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TAT-乙肝病毒靶向核糖核酸酶融合蛋白原核载体的构建及表达被引量：17: 2003年; 目的:构建蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)TAT和乙肝病毒靶向核糖核酸酶(targeted ribonuclease,TR)融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达。方法:将已构建的乙肝病毒靶向核糖核酸酶基因、乙肝病毒核心蛋白(HBV core protein,HBVc)基因、人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(human eosinophil derived neurotoxin,hEDN)基因,克隆人含PTD TAT的pTAT原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内,以IPTG诱导融合蛋白表达。表达产物用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定。结果:成功地构建了乙肝病毒靶向核糖核酸酶及其两个对照的融合蛋白原核表达载体,并在IPTG诱导下获得特异性表达。结论:Tat-乙肝病毒靶向核糖核酸酶融合蛋白的构建,为体内应用靶向核酸酶治疗乙型肝炎奠定了基础。; 丁劲刘军薛采芳李英辉宫卫东; 关键词：融合蛋白原核载体

带有蛋白转导域的靶向核糖核酸酶对乙型肝炎病毒复制的影响被引量：1: 2004年; 究表达并纯化了带有蛋白转导域HIV-TAT的靶向核糖核酸酶,将其加入到2.2.15细胞的培养上清液中,观察其对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响及对细胞有无毒性,以便为靶向核糖核酸酶用于临床治疗HBV感染奠定基础.; 刘军丁劲薛采芳李英辉宫卫东赵亚黄豫晓; 关键词：蛋白转导乙型肝炎病毒复制重组蛋白

靶向核糖核酸酶对乙型肝炎病毒复制的作用: 2004年; 通过定量检测上清液中的乙型肝炎e抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA),进一步研究靶向核糖核酸酶对HBV复制的影响.; 刘军李英辉薛采芳丁劲宫卫东赵亚黄豫晓; 关键词：病毒复制乙型肝炎病毒聚合酶链反应

HIV-Tat蛋白转导域在医学研究中的应用被引量：12: 2003年; HIV Tat蛋白转导域 (proteintransductiondomain ,PTD)是新近发现的一种在蛋白转导过程中能高效穿过生物膜的结构域 ,它能将与其共价连接的多肽、蛋白质及DNA等分子跨膜导入几乎所有的组织和细胞 ,甚至可以通过血脑屏障 ,转导效率很高而且对细胞没有损伤。TAT融合蛋白系统被认为是一种很有前途的运载工具。; 丁劲马斌刘军薛采芳; 关键词：生物膜运载工具目的蛋白

Tat-p53融合蛋白的表达、纯化及其转导活性被引量：4: 2005年; 目的:原核表达野生型p53与TatPTD(proteintransductiondomain)的融合蛋白,检测TatPTD介导p53进入肝细胞的效率。方法:利用RT-PCR方法从A549细胞系中分离野生型p53基因,将该基因分别克隆入pTAT-HA和pET-32a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内诱导表达并进行纯化。以纯化的p53蛋白经腹腔免疫BALB/c小鼠,制备高效价的抗血清。将Tat-p53融合蛋白加入HepG2细胞培养上清,利用间接免疫荧光法检测Tat-p53融合蛋白导入HepG2细胞的效率。结果:成功地构建了含有野生型p53基因的原核表达载体,表达纯化了Tat-p53融合蛋白及p53蛋白,制备p53特异的抗血清,证实Tat-p53可以高效的转入HepG2细胞内。结论:Tat-p53融合蛋白的表达纯化及活性分析,为应用Tat-p53融合蛋白治疗肝癌的实验研究奠定了基础。; 丁劲刘军黄豫晓李英辉陈俊赵亚薛采芳; 关键词：TAT 蛋白转导域活性分析野生型P53基因纯化原核表达载体

重组腺病毒载体介导的靶向核糖核酸酶抑制乙肝病毒的复制: 目的:研究重组腺病毒载体介导的靶向核糖核酸酶(HBV核心蛋白与人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素的融合蛋白)对乙肝病毒复制的影响。方法:首先将已经构建好的下列基因克隆入腺病毒穿梭质粒:带有柔性连接区的靶向核糖核酸酶(TR-L)...; 刘军宫卫东赵亚李英辉丁劲黄豫晓薛采芳; 关键词：乙肝病毒重组腺病毒; 文献传递

HBV靶向核糖核酸酶基因的原核表达和纯化及多克隆抗体的制备被引量：9: 2005年; 目的:旨在获得HBV靶向核糖核酸酶,并制备其兔的多克隆抗体。方法:将构建好的HBV靶向核糖核酸酶基因克隆入原核表达载体pET32a(+),转化入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达并经Ni2+亲和层析纯化。通过SDS PAGE和Westernblot鉴定后,用纯化的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体,并以复性的蛋白作为抗原,用ELISA测定抗体的效价。结果:成功地纯化和复性了HBV靶向核糖核酸酶,获得了较高效价的抗血清。结论:获得纯化并复性的HBV靶向核糖核酸酶和多克隆抗体,为进一步研究奠定了基础。; 李英辉刘军赵亚薛采芳丁劲黄豫晓; 关键词：原核表达多克隆抗体

HBV-TR重组腺病毒载体的构建被引量：6: 2004年; 目的 :构建乙肝病毒靶向核糖核酸酶 (HBVtargetedribonuclease,TR)基因的重组腺病毒载体 .方法 :将HBV TR基因及其对照组基因分别克隆入质粒载体pDC31 6得到pDC31 6 /TR等穿梭质粒 ,然后将所得的穿梭质粒和辅助质粒pBHGlox(delta)E1 ,3Cre以磷酸钙法共转染HEK2 93细胞得到重组腺病毒Ad/TR及对照组重组病毒 ,并以空斑形成实验(PlaqueAssay)测定病毒滴度 .结果 :成功构建了HBV TR重组腺病毒载体Ad/TR及其对照组病毒并获得了高滴度的病毒颗粒 .结论 :HBV; 赵亚宫卫东刘军李英辉丁劲薛采芳; 关键词：肝炎病毒乙型腺病毒载体

HBV靶向核糖核酸酶及突变体的原核表达和RNase活性分析: 目的研究原核表达的HBV靶向核糖核酸酶(HBV核心蛋白与人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素的融合蛋白)及其突变体(点突变失去核酸酶活性)的RNase活性。方法首先,将构建好的靶向核糖核酸酶(TR)及突变体(TRm)基因克隆入原...; 李英辉刘军薛采芳丁劲赵亚黄豫晓宫卫东; 关键词：原核表达; 文献传递

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