高同斌
- 作品数：13 被引量：4H指数：1
- 供职机构：上海市儿童医院更多>>
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- 碱性成纤维细胞生长因子和Noggin诱导人羊水来源干细胞向神经细胞分化的差异比较被引量：1
- 2009年
- 背景:相对于成体干细胞和胚胎干细胞自身存在的问题,羊水来源的干细胞系的建立,能为每一个个体建立一份自身的、具有高度增殖分化能力的干细胞储备,有望成为神经性退行性疾病细胞治疗的理想细胞来源。目的:观察Noggin和碱性成纤维细胞生长因子对人羊水来源干细胞向神经细胞分化的影响。方法:羊水标本来自怀孕16～22周行产前诊断的孕妇,在超声引导下行羊膜腔穿刺取得。利用CD117抗体,选用免疫磁珠法从人孕中期羊水标本中分离获得羊水干细胞,培养扩增后,通过流式细胞仪检测表面抗原表达进行鉴定。选取生长状态良好的第3代羊水干细胞,利用无血清的神经诱导培养液诱导其向神经细胞分化,分为空白对照组、基础诱导液组、Noggin诱导组和碱性成纤维细胞生长因子诱导组。倒置相差显微镜观察诱导后细胞形态的变化,细胞免疫荧光检测巢蛋白、β-Ⅲtubulin和神经丝蛋白在诱导后细胞中的表达。结果与结论:利用免疫磁珠方法分离出的羊水干细胞呈CD44和HLA-ABC表达阳性,CD45和HLA-DR表达阴性。诱导2周后,碱性成纤维细胞生长因子诱导组光镜下细胞形态发生显著变化,免疫荧光染色巢蛋白、β-Ⅲtubulin和神经丝蛋白表达阳性率较高。Noggin诱导组细胞形态和染色结果与基础诱导液组无显著性差异。提示利用羊水来源的干细胞诱导分化为神经细胞的过程中碱性成纤维细胞生长因子的作用远优于Noggin。
- 张胜利陈柏松吴齐全马晓荣高同斌陈方周君梅
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子神经细胞诱导分化
- 荧光纳米颗粒NaYF_4:Yb,Er作为显像介质的生物相容性
- 2011年
- 目的检测上转频荧光纳米颗粒的生物学体内、外相容性,证实其作为显像介质的生物安全性。方法将培育后的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)、胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)及成肌细胞(C2C12)分别与不同浓度(0、10、50、100、200μg/mL)的NaYF4:Yb,Er共孵育,采用MTT法检测细胞的增殖活性,并测定C2C12成肌细胞形成肌管细胞的功能。将NaYF4:Yb,Er纳米颗粒DMEM混悬液注射入C57BL/6小鼠,行小鼠肝肾功能测定;并对重要脏器行HE组织学染色,检测小鼠的体内毒性。结果 MTT法细胞毒性检测显示,NaYF4:Yb,Er纳米颗粒对NIH/3T3和C2C12的毒性呈剂量与孵育时间正相关性(NIH/3T3:r=0.974,P<0.05;C2C12:r=0.996,P<0.05);而对BMSC的毒性并没有表现出剂量与孵育时间具有相关性(r=-0.218,P>0.05)。NaYF4:Yb,Er纳米颗粒孵育48h后,对C2C12成肌细胞形成肌管细胞功能未见明显影响。小鼠被注射NaYF4:Yb,Er纳米颗粒DMEM混悬液2、4周后,肝肾功能及重要脏器均未见明显损伤。结论 NaYF4:Yb,Er纳米颗粒作为具有强荧光强度的显影介质,在体内、外显影需求浓度下对细胞毒性及全身各重要器官的损伤均在安全范围内,是一种优秀的生物成像显影介质。
- 虞永江马晓荣于国鹏高同斌齐隽陈方
- 关键词：ER生物相容性
- 人羊水来源干细胞参与小鼠损伤肌肉修复的实验研究
- 2011年
- 目的研究人羊水来源干细胞(human amniotic fluid colony derived stem cells,hAFCSCs)是否参与小鼠肌肉损伤修复过程,探讨应用hAFCSCs治疗肌肉损伤的方法及可行性。方法 B超引导下穿刺抽取人孕中期羊水,体外分离、培养得到hAFCSCs,取第6～8代细胞备用,同时提取总RNA行RT-PCR鉴定干细胞相关基因。取16只6～8周龄Nod/Scid小鼠,体重20～24 g,利用心肌毒素联合X线照射建立双侧胫骨前肌肌肉损伤模型,右侧胫骨前肌内注射hAFCSCs(3.3×107个/mL)30μL作为实验组,左侧胫骨前肌同法注射等量完全培养液(含15%FBS、18%Chang B、2%Chang C、1%青链霉素、1%L-谷氨酰胺的α-MEM培养基)作为对照组。细胞移植术后2、4周各处死小鼠8只,取材行肝细胞生长因子受体(c-Met)、成肌调节因子(Myf-5)、层粘连蛋白(Laminin)、结蛋白(Desmin)与人特异性细胞核有丝分裂器(NuMa)组织免疫双重荧光染色观察。结果原代hAFCSCs培养5～7 d后可见细胞克隆形成;8～10 d后可挑取细胞形态均一的克隆进行稳定传代,6～8代后可获得足量的干细胞。RT-PCR检测示所获得hAFCSCs体外扩增培养至第6代仍表达干细胞相关基因。细胞移植术后2周免疫双重荧光染色示,实验组胫骨前肌内检测到NuMa表达,未检测到hAFCSCs表达肌源性细胞相关表型;术后4周,实验组胫骨前肌内检测到NuMa表达,部分细胞同时表达NuMa和c-Met、Myf-5,部分肌纤维同时表达NuMa和Desmin、Laminin。术后2、4周,对照组胫骨前肌均未检测到NuMa表达。结论 hAFCSCs体外培养后移植到小鼠肌肉损伤部位,可参与损伤肌肉的修复过程。
- 马晓荣张胜利尚亚峰高同斌王雪陈方周君梅
- 关键词：细胞治疗骨骼肌损伤小鼠
- 人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞诱导的体外实验研究
- 2010年
- 目的 探讨成肌细胞条件培养液体外诱导人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞分化的可行性.方法 B超引导下穿刺抽得孕中期羊水,体外培养、分离得到羊水来源间充质干细胞.鼠成肌细胞体外培养后收集上清液,检测上清液中半乳糖凝集素-1（Galectin-1）含量,并制备成肌细胞条件培养液.实验组于成肌细胞条件培养液中培养,对照组于成肌细胞诱导培养液中培养.观察2组细胞形态学变化,免疫荧光染色、RT-PCR检测成肌细胞特异性标志物Pax7、MyoD、肌结蛋白（Desmin）、肌钙蛋白Ⅰ（Tn Ⅰ）及mRNA表达情况.结果 倒置相差显微镜下可见实验组细胞诱导第18天出现折光性强、体积较小的细胞,呈多角形,并带有突起,且逐渐成长条形;可见少量多核细胞.对照组细胞呈扁平多角形,胞体较大.诱导24 d免疫荧光染色及RT-PCR提示实验组细胞不同程度表达Pax7、MyoD、Desmin、TnⅠ及mRNA;对照组呈阴性.成肌细胞培养上清液中半乳糖凝集素-1含量较低.结论 成肌细胞条件培养液能诱导人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞样细胞分化.
- 马晓荣张胜利吴齐全高同斌周君梅陈方
- 关键词：间充质干细胞条件培养液分化细胞治疗
- 一种新生儿组织工程膀胱片及其制备方法
- 本发明涉及医学组织工程技术领域，尤其涉及一种新生儿组织工程膀胱片及其制备方法。本发明提供了一种新生儿组织工程膀胱片，其特征在于其包含分化而来的平滑肌样细胞和可降解支架材料；所述平滑肌样细胞包绕可降解支架材料，呈片状；所述...
- 陈方周君梅高同斌
- 文献传递
- 纳米材料NaYF4:Yb,Er基于前列腺癌细胞水平生物成像的实验研究
- 本文研究上变频荧光纳米颗粒NaYF4：Yb，Er的生物学相容性，以及基于前列腺癌细胞水平生物成像的实验方法和效果。
- 虞永江马晓荣于国鹏高同斌齐隽
- 关键词：纳米材料前列腺癌细胞水平生物成像
- 应用5-杂氮脱氧胞苷诱导人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞样细胞分化的体外研究
- 2010年
- 目的 探讨5-氮杂脱氧胞苷（5-AzaC）体外诱导人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞样细胞分化的可行性.方法 B超引导下穿刺抽得孕中期羊水,体外分离、培养得到羊水来源间充质干细胞,传代后计数细胞并绘制生长曲线.体外成骨、成脂诱导观察人羊水来源间充质干细胞多向分化能力.采用5-AzaC对羊水来源间充质干细胞成肌诱导2周,观察细胞形态学变化,RT-PCR、免疫荧光染色方法鉴定成肌细胞特异mRNA及蛋白表达.结果 人羊水来源间充质干细胞体外培养后迅速进入对数生长期,培养7 d未达到平台期.茜素红和油红O染色证实人羊水来源间充质干细胞可诱导分化为成骨、成脂细胞样细胞.人羊水来源间充质干细胞经5-AzaC诱导2周逐渐变长梭形.而对照组细胞呈扁平多角形.免疫荧光染色及RT-PCR结果提示实验组细胞表达肌结蛋白（Desmin）、肌钙蛋白I（Tn I）、横纹肌辅肌动蛋白（α-Actinin）及mRNA;对照组呈阴性.结论 人羊水来源间充质干细胞体外增殖能力强,能分化为成骨、成脂细胞样细胞.5-AzaC能在体外诱导人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞样细胞分化.
- 马晓荣张胜利尚亚峰吴齐全高同斌王雪周君梅陈方
- 关键词：细胞分化骨骼肌
- 人羊水来源干细胞以类胚体样结构形式向心肌样细胞分化的可行性被引量：1
- 2011年
- 目的 探讨人羊水来源干细在体外以类胚体形式向心肌样细胞分化的可行性.方法 在B型超声引导下穿刺抽得孕中期羊水,体外分离、培养得到羊水来源干细胞.取第四代细胞消化计数,悬滴法培养5d后,采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测干细胞相关mRNA表达情况；更换诱导培养液以贴壁培养方法诱导类胚体细胞向心肌样细胞分化2周.RT-PCR、免疫荧光染色方法鉴定心肌细胞特异mRNA及蛋白的表达.结果人羊水来源干细胞体外悬滴培养后24h即可形成类胚体样结构；类胚体样结构直径随培养时间逐渐增大,第5天时,类胚体样结构平均直径为（237.3±26.7）μm,形成率为93.5％；RT-PCR检测到干细胞相关mRNA表达；类胚体形式下,经诱导后,免疫荧光染色检测类胚体中羊水来源干细胞表达心肌细胞部分表型：肌结蛋白（Desmin）、肌钙蛋白Ⅰ（TnⅠ）和横纹肌辅肌动蛋白（α-Actinin）；RT-PCR检测类胚体中羊水来源干细胞表达心肌细胞相关mRNA：肌结蛋白（Desmin）、肌动蛋白（α-Actin）、肌钙蛋白I（TnⅠ）、肌钙蛋白T（Tn T）、T-box、NK2.5.而对照组呈阴性.结论人羊水来源干细胞体外悬滴培养后可形成形态均一的类胚体样结构.5-氮杂脱氧胞苷（5-Aza）能诱导类胚体样结构中的羊水来源干细胞向心肌样细胞分化.
- 马晓荣谢华张胜利高同斌王雪尚亚峰周君梅陈方
- 关键词：干细胞心肌细胞分化
- 人羊水克隆样细胞来源干细胞与生物可降解材料体内外构建组织工程膀胱平滑肌的实验研究
- 目的：探讨孕中期羊水作为一种新的干细胞来源的可行性以及体外高效地诱导人羊水克隆样细胞来源干细胞向平滑肌样细胞的诱导分化，评估细胞与聚羟基乙酸(polyglycolic acid，PGA)支架复合物的生物相容性，由此探讨该...
- 高同斌
- 关键词：干细胞来源生物可降解材料组织工程膀胱
- 一种新生儿组织工程膀胱片及其制备方法
- 本发明涉及医学组织工程技术领域，尤其涉及一种新生儿组织工程膀胱片及其制备方法。本发明提供了一种新生儿组织工程膀胱片，其特征在于其包含分化而来的平滑肌样细胞和可降解支架材料；所述平滑肌样细胞包绕可降解支架材料，呈片状；所述...
- 陈方周君梅高同斌
