赵志强 作品数:74 被引量:171 H指数:7 供职机构: 兰州生物制品研究所有限责任公司 更多>> 发文基金: 国家科技支撑计划 国家高技术研究发展计划 甘肃省科技重大专项计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 理学 生物学 更多>>
C群脑膜炎球菌家兔免疫血清的制备及其群特异性和相关方法专属性分析 被引量:4 2014年 目的制备C群脑膜炎球菌家兔免疫血清,并进行群特异性和相关方法专属性分析。方法用制备的C群脑膜炎球菌菌液免疫青紫兰家兔,经耳缘静脉注射8×109个/ml菌液,0.5~1.0 ml/只,每周1、3、5免疫,共免疫4周,于第6周开始加强免疫,每周2次,连续3周,于末次免疫1周后,经颈动脉采血,分离血清,采用免疫双扩散法检测血清效价。采用ELISA、Western blot及火箭免疫电泳法分析其群特异性和相应方法专属性。结果建立了家兔免疫血清制备方法,制备的3份(1、2、3)免疫血清相应多糖抗体效价分别为1︰8、1︰8和1︰16。自制免疫血清1、3在使用工作浓度下,符合免疫学质量控制ELISA方法的特异性和专属性要求。自制免疫血清3可作为C群脑膜炎球菌结合物Western blot检测的Anti-PS血清,在该检测灵敏度下可完全达到与破伤风类毒素(TT)无交叉反应;血清1、2的轻微交叉反应可通过相应抗原预吸收血清消除,从而达到结合物Western blot检测的Anti-PS使用要求。自制3份免疫血清均可用于火箭免疫电泳分析。结论自制的家兔免疫血清可替代商品诊断血清,并达到了ELISA、Western blot及火箭免疫电泳法群特异性和相应方法专属性要求,可用于对C群脑膜炎球菌结合物制备过程的多糖抗原性分析及结合疫苗质量控制。 刘方蕾 吴兵 侯亚莉 杨英英 王晶 于旭博 范锋锋 孔素娟 袁菲 赵志强 谢贵林关键词:脑膜炎球菌 免疫血清 特异性 专属性 A、C、Y、W135群脑膜炎奈瑟菌血清抗体特异性体外杀菌试验方法的建立及其验证 被引量:1 2014年 目的建立A、C、W135和Y群脑膜炎奈瑟菌血清抗体特异性体外杀菌试验方法 (serum bactericidal assay,SBA),并进行验证。方法对SBA中活菌收获时间、靶菌的制备、反应时间及补体进行优化,并确定质控血清Men10的质控范围。对优化后的方法进行特异性、线性、精密度验证。结果确定A600值为0.5~0.8时为收获细菌最佳收获时间;冻存菌种可替代新鲜制备菌种作为靶菌;最佳杀菌反应时间为60 min;17830和84321N批补体均可用于试验。质控血清Men10的质控范围A群为521~4 689,C群为1 047~9 423,W135群为1 779~16 008,Y群为1 416~12 741。A、C、W135和Y同群多糖吸收血清样品后能够抑制≥80%的同群SBA滴度,而异群多糖则<20%;血清样品稀释倍数与对应的SBA滴度呈显著负相关,斜率在-0.90^-1.10之间,Pearson相关系数在0.90~1.0之间,P均<0.001;同一实验内相同样品检测结果 CV≤25%,实验间相同样品的95%的检测结果落在检测值中位数3倍(一个稀释度)的范围内,CV≤40%,不同实验室间相同样品的检测结果至少有70%落在美国CDC公布结果的3倍(一个稀释度)范围内。结论建立了标准化的具国际间可比性的A、C、W135和Y群脑膜炎奈瑟菌SBA,该方法特异性、线性和精密度良好。 乔瑞洁 赵志强 王浩 王欣茹 刘佳 刘方蕾 吴兵 于旭博 林纪胜 李亚南 叶强 谢贵林关键词:脑膜炎奈瑟菌 福氏2a痢疾结合疫苗临床安全性和免疫原性研究 被引量:2 2008年 目的评价福氏2a痢疾结合疫苗临床安全性和免疫原性。方法按随机、对照、盲法的原则,以不含福氏2a痢疾结合疫苗成份的磷酸缓冲盐水作为安慰剂对照,开展现场临床试验,比较试验疫苗组和对照组免疫后临床反应、抗体阳转率和几何平均滴度(GMT)增长倍数。结果福氏2a痢疾结合疫苗无严重的全身和局部反应,试验疫苗组和对照组全身和局部反应发生率差异无显著的统计学意义。试验疫苗组经2针全程免疫后2周和12周,抗体阳转(≥4倍增长)率分别为86.27%和79.74%;GMT分别为1:3783.55和1:2983.32;抗体GMT较免疫前分别平均增长12.47倍和9.83倍。而对照组2针免疫后2周和12周,抗体阳转(≥4倍增长)率分别为8.18%和8.49%;GMT分别为1:361.83和1:326.21;抗体GMT较免疫前分别平均增长1.08倍和0.98倍。全程免疫后试验疫苗组与对照组抗体阳转率、GMT、抗体滴度,较免疫前平均增长倍数差异均有非常显著的统计学意义。结论福氏2a痢疾结合疫苗是安全的,在≥2岁的观察者中有良好的免疫原性。临床试验注册国家食品药品监督管理局《药物临床试验》2003L03808号。 陈昌标 周伟忠 姜仁杰 赵国雄 顾建祥 周锦国 赵志强关键词:安全性 免疫原性 C群奈瑟氏脑膜炎球菌结合疫苗工艺稳定性及免疫原性研究 目的:对8批确定工艺后扩大量制备的C群脑膜炎球菌荚膜多糖(GCMP )与载体蛋白质破伤风类毒素(TT)结合物进行工艺稳定性及免疫原性研究。方法:以己二酸二酰肼(ADH)作为间隔剂、碳二亚胺(EDAC)为缩合剂,将GCMP... 吴兵 刘方蕾 王晶 侯亚莉 赵志强 杨明 崔萱林 谢贵林关键词:结合疫苗 免疫原性 文献传递 重组铜绿假单胞菌外毒素A含量SDS-PAGE检测方法的建立及验证 2016年 目的建立测定重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant exotoxin of Pseudomonas aeruginosa,r EPA)含量的SDSPAGE法,并进行验证。方法采用SDS-PAGE,经考马斯亮蓝R-250染色后,利用Image Lab软件分析获得目标蛋白条带光密度值,计算目标蛋白在待测样品中的含量。对建立的方法进行专属性、准确性和重复性验证,确定检测范围,并用建立的方法检测r EPA宿主湿菌体中r EPA发酵产量及r EPA宿主菌休克液柱层析纯化样品中r EPA含量。结果 r EPA含量在100~600μg/ml范围内与其对应条带的光密度值具有良好的相关性,决定系数在0.97以上。大肠埃希菌固有组分及纯化过程中常用的添加物对r EPA含量检测均未产生明显影响,专属性较好;用建立的方法检测500、300、150μg/ml r EPA样品10次的回收率分别为(102.32±4.18)%、(102.77±4.94)%和(95.04±16.41)%,CV值分别为4.08%、4.81%和17.27%。各批r EPA发酵产量为250~500 mg/L,三步柱层析纯化后,r EPA总回收率约为50%。结论建立了测定r EPA含量的SDS-PAGE法,该方法专属性、准确性和重复性良好,为r EPA生产工艺的优化奠定了基础。 范锋锋 李燕婷 金鑫 冯宜扬 夏莲坤 刘月萍 朱衍志 赵志强 谢贵林 谭小梅关键词:SDS-PAGE 收率 HL-60分化细胞表面标志、活性及其对肺炎链球菌调理吞噬杀菌能力的动态变化 被引量:7 2012年 目的分析HL-60分化细胞的表面标志、活性及其对肺炎球菌调理吞噬杀菌能力的动态变化。方法以流式细胞仪连续监测分化1~7 d的HL-60细胞表面标志CD11b、CD35和CD71的表达以及活细胞、凋亡细胞和死亡细胞的比例,同时用09CS、QC2、B、C和F 5份质控血清以调理吞噬杀菌试验检测肺炎链球菌血清型6B、7F、14和23F的杀菌滴度。结果分化3~6 d的HL-60细胞表面标志、活细胞比例可达到实验室要求,5份质控血清的调理吞噬杀菌滴度稳定而且在质控范围之内。结论分化3~6 d的HL-60细胞可以用于评价肺炎链球菌疫苗免疫血清的调理吞噬杀菌试验,为调理吞噬杀菌试验的建立和标准化提供了依据。 王浩 乔瑞洁 史晓玲 林纪胜 谢贵林 赵志强关键词:HL-60细胞 分化 细胞表面标志 肺炎链球菌 2~59岁健康人群接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗的免疫原性观察 被引量:13 2012年 目的评价ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗在2~59岁健康人群中的免疫原性。方法 2~59岁健康人群接种者随机抽样(n=60),接种一剂四价脑膜炎球菌多糖疫苗。采集接种前和接种后1个月血清,采用体外杀菌试验(Serum bactericidal assay,SBA)检测血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度。结果免疫前、后血清抗A群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为1241(736,2091)和7559(5520,10351)(P<0.05);抗C群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为4(9,21)和4787(2947,7775)(P<0.05);抗W135群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为16(9,28)和368(162,883)(P<0.05);抗Y群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为120(58,246)和1373(687,2745)(P<0.05)。免疫前和免疫后血清抗A群脑膜炎球菌的杀菌滴度≥128的比例分别为87(77.4,95.1)%和100(83.2,100)%;抗C群脑膜炎球菌的比例分别为17(8.3,28.5)%和97(88.5,99.6)%;抗W135群脑膜炎球菌的比例分别为13(5.9,24.6)%和68(55.0,79.7)%;抗Y群脑膜炎球菌的比例分别为57(43.2,69.4)%和85(73.4,92.9)%。免疫后较免疫前抗A群、C群、W135群和Y群脑膜炎球菌杀菌抗体滴度≥4倍升高的比例分别为50(27.2,72.8)%、97(88.5,99.6)%、62(43.2,73.9)%和55(41.6,67.9)%。结论虽然免疫前人群由于地方和国家免疫计划的实施已具有较高水平的抗A群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度,但接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后可以使其保护水平进一步提高,并使人群对C群、W135群和Y群脑膜炎球菌的低水平杀菌抗体滴度均显著升高达到保护水平,证明ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗在2~59岁健康人群中具有比较好的免疫原性。 李亚南 乔瑞洁 梁丽 赵志强 唐静 王浩 史晓玲 李凤祥 谢贵林 叶强工程菌种子制备方法对rEPA表达量影响的研究 2006年 由重组E.colirPE553D所表达的基因缺失突变脱毒的重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA),目前大量以载体蛋白用于多种细菌多糖蛋白结合疫苗研究。rEPA的表达量受众多因素的影响,种子的制备方式就是重要因素之一。本文用长期冷冻保存的和新鲜提取的质粒分别转化宿主菌E.coliBL21(λDE3)后制备种子,并将它们和冻干保存的E.colirPE553D在相同条件下培养和诱导,经SDS-PAGE分析表明长期保存的质粒转化宿主后的重组工程菌生长速度较慢,但rEPA的表达量和新鲜质粒转化制备的工程菌基本相同,而冻干保存的工程菌E.colirPE553D几乎丧失了表达rEPA的能力。 王永谦 赵志强 宣俊文 谢贵林 王燕 杜琳关键词:表达量 工程菌 C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物制备方法的比较 被引量:4 2015年 目的对C群脑膜炎球菌多糖(group C meningococcal polysaccharide,GCMP)蛋白结合物的5种制备方法进行比较。方法以GCMP作为多糖抗原,破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和重组绿脓杆菌外毒素A(recombinant exoprotein A from Pseudomonas aeruginosa,r EPA)作为载体蛋白,采用5种结合路线制备7种结合物,并对其生化指标、免疫原性及磷酸铝佐剂的免疫增强效果进行检测。结果不同的结合方法均可将不同载体蛋白与多糖有效结合,在小鼠体内均具有良好的免疫原性。7种结合物的分子大小分布、游离多糖含量、多糖/蛋白值、回收率及免疫原性等指标有较大差异;采用相同结合方法,以TT和r EPA作为载体蛋白制备的结合物的生化指标及免疫原性无差异;磷酸铝佐剂可显著提高结合物的免疫原性。结论在选择GCMP蛋白结合物制备方法时应综合考虑原料多糖的化学结构、载体蛋白类型、结合路线、结合物纯化方法、质量控制方法和剂型等因素。本实验为GCMP蛋白结合物制备路线的选择提供了实验依据。 于旭博 孔素娟 袁菲 王晶 罗树权 王欣茹 李阿妮 方红春 赵志强 谢贵林关键词:破伤风类毒素 免疫原性 人血清抗肺炎链球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法的建立与验证 被引量:9 2013年 目的建立WHO推荐的检测人血清抗肺炎链球菌 ( Streptococcus pneumoniae )荚膜多糖抗体IgG定量ELISA(PnPSELISA)。方法依照WHO推荐的Pn PS ELISA标准操作要求,优化荚膜多糖的包被浓度,筛选合格的ELISA板和二抗;在检测WHO参考实验室提供的质量控制血清验证实验条件的基础上,分别在WHO参考实验室和兰州生物制品研究所有限责任公司(LIBP)实验室检测16份由LIBP制备的质控血清中抗13种肺炎链球菌血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F)的荚膜多糖IgG抗体浓度。同时,在LIBP实验室建立了实验室内部质控血清907的检测范围,并评价了LIBP实验室实验间检测值的精确度。结果在WHO参考实验室和LIBP实验室分别检测的16份LIBP质控血清的抗13种肺炎链球菌血清型荚膜多糖IgG抗体浓度具有良好的相关关系(slope=0.94,r=0.97,P〈0.05)。LIBP实验室的检测值有81%落在WHO参考实验检测值±40%范围内,符合评价实验室之间所用方法的75%的数据在±40%的检测值范围内的标准。建立了LIBP实验室内部质控血清907的抗13种肺炎链球菌血清型荚膜多糖抗体IgG的检测值范围。LIBP实验室质控血清的各血清型IgG抗体浓度的实验间检测值的变异系数(CV)均〈30%。结论LIBP实验室成功建立了WHO推荐的检测人血清中抗肺炎链球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法,并确定了LIBP实验室日常用质控血清907的检测值范围。 王欣茹 石继春 林纪胜 李茂光 王春娥 刘方蕾 叶强 赵志强 谢贵林关键词:肺炎链球菌 酶联免疫吸附试验