高晖
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- Rb94对人肺腺癌细胞系A549放射增敏作用的实验研究被引量：4
- 2009年
- 目的构建人视网膜母细胞瘤基因（Rb94）真核表达载体，观察其对人肺腺癌细胞系A549的放射增敏作用并探讨其机制。方法构建重组表达质粒pIRES-Rb94，经脂质体转染A549细胞、G418筛选获得稳定转染的细胞系。细胞计数法绘制生长曲线、计算细胞倍增时间；实时RT—PCR检测hTERT、Bcl-2mRNA的表达；成克隆实验检测pIRES—Rb94对A549细胞放射敏感性影响，计算放射增敏比（SER）；流式细胞仪分析细胞周期。结果成功构建pIRES—Rb94质粒，转染A549细胞后获得稳定转染细胞系pIPES-Rb94-A549。与A549细胞相比，pIRES-Rb94-A549细胞倍增时间延长（31．5h：39．5h；t=5．15，P〈0．01）；hTERT、Bcl-2mRNA表达下降（0．02：1．00；t=18．99，P〈0．01；0．01：1．00；t=13．73，P〈0．01）；G2＋M期细胞增加（35．91％：4．53％；t=36．78，P=0．00），G0＋G1期和S期细胞减少（47．02％：74．07％；t=11．71，P=0．00和17．07％：22．32％；t=2．30，P〈0．05）；由D0值计算的SER为1．30。结论Rb94对A549细胞具有明显放射增敏作用，其机制可能是G2＋M期阻滞作用以及下调hTERT、Bcl-2mRNA表达，并可能通过调节细胞周期来影响细胞增殖。
- 刘芳程玉峰马道新高晖王建波张萍郭颖
- 关键词：A549细胞
- 重组表达载体plRES-Rb94的构建及其对肺腺癌A549细胞株中SphK表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的构建真核表达质粒pIRES-Rb94,观察Rb94基因对鞘氨醇激酶(SphK)表达的影响。方法根据Rb94基因序列设计、合成引物,构建以内部核糖体进入位点(IRES)相连的Rb94基因的真核表达质粒pIRES-Rb94,经脂质体转染A549细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。采用Real-time RT-PCR和Western boltting法检测Rb94基因并观察其对人肺腺癌A549细胞株SphK表达的影响。结果成功构建重组表达质粒pIRES-Rb94,转染A549细胞后获得稳定转染细胞株pIRES-Rb94-A549,该细胞株中Rb94基因高效表达;SphK1表达下调而SphK2表达上调。结论真核表达质粒pIRES-Rb94构建成功并可有效转染A549细胞,Rb94基因抑制SphK1的表达,增强SphK2的表达。
- 刘芳马道新谭炳煦高晖王建波张萍郭颖程玉峰
- 关键词：基因质粒杂合子检测A549细胞
- 利用RNAi技术抑制Bcl-2基因表达增强肺腺癌A549细胞放射敏感性被引量：3
- 2009年
- 目的利用RNAi技术抑制Bcl-2基因的表达,观察其对肺腺癌A549细胞凋亡和放射敏感性变化的影响。方法构建Bcl-2基因的干扰质粒pBcl-2-siRNA,稳定转染人肺腺癌A549细胞,同时设立转染无意义链组、空载体组和未转染组。采用Real time RT-PCR和Western blot方法,观察Bcl-2基因在mRNA和蛋白水平表达的变化。采用流式细胞术和克隆形成方法,检测RNA干扰对A549细胞放射敏感性的影响。结果成功构建bcl-2 siRNA质粒,转染A549细胞,获得稳定转染细胞株A549/Bcl2-Ins;Bcl-2mRNA、Bcl-2蛋白表达明显降低;A549/Bcl2-Ins凋亡率[(10.11±0.92)%]明显高于对照组,6Gy X线照射后凋亡率[(28.81±1.10)%]明显高于对照组及未照射组;A549/Bcl2-Ins的D0和Dq值分别为1.399和1.298,明显低于转染无意义序列细胞株A549/Bcl2-Neg(1.695和2.480)、转染空载体细胞株A549/SD(1.706和2.227)和空白对照细胞A549(1.816和2.777)。结论RNAi技术可以有效抑制肺腺癌A549细胞Bcl-2基因的表达,增强A549细胞对X线的放射敏感性。
- 高晖刘芳马道新程玉峰
- 关键词：基因辐射耐受性RNA干扰
