CASK相关的细胞信号研究奠定基础。方法 选择人CASK基因不同靶点 ,体外合成DNA模板 ,经退火后插入到pSilencer3 .1hygro载体的多克隆位点。阳性重组质粒转染ECV3 0 4细胞 ,蛋白印迹。观察siCASK对目的蛋白表达的抑制效率。结果 酶切、测序表明以pSi lencer3 .1hygro为载体的重组质粒siCASK构建成功。siCASK转染细胞后 ,能够明显抑制目的蛋白的表达。结论 成功构建了siRNA重组质粒 ,为下一步CASK功能研究奠定基础。
- 孙荣距杨宗城苏踊跃蔡震唐红英罗向东
- 关键词：RNA干扰内皮细胞
- 整合素β1在人表皮细胞株HaCaT增殖中影响的研究被引量：7
- 2006年
- 目的探讨β1整合素对表皮细胞增殖的影响。方法将重组整合素β1小干扰RNA表达载体(siIntegrinβ1)转染到HaCaT细胞株中,应用免疫印迹(Westernblotting)方法检测靶基因的抑制情况,应用细胞计数法检测表皮细胞增殖情况。结果重组siIntegrinβ1转染HaCaT细胞株能够抑制靶基因整合素β1的表达,抑制细胞增殖。结论在人表皮细胞株HaCaT中抑制整合素β1表达可抑制HaCaT增殖,为进一步研究整合素在表皮细胞中的基因表达调控奠定了基础。
- 闫德雄苏踊跃唐红英梁光萍陈建罗向东
- 关键词：整合素Β1表皮细胞增殖
- 构建创伤修复相关基因p21表达载体被引量：1
- 2005年
- 目的:构建创伤修复相关基因p21启动子驱动的荧光素酶报告基因表达载体,并评估其稳定性和可靠性。方法:实验于2004-06/08在第三军医大学西南医院烧伤研究所内皮细胞室完成。野生型p21基因启动子全序列经酶切亚克隆入pGL3-basic荧光素酶报告基因载体,重组载体pGL3-p21p转染ECV304细胞,并应用双荧光素酶检测系统检测荧光素酶活性,排除转染过程误差。结果:①目的片段克隆载体与p21基因启动子cDNA序列高度同源。②转染重组载体pGL3-p21p和E47+IPTG诱导细胞荧光素酶活性明显增强,而空载体pGL3-basic的荧光素酶表达处于基础水平,两者比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:构建的野生型p21基因启动子驱动的荧光素酶报告基因载体,转染ECV304细胞后能够表达荧光素酶蛋白,具有稳定和可靠性能。
- 孙荣距杨宗城苏踊跃蔡震唐红英罗向东
- 关键词：基因转染
