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B细胞刺激因子受体融合蛋白改善BXSB狼疮鼠病变的研究被引量：1: 2010年; 目的观察腹腔注射B细胞刺激因子受体融合蛋白（BAFF—R—IgG4mut）对狼疮鼠病变的影响。方法100μl的磷酸盐缓冲液（PBS）、200μg人IgG4和100μgBAFF—R—IgG4mut融合蛋白分别经腹腔注入10周龄BXSB狼疮鼠，每周注射3次，共注射5周。分别检测狼疮鼠外周血BAFF水平、外周血和脾脏组织中B220^＋CD5^-B细胞、CD3^＋CD4^-CD8^＋T细胞和CD3^＋CD4^＋CD8^-T细胞的表达，检测尿蛋白、IgG型抗双链DNA（dsDNA）抗体、肾脏病理损伤指标和狼疮鼠的存活率。以方差分析和，检验进行数据统计。结果实验组9、10、12、15周龄鼠外周血BAFF水平分别是（2．0±1．6）ng/ml、（4．1±2．2）ng／ml、（3．7±1．9）ng／ml、（3．9±1．8）ng／ml，较对照组下降（P〈0．01）；外周血、脾脏组织中B220^＋CD5^-细胞比率较对照组下降（P〈0．01），蛋白尿、IgG型抗dsDNA抗体产生减少，IgG在肾组织沉积及肾组织病理损伤较对照组明显减轻（P〈0．01），存活率较对照组延长（P〈0．01）。结论BAFF—R～IgG4mut融合蛋白改善BXSB狼疮鼠病变。; 丁涵露王莉倪兵高闻达钟雪梅; 关键词：狼疮肾炎 BXSB狼疮鼠

人IL35-IgG4(Fc)融合蛋白在CHO／DG44细胞中的稳定表达被引量：2: 2009年; 本研究利用基因重组技术构建人IL35-IgG4(Fc)融合基因真核表达载体,稳定转染CHO/DG44细胞并检测重组蛋白的表达。主要采用聚合酶链式反应(PCR)从脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导的人髓性白血病细胞株KG-IcDNA文库中克隆EBI3和IL-12p35cDNA,重叠PCR法连接2个片段,并克隆到IgG4(Fc)-pOptiVECTM-TOPO载体上,对新构建的IL-35-IgG4(Fc)pOptiVECTM-TOPO真核表达载体并进行酶切、测序、PCR鉴定;脂质体法转染CHO/DG44细胞;RT-PCR检测转染结果,采用a-MEM-培养基筛选实验组细胞,对筛选的阳性克隆细胞再进行氨甲喋呤(Methotrexate,MTX)的加压筛选,ProteinG-Agarose纯化阳性克隆培养上清,免疫印迹检测目的蛋白表达。结果显示IL-35-IgG4(Fc)pOptiVECTM-TOPO表达载体稳定转染CHO/DG44细胞并获得阳性克隆;SDS-PAGE电泳得到一条与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带;该蛋白能与羊抗人IgG4抗体特异结合。本实验获得了能够稳定表达具有稳定结构的IL35-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞株。; 唐静高闻达张青张大为陈洋何波刘全胜; 关键词：重叠PCR 稳定转染

适用于实验小鼠基因分型的鼠尾DNA提取试剂盒及其应用: 本发明公开一种简捷、经济、可靠的鼠尾DNA提取试剂盒，适用于实验小鼠基因型的准确鉴定。该试剂盒包括A液和B液，其中A液由终浓度为0.025N的NaOH溶液和终浓度为2mM的EDTA溶液组成，B液为终浓度为40mM的Tri...; 严军高闻达蒋建新王海燕杨策顾玮曾灵杜娟

人IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白在CHO/DG44细胞中的表达: 2009年; 【目的】构建人白细胞介素32(IL-32)和IgG4 Fc段的融合基因真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOp-tiVEC,建立稳定转染的中华仓鼠卵巢细胞(CHO/DG44)克隆,并检测其重组蛋白的表达。【方法】用PCR方法从脂多糖(LPS)激活的人CD4+T细胞cDNA中扩增出IL-32蛋白基因,并克隆到IgG4(Fc)-pOptiVEC载体上,构建重组质粒IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC,并进行酶切和测序鉴定。采用脂质体法,将重组质粒线性化后转染CHO/DG44细胞,进行RT-PCR检测,筛选阳性克隆,并对筛选的阳性克隆进行氨甲喋呤(MTX)加压筛选。利用ProteinG-Agarose亲和层析纯化转染CHO/DG44细胞培养上清液中的融合蛋白IL-32-IgG4(Fc),通过SDS-PAGE、Western-blot对融合蛋白IL-32-IgG4(Fc)的表达和生物学活性进行检测。【结果】PCR扩增获得了长度为564 bp的人IL-32蛋白基因cDNA,经测序与GenBank报道的序列一致。真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,获得了IL-32蛋白基因片段,其长度为564 bp。筛选出了能稳定表达IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆。亲和纯化后的IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,其分子质量约为50.0 ku,与预期结果一致。MTX加压后,IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的表达量明显升高。【结论】成功构建了人IL-32蛋白融合基因的真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC,获得了能够表达具有生物学活性的IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆。; 张大为高闻达张青唐静陈洋刘全胜; 关键词：融合蛋白真核表达

BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠B淋巴细胞的影响: 2010年; 目的研究BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠B淋巴细胞的影响。方法体外观察BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BAFF刺激的B细胞活性的影响;100μl的PBS、200μg人IgG4和100μg BAFF-R-IgG4mut融合蛋白分别经腹腔注射10周龄雄性BXSB狼疮鼠,每周注射3次,共注射5周。分别检测狼疮鼠外周血BAFF水平、外周血和脾脏组织中B220+CD5-、CD3+CD4-、CD8+T和CD3+、CD4+、CD8-T细胞的表达以及狼疮鼠的存活率。结果BAFF-R-IgG4mut融合蛋白组外周血BAFF以及外周血、脾脏组织中B220+CD5-细胞较对照组下降(P<0.01),实验组狼疮鼠存活率较对照组延长(P<0.01)。结论BAFF-R-IgG4mut融合蛋白可抑制BXSB狼疮鼠B细胞活性。; 丁涵露王莉倪兵高闻达钟雪梅; 关键词：狼疮性肾炎 B细胞刺激因子 B淋巴细胞

适用于实验小鼠基因分型的鼠尾DNA提取试剂盒及其应用: 本发明公开一种简捷、经济、可靠的鼠尾DNA提取试剂盒，适用于实验小鼠基因型的准确鉴定。该试剂盒包括A液和B液，其中A液由终浓度为0.025N的NaOH溶液和终浓度为2mM的EDTA溶液组成，B液为终浓度为40mM的Tri...; 严军高闻达蒋建新王海燕杨策顾玮曾灵杜娟; 文献传递

人BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠CD4^+T细胞增殖活性的影响被引量：1: 2011年; 目的观察人BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠CD4+T淋巴细胞增殖活性的影响。方法体外分离、纯化BXSB狼疮鼠脾脏CD4+T细胞,流式细胞技术检测CD4+T细胞BAFF-R表达,MTT法观察不同剂量BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BAFF刺激的CD4+T细胞增殖活性的影响。结果台盼蓝染色分离后的BXSB狼疮鼠脾脏CD4+T细胞活性率为(93.6±3.2)%;流式细胞技术检测BXSB狼疮鼠脾脏CD4+T细胞表达BAFF-R;100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml BAFF-R-IgG4mut蛋白作用于BAFF和CD3抗体刺激的CD4+T细胞后,CD4+T细胞增殖抑制率分别是56.24%、67.07%和75.45%,较单纯BAFF+CD3抗体组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BAFF-R-IgG4mut融合蛋白可体外抑制BXSB狼疮鼠CD4+T细胞增殖活性。; 丁涵露王莉倪兵高闻达钟雪梅; 关键词：B细胞刺激因子 CD4+T淋巴细胞

hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白在DG44细胞中的表达: 2009年; 目的以pOptivec为载体,以DG44细胞为宿主细胞在贴壁培养条件下表达hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白。方法将重组质粒hTNFR(p75)-IgG4-pOptivec线性化后转染DG44细胞,经筛选得到稳定表达hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白的DG44细胞克隆。培养上清经ProteinG亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。然后对稳定表达目的蛋白的细胞株进行不同浓度的MTX加压以扩增目的基因,检测不同MTX加压条件下目的蛋白的表达量。结果重组质粒成功转染DG44细胞,经筛选后得到稳定表达目的蛋白的细胞株。经MTX加压后最高表达量达到15μg/mL培养基左右。结论hTNFR(p75)-IgG4融合基因片段在DG44细胞中成功表达,且其表达量能够满足实验研究的需要,为下一步实验打下了良好的基础。; 张青张大为唐静高闻达刘全胜; 关键词：TNFR 融合蛋白真核表达

外源性糖皮质激素对调节性T细胞的影响: 严军高闻达王海燕顾玮杨策蒋建新

慢性间质性肾炎中NGAL的表达及其作用的研究被引量：10: 2006年; 目的了解慢性间质性肾炎(chron ic in terstitia l nephritis,C IN)患者肾组织中NGAL的表达及NGAL与肾小管-间质病理损害程度的关系。方法免疫组化观察正常肾组织和C IN患者肾组织NGAL的表达,以及NGAL阳性强度与小管-间质病理损害程度的关系。结果C IN患者肾组织表达NGAL较正常组增强;其小管NGAL阳性强度与小管-间质病理损害程度呈负相关。结论NGAL在C IN肾小管-间质病理损害中起重要作用。; 张建国丁涵露任姜汶高闻达; 关键词：慢性间质性肾炎 NGAL

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高闻达

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