刘宏磊 作品数:8 被引量:10 H指数:2 供职机构: 复旦大学 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 上海市重大科技攻关项目 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
脂联素(gAdiponectin)的大量制备及其调控成骨细胞分化的功能研究 脂肪组织是人体最大的能量储存库。在机体需要能量时,脂肪组织动用储存的脂肪,向机体供能。近来的研究发现脂肪组织也是一个极其重要的内分泌器官。Adiponectin就是由脂肪组织分泌的一种活性多肽,又名GBP28(gelat... 刘宏磊关键词:脂联素 成骨细胞分化 巴氏毕赤酵母 脂肪细胞分泌蛋白质Acrp30及其生理功能 2004年 脂肪组织是人体最大的能量储存库 ,在需要时动用储存的脂肪 ,向机体供能。脂肪组织同时也是一个极其重要的分泌器官。Acrp30 (adipocytecompleterelatedprotein 30kD ,)就是由脂肪组织分泌的一种活性蛋白质 ,参与能量代谢、炎症反应等生理过程 ,与肥胖、Ⅱ型糖尿病、动脉粥样硬化。 刘宏磊 汤其群关键词:脂肪组织 肥胖 一种多肽gapM1及其制备方法 本发明属生物技术领域,具体涉及一种多肽gapM1及其制备方法,所述多肽具有序列2的氨基酸序列。gapM1经密码子偏爱性设计(无义突变)后,用PCR方法合成优化的gapM1的基因片段,与表达载体重组,转化相应的表达细胞,筛... 汤其群 刘宏磊 李希 宋后燕文献传递 一种多肽gapM1及其制备方法 本发明属生物技术领域,具体涉及一种多肽gapM1及其制备方法,所述多肽具有序列2的氨基酸序列。gapM1经密码子偏爱性设计(无义突变)后,用PCR方法合成优化的gapM1的基因片段,与表达载体重组,转化相应的表达细胞,筛... 汤其群 刘宏磊 李希 宋后燕文献传递 人脂联素球状结构域的表达、纯化和功能鉴定 被引量:5 2006年 目的表达和纯化人脂联素(adiponectin,APN)球状结构域并观察其生物学活性。方法用PCR方法复制人脂联素球状结构域(globular domain of adiponectin,gAPN)的cDNA,并克隆于pET28a(+)原核表达载体中。将重组表达质粒pET28a(+)-gAPN转化大肠埃希菌BL21(DE3),37℃培养至A600达到0.6时,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破菌,得到粗提的包涵体洗涤变性后经镍柱亲和层析柱一步纯化,获得纯化的gAPN重组蛋白,复性后冻干保存。然后,用链佐星(streptozocin,STZ)诱导的小鼠高血糖模型检测其生物活性。结果IPTG诱导后有Mr约为17 000大小的目的蛋白表达,免疫印迹结果进一步表明,其具有人gAPN的抗原性。表达蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体蛋白的30%以上,表达产物经变性、纯化、复性,可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够降低STZ诱导的小鼠高血糖模型的血糖水平。结论在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达了人gAPN蛋白,经变性、纯化、复性后得到具有生物学活性的蛋白。 刘宏磊 李希 宋后燕 汤其群关键词:脂联素 重组蛋白 高血糖模型 重组人N-端缺失脂肪细胞补体相关蛋白(gapM1)的研制 脂肪组织是人体最大的能量储存库,在机体需要时动用储存的脂肪,向机体供能。同时脂肪组织也是一个极其重要的内分泌器官[1,2]。apMl(Adiposemostgenetranscript1)pJ就是由脂肪组织分泌的一种活性... 刘宏磊关键词:蛋白质表达 蛋白质纯化 毕赤酵母 2型糖尿病 肥胖 文献传递 人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定 2005年 目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中。将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破胞,包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析,获得纯化的CNTF重组蛋白。然后,用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性。结果42℃诱导后可以获得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Western印迹结果进一步表明,其具有人CNTF的抗原性。表达蛋白主要以不溶形式存在,占菌体蛋白的35%以上,表达产物经变性、复性,纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活。结论在大肠埃希菌JF1125中成功表达了人CNTF分子,经变性、复性,纯化后得到具有生物活性的蛋白。 窦金民 郭莉莉 刘宏磊 陈接根 黄海燕 宋后燕 汤其群关键词:人睫状神经营养因子 生物活性鉴定 纯化 WESTERN印迹 背根神经节神经元 CNTF 成骨细胞的分化调控 被引量:5 2007年 骨组织中有两类参与调控骨代谢过程的细胞,成骨细胞负责造骨,破骨细胞负责溶骨。在一些骨相关疾病(如骨质疏松、骨相关肿瘤)发病过程中,造骨和溶骨失去平衡,这种失衡与破骨细胞和成骨细胞的数量异常及功能失调都有关,所以对成骨细胞分化机制的研究也是十分必要的。目前,已经有大量的文献表明,成骨细胞分化机制复杂,受许多激素、细胞因子以及一些小分子化合物的调控和影响,如骨形态发生蛋白(BMP)、Wnts等。 刘宏磊 汤其群关键词:成骨细胞 细胞分化