韩兵
- 作品数：4 被引量：18H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军总医院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人成纤维细胞生长因子7的基因克隆和蛋白鉴定被引量：8
- 2007年
- 目的:构建人成纤维细胞生长因子7的重组原核表达质粒pGEX-4T-3-FGF7,并诱导其基因在大肠杆菌DH5α中大量表达,纯化蛋白并检验生物学活性。方法:实验于2006-12在本实验室完成。采用逆转录-聚合酶链反应技术,从人皮肤成纤维细胞内扩增编码人成纤维细胞生长因子7的cDNA序列,以DNA重组技术将获得的目的基因片段连接至原核表达载体pGEX-4T-3上,经抗生素筛选挑取阳性克隆扩增后,提取DNA进行酶切鉴定和测序。同时应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹方法对其表达产物进行特异性鉴定。超滤纯化蛋白后以四甲基偶氮唑盐法测定其在不同浓度作用下对人表皮角化细胞系生长的影响。结果:克隆出的成纤维细胞生长因子7基因的cDNA包括翻译起始密码子、编码序列和终止密码子等部分,含有成纤维细胞生长因子7基因的cDNA的表达质粒pGEX-4T-3-hFGF7在DH5α细菌体内能够表达,并且随着诱导时间的延长,成纤维细胞生长因子7基因的表达量增加,重组人成纤维细胞生长因子7蛋白主要存在于包涵体中。在所测浓度范围内该蛋白可以剂量依赖模式促进人表皮角化细胞系细胞在体外分裂增殖。结论:人成纤维细胞生长因子7基因可以在原核细胞中获得表达并具有促角质细胞增殖的生物活性,为深入研究该蛋白在皮肤创伤愈合中的具体作用奠定了基础。
- 韩兵陈伟付小兵
- 关键词：原核表达载体克隆纯化
- 皮肤溃疡中血小板源性生长因子及其受体基因表达的变化被引量：3
- 2007年
- 目的:观察血小板源性生长因子(PDGF)两亚基(PDGF-A和PDGF-B)和两种受体(PDGFR-α和PDGFR-β)在正常皮肤和溃疡组织中基因表达和蛋白含量变化的规律,探讨其与溃疡形成的关系。方法:收集8例难愈性皮肤溃疡患者的溃疡组织和正常皮肤组织,提取各组织的总RNA后,分离mRNA,用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测PDGF-A、PDGF-B、PDGFR-α和PDGFR-β基因在不同组织中的表达量。结果:在正常皮肤组织内,PDGFR-α和PDGFR-β的基因表达较强,分别为(12.1±2.6)%和(13.8±4.6)%,而在溃疡组织中这两种受体的基因表达水平显著降低,分别为(5.0±1.2)%和(4.7±1.7)%,差异均有显著性(P均<0.05)。溃疡组织中PDGFR-α和PDGFR-β的基因表达量分别是正常皮肤的41.3%和34.1%;而PDGF-A和PDGF-B基因表达水平在正常皮肤和溃疡组织内差异不显著(P均>0.05)。结论:溃疡创面难愈性修复可能与PDGFR-α和PDGFR-β基因表达水平下降,引起PDGF与受体结合发生障碍相关。
- 韩兵付小兵陈伟
- 关键词：血小板源性生长因子受体溃疡皮肤组织
- 烧伤大鼠血清对不同来源间质干细胞的趋化作用被引量：5
- 2007年
- 目的了解间质干细胞（MSC）的来源，观察烧伤大鼠血清对不同来源MSC的趋化作用。方法将72只大鼠采用完全随机法分成烧伤组（36只，制作背部30％TBSAⅢ度烧伤模型）、假伤组（36只，37℃模拟致伤）。从两组大鼠骨髓、外周血中分离并培养MSC，在倒置显微镜下观察各组MSC的阳性率，比较其生长速度和细胞形态。同时观察不同血清对MSC的趋化作用及不同来源MSC的迁移能力。结果两组大鼠的骨髓内均培养出贴壁生长的MSC。烧伤组12只大鼠外周血中有7只培养出MSC，其阳性率（58％）明显低于骨髓培养（100％，P＜0．05）。假伤组大鼠的外周血内未见MSC（P＜0．05）。倒置显微镜下可见原代接种后24h有少量贴壁细胞，2～3d后见其生长，散在贴壁，大多呈梭形。各组MSC形态无明显差异，均呈纺锤形生长。烧伤大鼠血清处理的假伤组骨髓MSC的迁移数[（94±11）个／高倍视野]明显多于正常大鼠血清和胎牛血清处理者[（37±6）、（38±11）个／高倍视野，P＜0．01]，后两者处理的MSC迁移数相近（P＞0．05）。假伤组大鼠骨髓MSC被不同血清趋化时迁移的细胞数明显少于烧伤组大鼠骨髓和外周血MSC（P＜0．05或0．01）。烧伤组大鼠骨髓MSC与外周血MSC的迁移能力虽有差异，但无统计学意义（P＞0．05）。结论烧伤大鼠骨髓及外周血均能分离到MSC，而正常大鼠仅骨髓能分离到MSC。烧伤大鼠血清对MSC有较强的趋化作用。烧伤大鼠来源的MSC比正常大鼠来源的MSC具有更强的迁移能力。
- 韩冰付小兵韩兵雷永红陈伟孙同柱
- 关键词：烧伤间质干细胞血清趋化作用
- 体外诱导表皮细胞去分化的初步实验研究被引量：2
- 2007年
- 目的建立表皮细胞去分化体外模型,探索与去分化过程有关的信号通路。方法分离培养人表皮细胞,分别用双氧水、ERK阻断剂PD98059加双氧水处理细胞,采用免疫细胞化学染色法和Western blot法检测不同方式处理后表皮细胞表型的变化情况,Western blot法检测双氧水处理后ERK信号通路相关蛋白的表达情况。结果双氧水处理后,表皮细胞干细胞标志物(CK19、β1整合素、Oct4和p63)表达增加,分化细胞标记物(CK10)表达减少,ERK信号通路中相关的磷酸化蛋白表达增强。以PD98059阻断ERK通路的活化后,双氧水诱导的表皮细胞表型逆转受到了抑制。结论ERK通路参与了双氧水诱导的表皮细胞去分化过程。
- 蔡飒付小兵孙同柱王君韩冰韩兵盛志勇
- 关键词：去分化表皮细胞有丝分裂素激活蛋白激酶类
