陈云松
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国海洋大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 转鲑鱼降钙素基因酵母及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种转鲑鱼降钙素基因酵母及其制备方法和应用，将鲑鱼降钙素在酿酒酵母这种真核系统中表达。酿酒酵母发酵技术成熟，表达量较高，而且酿酒酵母可以直接食用，得到的转化降钙素的酿酒酵母不需要纯化可以直接口服，从而降低了生...
- 张学成孙平楠臧晓南陈云松
- 文献传递
- 酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素多肽的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:实现酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素。方法:人工合成鲑鱼降钙素(Salmoncacitonin,sCT)编码基因,克隆到表面展示载体M-pYD1上。用NocI酶切重组质粒M-pYD1-sCT和空白质粒M-pYD1,回收sCT和V5表达框片段后分别以LiAC法转化酿酒酵母EBY100菌株,分别得到重组酵母yAGA2-sCT和yAGA2-V5。两种重组酵母分别经半乳糖诱导表达后,采用FITC荧光标记酵母表面展示的sCT和V5多肽,分别用荧光显微镜和流式细胞仪进行定性和定量分析。结果:诱导12h后,荧光显微镜下清晰观测到了工程菌表面有重组sCT,流式细胞分析结果表明10000个细胞中65.2%的yAGA2-sCT菌株表达了外源sCT,52.4%的yAGA2-V5菌株表达V5。结论:利用酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素多肽获得了成功,为口服型鲑鱼降钙素的研发奠定了基础。
- 孙平楠张学成陈云松臧晓南
- 关键词：酿酒酵母鲑鱼降钙素
- 口服转鲑鱼降钙素基因酵母的安全性评价
- 2009年
- 以小鼠为实验对象对表达鲑鱼降钙素的转基因酵母进行了毒理学实验,包括急性毒性实验、遗传毒性实验(小鼠骨髓微核实验、小鼠精子畸形实验)、传统致畸实验和大鼠30 d喂养实验.结果表明,急性毒性实验显示LD50>10.0 g/kg,属于实际无毒物质;遗传毒性实验结果均为阴性,显示无致突变性;致畸实验结果表明转鲑鱼降钙素基因酵母对小鼠不会产生母体毒性,对小鼠胚胎发育无影响且无致畸作用;30 d喂养实验中各项检测指标均无显著差异(p>0.05),组织病理切片检查未发现病理性变化.本文的结论是口服转鲑鱼降钙素基因酵母未对实验动物造成不良影响,是安全无毒的.
- 陈云松张学成姜勇高岩黄维清
- 关键词：鲑鱼降钙素酿酒酵母遗传毒性
- 转鲑鱼降钙素基因酵母的亚急性毒性实验
- 2007年
- 评价转鲑鱼降钙素基因酵母的安全性。取转基因酵母分别以高(5 g/kg)、中(0.5 g/kg)、低(0.1 g/kg)3种剂量组对大鼠连续灌胃给药,30 d后观察其行为,测试大鼠体重、血常规、生化指标及病理组织学观察。结果:转基因酵母各剂量组动物的一般状况、体重、主要脏器系数、血液学指标及血液生化指标,与正常对照组比较,均未见明显差异;病理检查未见与药物毒性相关的主要脏器组织形态学改变。转鲑鱼降钙素基因酵母对实验大鼠安全无毒,且在试验期内本试验所用剂量对于试验大鼠来说是安全的。
- 陈云松张学成孙平楠
- 关键词：鲑鱼降钙素酵母亚急性毒性
- 鲑鱼降钙素基因异源表达研究进展被引量：2
- 2008年
- 在不同来源降钙素中,鲑鱼降钙素的活性最高,在钙的代谢和治疗骨质疏松、Paget氏综合症、高钙血症等疾病中有巨大的药用价值。其C末端的酰胺化对它完整的生物活性起重要作用。本文综述了鲑鱼降钙素基因在大肠杆菌、链霉菌、乳酸杆菌和蓝藻等原核细胞,在酵母、昆虫、动植物等真核细胞中异源表达的研究进展,以及通过基因工程的方法能够改进生物表达系统,提高鲑鱼降钙素活性的动态。
- 张学成孙平楠陈云松
- 关键词：鲑鱼降钙素酰胺化
- 转鲑鱼降钙素基因酵母的发酵条件优化及安全性评价
- 降钙素是一种由32个氨基酸组成的多肽类激素,其蛋白结构的N端为二硫键,C端为脯氨酰胺基团。它在哺乳动物中起源于甲状腺C细胞,在鱼类中后腮体分泌。现在临床上广泛使用的是合成的人、鲑鱼降钙素,天然来源的猪降钙素和鳗鱼降钙素类...
- 陈云松
- 关键词：鲑鱼降钙素酿酒酵母转基因发酵条件优化安全性评价
- 以rDNA为同源重组位点酵母表达鲑鱼降钙素基因多拷贝整合载体的构建被引量：4
- 2009年
- 根据酵母整合质粒的设计要求,PCR扩增2.2 kb rDNA片段,导入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)整合载体pYD1中,设计并合成适合在酵母中表达的鲑鱼降钙素(Salmon Calcitonin),以此为目标基因,构建适合酿酒酵母多拷贝整合的表达载体p-r-sCT。通过载体p-r-sCT引入到酿酒酵母菌株EBY100中,得到酵母重组菌株yAGA2-r-sCT。流式细胞检测结果表明,目标基因鲑鱼降钙素在重组菌株的yAGA2-r-sCT中得到了表达,实现了外源基因在酿酒酵母菌株中的稳定表达。
- 姜勇张学成孙平楠陈云松
- 关键词：鲑鱼降钙素RDNA多拷贝整合流式细胞技术
