周凤娟
- 作品数：25 被引量：65H指数：5
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 庆大霉素诱导LLC-PK1细胞凋亡与p27^(Kip1)表达关系的研究被引量：5
- 2002年
- 目的 观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的诱导作用 ;研究细胞周期调节蛋白 p2 7Kip1蛋白和mRNA表达在凋亡过程中的变化 ;并探讨细胞凋亡与p2 7Kip1之间的关系。方法 对体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株 (LLC PK1细胞 )予以不同浓度的庆大霉素溶液分别作用 2 4～ 96h ,以MTT法测定庆大霉素对LLC PK1细胞增殖的抑制率 ,抽提细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡条带 ,流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞增殖动力学 ,WesternBlot法检测细胞内p2 7Kip1的蛋白表达 ,RT PCR法检测细胞p2 7Kip1mRNA表达的变化。结果 庆大霉素对LLC PK1细胞增殖有抑制作用 ,具诱导LLC PK1细胞凋亡的作用 ,凋亡率呈药物浓度和作用时间依赖性 ;庆大霉素致细胞周期停滞于G1期。p2 7Kip1蛋白在细胞内的表达随着干预的庆大霉素浓度增加而逐渐上调 ,蛋白水平与凋亡率之间呈正相关 ,其mRNA表达趋势与其蛋白表达一致。结论 庆大霉素诱导的LLC PK1细胞凋亡与细胞周期蛋白p2 7Kip1表达密切相关。
- 傅鹏崔若兰袁伟杰周凤娟梅小斌戴建新孙树汉
- 关键词：P27^KIP1细胞凋亡MTT法
- 卡介菌基因组DNA制备工艺研究被引量：1
- 2005年
- 目的 摸索制备高纯度卡介菌 (MycobacteriumbovisBacillusCalmette Gu啨ｒｉｎ ,BCG)基因组DNA(BCG -DNA)的制备工艺。方法 采用超声破碎结核杆菌 ,加热使蛋白变性初步去除菌体蛋白 ,进一步经蛋白酶消化 ,乙醇沉淀DNA组分 ,再经离子交换和凝胶过滤层析 ,去除残余菌体蛋白和多糖 ,精制DNA ,并进行质量检测。结果 所制备的BCG -DNA片段大小介于 2 0 0～ 2 5 0bp之间 ,纯度大于 95 % ,蛋白含量占 0 . 1% ,多糖残留占 3 .5 %。结论此方法制备的BCG- DNA纯度较高 ,且无有机溶剂残留 ,适用于BCG DNA制备。
- 王静胡振林周凤娟凌亦凌孙树汉
- 关键词：BCG卡介菌多糖结核杆菌酶消化
- 乙肝核酸疫苗可使树鼠句 抵御人乙肝病毒的攻击
- 众所周知,乙肝核酸疫苗可在小鼠体内诱发全面的体液和细胞免疫应答,但是,该免疫应答能否抵御乙肝病毒的攻击?由于对人乙肝病毒敏感的物种很少,除人外只有黑猩猩和树鼠句。目前世界上只有几例在黑猩猩体内的成功报道。但由于黑猩猩的高...
- 戴建新周凤娟杨桦胡振林孙树汉
- 文献传递
- 稳定表达结核分枝杆菌38抗原的EL-4细胞株的建立及鉴定被引量：4
- 2003年
- 将结核分枝杆菌的38抗原基因片段经PCR方法扩增并插入到pcDNA3真核表达载体中,通过脂质体转染EL-4细胞,经G418筛选,用RT-PCR方法和ELISA方法检测整合和表达情况。结果成功地构建了pcDNA3-38抗原重组质粒,转染细胞中可检测到38抗原的存在,PCR扩增也证实38抗原基因已稳定整合于EL-4细胞的染色体中。本实验为今后在小鼠体内检测结核DNA疫苗激发的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应奠定了基础。
- 康林王庆敏胡振林周凤娟王磊孙树汉
- 关键词：结核分枝杆菌疫苗T淋巴细胞
- ESAT6抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答被引量：8
- 2004年
- 目的?构建结核杆菌ESAT6抗原DNA疫苗,并观察其在BALB/c小鼠体内诱导的免疫应答。方法:构建结核杆菌 ESAT6抗原DNA疫苗pVAX-ESAT6,并将其肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,用ELISA方法检测小鼠的血清抗体(IgG、 IgG2a/IgG1)水平,并在体外用特异抗原刺激小鼠脾细胞,检测其分泌细胞因子(IFN-γ、IL-4)的水平;用乳酸脱氢酶(LDH)释 放法测定小鼠细胞毒性T淋巴细胞反应。结果:pVAX-ESAT6DNA疫苗诱导了抗原特异的体液免疫应答和细胞免疫应答, 抗体亚型检测显示IgG2a与IgG1的比值为(2.28±0.4),脾细胞分泌的细胞因子水平检测显示IFN-γ的水平(360±45pg/ml) 高于IL-4的水平(124±16pg/ml)。结论:成功地构建了pVAX-ESAT6DNA疫苗,它能在小鼠中诱导抗原特异的免疫应答, 应答类型以Th1型占优势。
- 王庆敏胡振林周凤娟肖存杰章建程孙树汉
- 关键词：DNA疫苗小鼠免疫应答
- DNA免疫激活序列的分子作用机制研究——免疫激活序列特异性结合蛋白的克隆和鉴定
- DNA免疫激活序列(Immunostimulatory Sequence,ISS)是发现于细菌DNA(bDNA)中的一些以未甲基化的CpG二核苷酸对为核心的具有免疫激活功能的核苷酸序列,本项研究的目的是确定免疫细胞内是否...
- 胡振林孙树汉戴建新周凤娟
- 文献传递
- 卡介菌基因组 DNA和卡介菌多糖核酸免疫调控活性的比较(英文)被引量：4
- 2004年
- 目的 :比较研究卡介菌 (Mycobacterium bovis Bacillus Calm ette- Guérin,BCG)基因组 DNA(BCG- DNA)和卡介菌多糖核酸 (BCG- PSN)的免疫调控活性。 方法 :制备高纯度的 BCG- DNA,小鼠脾细胞 (splenocyte)和人外周血单个核细胞 (pe-ripheral blood m ononuclear cell,PBMC)分别与 BCG- DNA和 BCG- PSN共同培养 72 h,采用 EL ISA方法检测细胞培养上清中 IFN -γ的水平。结果 :所制备的 BCG- DNA纯度较高 ,DNA含量达 95 .3%。琼脂糖电泳显示 :BCG- DNA片断大小集中于2 0 0～ 2 5 0 bp。EL ISA结果表明 BCG- DNA与 BCG- PSN均可显著激活小鼠脾细胞和人外周血单个核细胞 ,有效诱导 IFN-γ的产生 (P<0 .0 1 )。当浓度达 1 0μg/ m l以上时 ,BCG- DNA免疫调控作用优于 BCG- PSN(P<0 .0 1 )。 结论 :BCG- DNA可显著诱导 Th1型细胞因子 IFN-γ的产生 。
- 王静胡振林周凤娟万斌何晓文凌亦凌孙树汉
- 关键词：卡介菌基因组DNA多糖核酸干扰素Γ
- 应用酵母单杂交系统筛选CpG免疫激活序列的特异性结合蛋白被引量：10
- 2001年
- 目的 :寻找与 Cp G免疫激活序列 (imm unostimulatory sequence,ISS)有选择性相互作用的蛋白 ,以进一步探讨其分子作用机制。 方法 :采用酵母单杂交系统 ,以 4重复的 ISS为“诱饵”,对人骨髓细胞 c DNA文库进行初步筛选 ,并对部分阳性克隆以电泳迁移率变动分析 (EMSA )进行验证。结果 :已获得 4个双阳性克隆 ,其中两个编码功能未知的蛋白 ,而另外两个均属抗体轻链 ,分别与抗 DNA抗体和抗乙肝表面抗原抗体 (HBs Ab)高度同源 ;EMSA发现 HBs Ab可在偏酸 p H条件下 (p H6 .4和 5 .8时 )特异性地与含 ISS的寡核苷酸 (Cp G- ODN)结合。 结论 :HBs Ab可与
- 胡振林孙树汉戴建新周凤娟
- 关键词：免疫球蛋白
- 钩端螺旋体膜表面蛋白LipL41基因的克隆、序列分析及表达被引量：2
- 2002年
- 目的：进一步分析钩端螺旋体LipL－41的免疫原性。方法：通过PCR的方法，以我国特有的钩端螺旋体流感伤寒群临海型lin6株（56609）的 DNA为模板，扩增目的基因 LipL41，克隆至 PcDNA3载体上，以自动测序仪测序后进行序列分析，然后克隆至原核表达载体pGEX－5T进行原核表达，Western印迹分析其免疫原性。珐票：获得长 1068 hp的片段，DNA序列分析表明该菌株的LipL41基因与文献报道具有很高的同源性（95．0％～99．4％），在大肠杆菌中获得了表达，并与抗钩端螺旋体血清反应。结论：该抗原为致病性钩端螺旋体所具有的保守性抗原成分，可能在钩端螺旋体病的诊断和预防中发挥作用。
- 寇志华孙树汉郭嬴军陈祖欢施柯胡振林张洪英周凤娟
- 关键词：免疫原性钩端螺旋体外膜蛋白原核表达基因克隆
- 乙肝DNA疫苗的构建及表达HBsAg P815细胞的筛选及鉴定
- 乙型肝炎(乙肝)是全球特别是发展中国家所面临的重要健康问题,我国是高发区,约有50％-70％的人群有过乙肝病毒的感染(未加免疫的人群),8％-10％为乙肝病毒表面抗原
- 周凤娟戴建新胡振林孙树汉
- 文献传递
