于慧
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：同济大学附属第十人民医院更多>>
- 发文基金：上海市卫生局青年科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 多发性骨髓瘤U266细胞株DNA甲基转移酶和甲基结合蛋白的表达被引量：1
- 2010年
- 目的检测多发性骨髓瘤（MM）细胞DNA甲基转移酶（DNMTs）及甲基结合结构域（MBD）蛋白[包括甲基CpG结合结构域蛋白（MeCP2）和MBD2]的表达状况,探索其在基因甲基化过程的作用。并观察5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和/或曲古霉素A（TSA）对DNMTs及MeCP2和MBD2的作用。方法利用荧光定量聚合酶链反应（PCR）分析MMU266细胞株DNMTs（DNMT1、DNMT3a、DNMT3b）及MeCP2和MBD2蛋白的mRNA水平,与10名正常人单个核细胞（PBMC）mRNA比较。4μmol/L5-Aza-CdR和/或0.1μmol/LTSA与U266细胞共培养,分析MBD2和MeCP2蛋白mRNA的变化情况。WesternBlot检测这2种药物对U266细胞MBD2蛋白的影响。结果各甲基化调控蛋白mRNA与PBMCmRNA相比,差异有统计学意义（P均〈0.05）。其中DNMTs和MBD2蛋白在U266细胞中表达升高,而MeCP2蛋白表达下降。经5-Aza-CdR和/或TSA作用后,MBD2表达下降,MeCP2升高。5-Aza-CdR在蛋白水平对MBD2的作用亦不显著;TSA可明显降低MBD2的表达,且具有时间依赖性。结论 DNMTs和MBD2、MeCP2蛋白在MMU266细胞中表达异常,可能与U266细胞多个抑癌基因启动子高甲基化相关。5-Aza-CdR和TSA可以逆转U266细胞MBD2和MeCP2的表达。
- 许闪闪李智何丽梅翁文浩于慧
- 关键词：多发性骨髓瘤表观遗传学DNA甲基转移酶
- Toll样受体mRNA在人肾癌细胞786—0和正常肾细胞HK-2中的表达及意义被引量：2
- 2011年
- 目的探讨Toll样受体（TLR）在肾癌发生、发展中的作用和意义。方法培养人肾癌细胞786-0（786-0实验组）和正常肾细胞HK-2（HK-2对照组）。实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PcR）检测TLR1～TLR10mRNA在786-0实验组及HK-2对照组细胞中的表达规律。结果786-0实验组和HK-2对照组细胞均表达TLRl～TLR6、TLR8～TLR10，而不表达TLR7。TLR1、TLR2、TLR4～TLR6、TLR8、TLR10在786--0实验组表达均高于HK-2对照组细胞[（4．40±0．19）×10^-2、（1．77±0．24）×10^-2、（5．03±0．62）×10^-2、（3．93_4-0．86）×10^-2、（6．11±0．48）×10^-2、（1．89±0．47）×10^-2、（2．84±0．57）×10^-2比（0．84±0．27）×10^-2、（0．40±0．04）×10^-2、（0．95±0．73）×10^-2、（0．56±0．25）×10^-2、（0．49±0．16）×10^-2、（0．20±0．07）×10^-2、（0．27±0．08）×10^-2，P〈0．01]，而TLR3、TLR9在786-0实验组与HK-2对照组细胞的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论TLR在人肾癌细胞和正常肾细胞细胞中的表达有差异，TLR1、TLR2、TLR4～TLR6、TLR8、TLR10在人肾癌的发生、发展中可能发挥一定的作用。
- 于慧许闪闪程钦全何丽梅李智
- 关键词：肾肿瘤TOLL样受体荧光定量PCR
- 曲古霉素A对多发性骨髓瘤U266细胞株的影响被引量：2
- 2010年
- 目的 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A（TSA）对多发性骨髓瘤U266细胞株增殖、周期、凋亡和侵袭力的影响.探讨该药对DNA甲基转移酶（DNMT）、甲基结合结构域（MBD）蛋白MBD2和MeCP2的影响.方法 不同浓度ISA作用于U266细胞株12、24、48和60 h,MTT法检测细胞的增殖活性,并计算药物作用24 h相应IC50.以IC50 作用U266细胞24 h后,检测细胞周期;荧光定量PCR分析基质金属蛋白酶-2（MMP-2）基因、抗凋亡基因bc1-2、bcl-xl以及DNMT、MBD2、MeCP2 mRNA的改变表达.分别用流式细胞术和Western blotting检测MMP-2和MBD2蛋白的变化.结果 TSA对U266细胞增殖的影响具有时间和剂量依赖性.作用24h的JC50为0.07μmol/L.TSA可将细胞阻滞于G0/G1期,细胞增殖指数（49.90±0.39）%,与对照组的（55.78±0.49）%相比差异有统计学意义（P〈0.01）.TSA作用后,MMP-2、bcl-2、bcl-xl 2-△△Ct 分别为：0.71±0.06、5.04±0.92、2.95±0.35,与对照组相比P〈0.05,TSA作用可以逆转DNMT、MBD2和MeCP2转录.结论 TSA可通过干扰细胞周期,将U266细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制细胞增殖,促进凋亡的发生,该作用可能是通过改变细胞甲基化调节蛋白的表达而实现.
- 许闪闪何丽梅李智翁文浩于慧
- 关键词：多发性骨髓瘤DNA甲基转移酶细胞周期曲古霉素A
