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DJ-1癌基因在肾间质纤维化中表达的实验研究被引量：4: 2009年; 目的观察DJ-1癌基因在肾纤维化过程中表达水平、细胞内定位及高表达DJ-1基因对人肾小管上皮细胞E钙黏蛋白（E—cadherin）、波形蛋白（vimentin）蛋白表达和β连环素（β-catenin）酪氨酸磷酸化水平的影响。方法体外实验以人肾小管上皮细胞为研究对象，10μg／LTGF-β1刺激72h诱导人肾小管上皮细胞转分化；Western印迹法检测正常组和TGF—β1干预组细胞内E—cadherin、vimentin和DJ-1蛋白表达；RT—PCR法检测两组细胞内DJ-1 mRNA表达水平；应用激光共聚焦显微镜观察DJ-1在细胞内的定位。体内实验以SD大鼠为研究对象，5／6肾切除法制作慢性肾纤维化模型；常规检测BUN和Scr水平；Masson染色检测肾组织纤维化水平；免疫组化法检测肾组织内DJ-1蛋白的表达和分布。脂质体法介导含野生型DJ-1基因的重组真核表达质粒pEGFP—N1-DJ-1或空载体转染人肾小管上皮细胞，倒置荧光显微镜和Western印迹法鉴定转染效率后，Western印迹法检测正常组、pEGFP—N1-DJ-1转染组和空载体转染组细胞内E—cadherin、vimentin蛋白的表达及各组β—catenin酪氨酸磷酸化水平。结果正常组细胞表达E—cadherin和DJ-1，几乎不表达vimentin；TGF—β1干预组细胞表达vimentin，表达较少E—cadherin，DJ-1 mRNA和蛋白表达均较正常组细胞显著增多（P〈0．05）。DJ-1在正常细胞内大多分布在细胞质，部分分布在细胞核；在转分化细胞内胞质和胞核内表达均有增加，且胞核内增加更显著。假手术组大鼠肾功能正常，肾组织内未见纤维组织，DJ-1主要表达于肾小管，肾小球内几乎没有表达。模型组大鼠肾功能不全，肾组织内可见明显纤维化结构，肾小管内DJ-1表达明显增加。pEGFP—N1-DJ-1转染组较正常组和空载体转染组细胞内DJ-1和vimentin蛋白表达明显增加且β-catenin酪氨酸磷酸化水平升高，而E—cadherin蛋白表达减少。结论DJ-1基�; 位红兰梁萍萍李娣昕刘林徐钢; 关键词：纤维化肾小管上皮细胞 Β连环素细胞定位

肾间质纤维化中DJ-1抑制抗纤维化因子PTEN的表达被引量：5: 2009年; 目的观察肾小管上皮细胞转分化过程中PTEN的表达和分布，并研究上调DJ-1对PTEN表达和分布及P13K—Akt通路活化的影响。方法以人。肾小管上皮细胞为研究对象，10μg／L TGF—β1刺激72h诱导人肾小管上皮细胞转分化；Western印迹法检测正常组和TGF—β1干预组细胞内PTEN、E—cadherin和α-SMA蛋白表达；RT—PCR法检测两组细胞内PTEN mRNA表达水平。脂质体法介导pEGFP—N1-DJ-1或空载体转染人肾小管上皮细胞，倒置荧光显微镜和Western印迹鉴定转染效率后，Western印迹法检测正常组、pEGFP-N1-DJ-1转染组和空载体转染组细胞内PTEN蛋白表达；RT—PCR法检测各组细胞内PTEN mRNA表达。pEGFP-N1-DJ-1转染前1h用P13K抑制剂LY294002预处理，Western印迹检测正常组、pEGFP．N1一DJ-1转染组和空载体转染组及LY294002预处理1h后pEGFP-N1-DJ-1转染组的p-Akt和Akt蛋白的表达。激光共聚焦显微镜下观察正常组、TGF-β1干预组和pEGFP—N1-DJ．1转染组细胞内PTEN蛋白的分布。结果正常组细胞表达E—cadherin和PTEN，几乎不表达α-SMA；TGF—β1干预组α—SMA表达显著高于正常组（P〈0．05），而E—cadherin表达显著低于正常组（P〈0.05），PTEN mRNA和蛋白表达均显著低于正常组（P〈0．05）。pEGFP-N1-DJ-1和空载体转染后，细胞绿色荧光表达均在80％以上；pEGFP—N1-DJ-1转染组细胞内DJ-1表达显著高于正常组（P〈0．05），而PTEN mRNA和蛋白表达均显著低于正常组（P〈0．05）；pEGFP—N1-DJ-1转染组p-Akt表达显著高于正常组（P〈0．05），但经LY294002干预后与正常组表达基本一致。正常组细胞内PTEN分布于细胞质和细胞核；TGF—β1干预组细胞质内PTEN几乎完全消失，而细胞核PTEN略有增加；pEGFP—N1-DJ-1转染组细胞核表达PTEN，但细胞质几乎无PTEN表达，这与TGF—β1干预组相似。结论肾间质纤维化中高表达DJ-1可抑制PTEN表达，并促进P13K—Akt通路�; 位红兰曾锐张娟罗昀刘林徐钢; 关键词：肾小管 DJ-1 PTEN P13K AKT

高表达PTEN抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化被引量：5: 2009年; 目的研究PTEN高表达对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化的抑制及其信号传导机制。方法脂质体介导含人全长PTEN基因或空载体转染人肾小管上皮细胞(HKC细胞)48 h,倒置荧光显微镜检测PTEN转染组及空载体转染组绿色荧光蛋白表达;Western blot检测正常组、PTEN转染组、空载体转染组中PTEN蛋白表达;RT-PCR检测3组中PTEN mRNA表达。然后将实验分为正常组、TGF-β1刺激组(给予TGF-β1刺激)、PTEN+TGF-β1组(PTEN基因转染后给予TGF-β1刺激)、空载体+TGF-β1组(空载体转染后给予TGF-β1刺激),Western blot检测各组细胞E-cad-herin、α-SMA、Akt、p-Akt表达水平。结果PTEN基因及空载体转染HKC细胞48 h后可见明显绿色荧光蛋白表达;PTEN转染组PTEN蛋白及PTEN mRNA表达较正常组及空载体转染组细胞均显著上升(均P<0.05)。在正常组、TGF-β1刺激组、PTEN+TGF-β1组、空载体+TGF-β1组中,TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组较正常组E-cadherin表达明显下降(均P<0.05),而α-SMA及p-Akt表达显著上升(均P<0.05);PTEN+TGF-β1组较TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组α-SMA及p-Akt表达明显下降(均P<0.05),而E-cadherin表达上升(均P<0.05);各组细胞Akt表达水平差异不明显(P>0.05)。结论PTEN通过阻止PI3K/Akt通路活化而抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化。; 位红兰曾锐刘林张娟罗昀葛树旺徐钢; 关键词：PTEN 肾小管上皮细胞细胞转分化 PI3K/AKT

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刘林

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