何堃
- 作品数：12 被引量：49H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- NLRP3对FFA诱导Kupffer细胞释放促炎性因子IL-1β的影响被引量：2
- 2019年
- 目的观察敲除小鼠Nod样受体蛋白3(NLRP3)基因对游离脂肪酸(FFA)激活Kupffer细胞(KCs)中NLRP3炎性小体及促炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)分泌的影响,探讨FFA导致促炎性因子IL-1β分泌的机制。方法选取野生型C57BL/6小鼠及NLRP3-/-小鼠,采用梯度离心联合选择性贴壁法分离各组小鼠KCs,将分离培养48h的KCs以3×10~6的密度接种于激光共聚焦培养皿及培养瓶中,并将KCs随机分为2组(对照组和FFA组)。对照组不给予任何刺激,FFA组给予棕榈酸(PA)刺激细胞,水平为0.32mM,处理时间为8h。采用光镜及透射电镜分别观察KCs的形态变化,逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测NLRP3炎性小体、凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)及天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)的mRNA表达变化,采用蛋白质免疫印迹(Western blotting)技术检测NLRP3炎性小体、ASC及Caspase-1的蛋白表达水平,采用免疫荧光技术检测NLRP3及Caspase-1在KCs中的表达情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定KCs培养上清液中促炎性因子IL-1β与IL-18的表达水平。结果光镜下见FFA组与对照组KCs形态上无显著差异,透射电镜下可见FFA刺激后KCs细胞质中吞噬了大量脂滴。野生型小鼠KCs中FFA组NLRP3、ASC及Caspase-1的mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);而NLRP3-/-小鼠KCs中对照组NLRP3、ASC及Caspase-1的mRNA及蛋白表达量与FFA组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。野生型小鼠FFA组KCs培养上清液中促炎性因子IL-1β与IL-18的表达水平较对照组显著增高,差异均有统计学意义(P<0.05);而敲除小鼠NLRP3基因可显著抑制IL-1β与IL-18水平的增高,2组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 FFA可激活野生型小鼠KCs中NLRP3炎性小体,促进KCs分泌促炎性因子IL-1β;敲除小鼠NLRP3基因后可显著抑制FFA诱导KCs中NLRP3炎性小体的激活及促炎性因子IL-1β的分泌;NLRP3可作为KCs相关炎性疾�
- 罗生才何堃龚建平
- 关键词：库普弗细胞
- 氧化物酶体增殖物激活受体γ对炎症状态下C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇外流的影响
- 2017年
- 目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)对巨噬细胞胆固醇外流的影响。方法 :建立高脂、急性炎症等不同病理状态的C57BL/6小鼠模型并分离培养其腹腔巨噬细胞,观察细胞PPARγ与IκB-α表达变化;采用PPARγ激动剂ciglitazone和PPARγ反义寡核苷酸预处理正常腹腔巨噬细胞,体外观察内毒素刺激对细胞胆固醇外流的影响。结果:高脂组和LPS组PPARγ蛋白表达较正常对照组均明显增高(P<0.05),高脂组IκB-α表达较正常组轻度降低,两种饮食经LPS刺激后IκB-α表达较正常组均显著降低(P<0.01)。胆固醇外流测定结果显示,高脂组细胞胆固醇外流较正常组明显增强(P<0.05),高脂及正常饮食组经LPS刺激后较正常对照组均明显减弱(P<0.05)。PPARγ激动剂预处理腹腔巨噬细胞,LPS刺激后PPARγ蛋白表达较正常对照组升高(P<0.05),IκB-α蛋白表达低于正常组(P>0.05)。PPARγ反义寡核苷酸预处理亦可导致巨噬细胞胆固醇外流受到抑制,但抑制程度高于正常对照组。结论:PPARγ激动剂可增强巨噬细胞胆固醇外流,而抑制PPARγ的表达则抑制C57小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇外流。
- 游海波何堃李钺龚建平李旭宏
- 关键词：PPARΓ炎症小鼠
- 游离脂肪酸通过自噬调节Kupffer细胞中NLRP3炎症小体的激活抑制非酒精性脂肪性肝炎的机制研究
- 2021年
- 目的探讨自噬在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中对NLRP3炎症小体激活的调控作用。方法将分离培养的Kupffer细胞(KCs)随机分为对照组、棕榈酸(PA)组、PA+雷帕霉素组(自噬激活组)和PA+渥曼青霉素组(自噬抑制组)。收集细胞及培养基上清液,通过qPCR与Western Blotting技术检测四组KCs中自噬和NLRP3炎症小体相关基因的mRNA及蛋白表达水平,通过ELISA技术检测KCs培养基上清液中促炎因子IL-1β的水平。再将20只C57BL/6小鼠随机分为对照组和NASH组,通过HE染色观察两组的肝脏组织病理学变化,qPCR与Western Blotting技术检测肝组织相关基因和蛋白的表达情况。结果PA组自噬相关基因Atg5、Atg7、Beclin-1和NLRP3炎症小体相关基因NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.01);LC3Ⅱ/LC3Ⅰ转化、Beclin-1、NLRP3、ASC和Caspase-1的蛋白表达水平也明显高于对照组(P<0.01)。自噬激活组自噬相关基因mRNA表达水平高于PA组(P<0.05),NLRP3炎症小体相关基因mRNA表达水平低于PA组(P<0.05);LC3Ⅱ/LC3Ⅰ转化和Beclin-1的蛋白表达水平高于PA组(P<0.05);NLRP3、ASC和Caspase-1的蛋白表达水平低于PA组(P<0.05)。自噬抑制组自噬相关基因和蛋白表达水平低于PA组(P<0.05),NLRP3炎症小体相关基因和蛋白表达水平明显高于PA组(P<0.01)。结论在PA刺激下,激活自噬可以抑制KCs中NLRP3炎症小体的激活和IL-1β的分泌,缓解炎症反应,而NASH过程中自噬功能受损,失去对NLRP3炎症小体激活的限制作用。
- 王宗鼎朱稀雯何堃龚建平彭自力
- 关键词：自噬非酒精性脂肪性肝炎
- 标准化病人在肝胆外科急重症临床教学中的应用价值
- 2024年
- 目的探讨标准化病人在肝胆外科急重症临床教学中的应用价值。方法选取2022年4—5月在重庆医科大学附属第二医院肝胆外科轮转的规范化培训学员为研究对象,共40名。将其随机分为研究组与对照组,各20名。研究组教学引入标准化病人,对照组采用传统的教学方法。出科时比较2组学员的病史采集及体格检查水平,以及标准化病人对学员的医患沟通能力及人文关怀进行评分。结果研究组病史采集成绩高于对照组[(88.70±0.61)分vs.(82.00±0.41)分],体格检查成绩高于对照组[(89.40±0.61)分vs.(82.55±0.39)分],差异有统计学意义(P<0.05)。研究组在医患沟通及人文关怀方面的得分高于对照组,[(13.15±0.32)分vs.(9.15±0.29)分],差异有统计学意义(P<0.05)。问卷调查结果显示,研究组100%(20/20)的学员认为标准化病人的应用可以提高学习兴趣,95%(19/20)的学员认为可以提高临床思维能力,90%(18/20)的学员认为可以提高医患沟通技巧。结论在肝胆外科急重症临床教学中应用标准化病人,可以提高学员的病史采集、体格检查、医患沟通等能力,尤其增强了人文关怀的意识,提高了学员的综合素质。
- 何堃丁雄李金政
- 关键词：标准化病人肝胆外科急重症病史采集体格检查
- 我国外科手术机器人研究应用现状与思考被引量：34
- 2019年
- 我国外科手术机器人研究取得了长足进展,骨科手术机器人和神经手术机器人已取得国内医疗器械注册证,多孔腹腔镜手术机器人已进入临床试验阶段,其他各类手术机器人取得了良好的进展。在应用方面,我国骨科和神经手术机器人主要以国产产品为主,腹腔镜手术机器人仍被达芬奇手术机器人垄断;在未来研发中,手术机器人将向着减少创伤、医信融合和智能远程等方向发展。未来我国手术机器人市场将进入快速增长阶段,应面向临床需求进一步增强自主创新能力,优化市场准入环境,加强对国产手术机器人的政策扶持,加快关键核心部件研发,促进手术机器人产业的跨越式发展,推动我国制造业迈向价值链的高端。
- 李治非杨阳苏月何堃华玉涛
- 关键词：手术机器人
- BOPPPS教学模式在肝胆外科理论教学中的应用及思考被引量：2
- 2023年
- 外科学课程中肝胆外科相关疾病的教学内容占据了较大比重,教学形式多种多样。大学生由医学基础理论课进入临床相关课程,在接受程度及适应程度上,均具有一定程度的困难。因此,为了达到良好的教学效果,就必须对授课教师的教学能力、教学技巧、教学方式等方面提出了更高的要求。BOPPPS教学模式是一种以教学目标导向、以学生为中心,可以更好地激发学生的学习兴趣,促进学生的课堂参与度,增强学习效果的教学模式。目前,BOPPPS教学模式在全球多所高校得到应用,但如何更好地将该教学模式融入医学本科肝胆外科相关的教学中仍然需要探索与研究。笔者初次尝试在肝胆外科的理论课大课(腹部损伤)中实施BOPPPS教学模式,并结合微信小程序、调查问卷、教师-学生互动、学生-学生互动等多种教学方法,激发学生们的兴趣及学习主动性。学生们课堂上表现积极,踊跃抢答,课后对于BOPPPS教学模式反馈较好。
- 何堃秦亚君丁雄吴传新
- 关键词：肝胆外科腹部损伤参与式学习
- 组织蛋白酶B通过TLR4非依赖途径调控小鼠肝脏Kupffer细胞内炎症的激活被引量：4
- 2018年
- 目的研究组织蛋白酶B在LPS引发小鼠脓毒血症中的作用。方法动物生存实验观察:采用腹腔注射致死剂量LPS(54 mg/kg)法,WT小鼠随机分为3组,TLR4-/-小鼠随机分为3组,两种小鼠的各组均依次分为生理盐水对照组、致死剂量组(LPS)及组织蛋白酶B抑制剂—CA-074预处理组(CA-074+LPS),观察小鼠生存时间及生存率;脓毒血症实验采:用大剂量LPS(20 mg/kg)腹腔注射法,其余处理及分组同前,各组小鼠造模结束后:(1)肝脏HE染色检测肝脏病理变化;(2)检测肝脏Kupffer细胞胞质内组织蛋白酶B的蛋白水平及活性;(3)检测血清中IL-1α、IL-1β、TNF-α、IL-18等炎症因子水平。结果经致死量LPS打击后,TLR4-/-小鼠生存时间延长至84 h,明显长于WT小鼠,但仍无法完全抵抗致死量LPS的打击,CA-074预处理可分别延长WT和TLR4-/-小鼠的生存时间至60和132 h。大剂量LPS刺激后,WT及TLR4-/-小鼠肝细胞变性坏死明显,Kupffer细胞胞质中组织蛋白酶B蛋白水平无明显变化,但其在胞质的活性显著增加(P?0.05);血清中IL-1α、IL-1β、TNF-α以及IL-18等炎症因子水平增高(P?0.05);各CA-074预处理组,肝细胞坏死减轻,Kupffer细胞中组织蛋白酶B蛋白水平无明显变化,胞质内活性明显降低(P?0.05);血清中IL-1α、IL-1β、TNF-α以及IL-18等炎症因子水平明显低于单纯大剂量LPS刺激组(P?0.05)。结论在大剂量LPS诱导的脓毒血症中,存在非依赖TLR4受体的炎症通路的激活过程,组织蛋白酶B在这个过程中具有重要作用。
- 冯盼盼朱韦陈楠李培志何堃龚建平
- 关键词：LPS脓毒血症KUPFFER细胞组织蛋白酶B
- 肝胆外科理论课程中线上教学的应用
- 2024年
- 目的探讨新型BOPPPS(bridge-in、objective、pre-assessment、participatory-learning、post-assessment、summary)教学模式在肝胆外科线上教学中的应用价值。方法选取2022年3-7月重庆医科大学2019级临床医学二系本科生(205名)及2018级临床医学二系本科生(200名)为研究对象,2019级学生为线上教学,为研究组,2018级学生为线下教学,为对照组。教研室师资创新性地将BOPPPS教学模式拆分融入线上教学课程3个阶段的设计中,并对课前、课中、课后3个阶段的教学进行细分、优化,提出了“分组讨论”的参与式教学方法,加强了师生互动。通过直播软件、学习平台、微信群等线上教学工具进行授课及答疑,提出了“云查房”“在线问诊”等线上医学实践方法,同时,课程组师资在课程中融入了“课程思政”的内容。结果线上教学总体取得了较好的教学成效,线上教学的2019学生成绩和及格率与线下教学的2018级学生成绩相比,差异有统计学意义(P<0.05)。学生们对线上教学的满意度较高。结论课程组师资创新性地将BOPPPS教学模式拆分融入线上教学课程3个阶段的设计中,加强了师生互动,“课程思政”内容的有机融入进一步提升了教学效果,为今后的线上教学工作提供了丰富的经验与新的思路。
- 何堃李金政
- 关键词：线上教学课程设计肝胆外科
- Kupffer细胞与肝脏脂质代谢紊乱的研究进展
- 2015年
- 非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)目前已成为发达国家及发展中国家最常见的慢性肝病之一,是一种与胰岛素抵抗和遗传易感密切相关的代谢性肝脏疾病,该病发展的初期为单纯性脂肪肝,其危害较小,但有可能进一步发展为脂肪性肝炎及脂肪性肝硬化,甚至发展为肝细胞肝癌.Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)为聚集于肝内的巨噬细胞,占全身巨噬细胞的80%-90%,是肝脏的第一道防御屏障.目前认为KCs参与的慢性代谢性炎症与NAFLD的发生发展密切相关,肝脏蓄积脂质激活的KCs通过释放促炎因子参与代谢性炎症的发生,但具体机制尚不清楚.本综述结合国内外最新相关文献,总结KCs在NAFLD中发挥的重要作用.
- 周天智何堃龚建平
- 关键词：KUPFFER细胞非酒精性脂肪性肝病胰岛
- 肝胆外科的胆管造影检查被引量：1
- 2012年
- 肝胆外科的胆管造影（cholangiography）是经一定方法和渠道使造影剂进入胆道,使胆道造影部位的轮廓及病变图像能在X线片上清楚显示出来,从而更有助于肝胆疾病的诊断。胆管造影的方法很多,一般分为排泄性胆道造影和直接胆道造影两大类。
- 姜飞龚建平何堃
- 关键词：肝胆外科胆管造影
