赵庆顺
- 作品数：49 被引量：84H指数：6
- 供职机构：南京大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京市医学科技发展项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生环境科学与工程农业科学更多>>
- 家兔体内获能精子体外受精研究被引量：1
- 1991年
- 本研究旨在建立有效的体外受精、胚胎培养和移植技术。采集经超排处理供体母兔的输卵管卵与体内获能精子进行体外授精。在12.5mM和1.25mM两种丙酮酸钠浓度的DM液中进行的试验,分别获得81.0％和76.9％的受精率,两者无显著差异(p>0.05)。以这两种溶液进行胚胎的体外培养,低浓度丙酮酸钠的DM液中胚胎发育状态优于高浓度者,在体外培养至授精后164小时可发育至孵出囊胚。将2—4—细胞的体外受精胚胎20枚移植至两只受体,其中一只生产3只健康仔兔。
- 赵庆顺范必勤
- 关键词：体外受精胚胎移植
- DNA聚合酶对PCR方法检测基因点突变的干扰分析被引量：1
- 2008年
- 以野生型斑马鱼p53基因外显子7为目的片段,运用变性高效液相色谱(DHPLC),比较分析三种常用的商品DNA聚合酶对聚合酶链式反应(PCR)技术检测基因点突变的影响.DHPLC检测结果显示,Pro-mega Shanghai公司Taq DNA聚合酶,Promega公司Taq DNA聚合酶和BD Biosciences公司高保真酶Advan-tage-HF2的分子突变频率分别为14.3%,5.95%和0.76%.通过DNA直接测序法确认表明,Promega公司Taq DNA聚合酶和BD Biosciences公司高保真酶Advantage-HF2的碱基突变频率分别为3.61×10-4和7.69×10-5.研究表明,不同的DNA聚合酶对PCR技术的检测结果有明显影响,高保真酶Advantage-HF2所造成的碱基错配率明显低于其它两种商业化Taq酶.
- 朱含开赵庆顺尹大强
- 关键词：P53基因TAQDNA聚合酶点突变
- 五氯酚暴露诱导斑马鱼胚胎细胞凋亡相关基因的变化及caspase-2基因克隆和系统进化分析被引量：8
- 2008年
- 应用基因芯片技术研究发现,暴露于五氯酚的斑马鱼胚胎中有14个涉及细胞凋亡行为的基因表达发生了显著改变.利用生物信息学方法构建这些功能基因系统进化树,分析与环境毒物诱导的细胞凋亡行为密切相关的caspase-2基因和其他基因之间的同源关系.斑马鱼caspase-2基因由10个外显子和9个内含子组成,cDNA长1308bp,含一个开放阅读框(ORF),编码435个氨基酸.6种脊椎动物Caspase-2氨基酸序列的保守性及系统进化分析结果表明,在特定功能区结构域中氨基酸序列表现出较高的同源性,Caspase-2在进化上高度保守.利用RT-PCR技术,斑马鱼caspase-2基因cDNA被克隆并确认.研究结果表明斑马鱼caspase-2基因是一个研究细胞凋亡行为的模型分子,可为环境化合物的分子毒性评价及其机制研究提供一种分子标记。
- 朱含开吴兆毅赵庆顺尹大强
- 关键词：斑马鱼细胞凋亡进化树五氯酚
- 一种用于动物个体身份识别和/或肉产品溯源的条形码编制方法及其应用
- 本发明属于分子生物学领域，公开了一种用于动物个体身份识别和/或肉产品溯源的条形码编制方法及其应用。一种用于动物个体身份识别和/或肉产品溯源的条形码编制方法，选择待识别动物或待溯源肉产品基因组DNA上的高杂合度的SNP位点...
- 邢光东胡肄农赵庆顺顾洪如王晓晓朱振坤施振旦
- 文献传递
- 五氯酚诱导斑马鱼p53基因点突变的nested PCR-RFLP分析被引量：2
- 2005年
- 将斑马鱼经50μg/L五氯酚(PCP)体内暴露染毒10d,提取肝脏基因组DNA,通过巢式PCR(nestedPCR)扩增包含斑马鱼p53基因外显子2,3,4及其间内含子2,3的片段,扩增产物分别用限制性内切酶NcoI、SacI、ScaI、BclI、NsiI、RsaI进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,以检测目标片段在酶切位点上点突变的发生.检测了20条斑马鱼上述6个酶切位点上的共680个碱基,但均未检测到点突变.结果表明,如果PCP能够诱导斑马鱼p53基因点突变,则其碱基突变率小于1/680.
- 李延赵庆顺尹大强
- 关键词：P53基因PCR-RFLP五氯酚斑马鱼
- 五氯酚对斑马鱼胚胎发育期Wnt信号通路的影响被引量：8
- 2009年
- 为从毒理基因组学角度探讨五氯酚(PCP)发育毒性的作用机制,将0hpf斑马鱼(Danio rerio)胚胎暴露于50μg·L-1PCP中8h,提取其总RNA,与Affymetrix公司的斑马鱼寡核苷酸芯片杂交.结果发现,与对照组相比,染毒样本中,1149个基因的表达显著增强(log2ratio>1),501个基因的表达显著减弱(log2ratio<-1).利用生物信息学软件GenMAPP对差异表达基因进行了Wnt信号通路分析,结果显示,PCP暴露后斑马鱼胚胎发育过程中fzd2、axin2等Wnt信号通路重要的调控基因表达均发生了显著变化;PCP影响了经典Wnt通路和非经典Wnt通路,并可能影响了Wnt通路与FGF通路的相互作用.
- 吴兆毅胡平赵庆顺尹大强
- 关键词：五氯酚WNT通路发育毒性
- 全氟辛烷磺化物(PFOS)诱导斑马鱼胚胎p53基因的点突变被引量：4
- 2009年
- 将斑马鱼胚胎于0μg·l-1(空白对照),5μg·l-1,16μg·l-1和50μg·l-1全氟辛烷磺化物(PFOS)溶液中暴露染毒5h,采用变性高效液相色谱方法对PCR扩增的含斑马鱼胚胎p53基因外显子7的173 bp的目标片段进行突变分析.结果显示,16μg·l-1和50μg·l-1两个处理组与对照组相比均有显著性差异,表明PFOS可以诱导斑马鱼胚胎p53基因外显子7的点突变.
- 陈蔚丰赵庆顺尹大强
- 关键词：斑马鱼胚胎点突变P53基因
- 一种定向改造动物基因组特定基因的方法及其应用
- 本发明涉及利用一种定向诱变动物基因组的方法。具体来说，本发明提供一种新的利用锌指核酸酶定向改造动物基因组的特定基因的方法，包括：根据目标动物靶基因区的序列设计特异识别并切割靶基因的锌指核酸酶，使用独立的表达系统验证所述锌...
- 董张及赵庆顺
- 文献传递
- 转化生长因子α-绿脓杆菌外毒素融合蛋白TGFα-PE40高效表达质粒的构建和表达被引量：1
- 1994年
- 利用基因工程技术,将质粒pYX382用XbaⅠ和EcoRⅠ切下插入的TGFα-PE40融合基因片段,连接到可表达载体pCB604的XbaⅠ/EcoRⅠ位点中,构建成新的重组质粒p2X-TP1。p2X-TP1转化E.coli BL21感受态菌后,在IPTG诱导下Ipp启动子转录表达TGFα-PE40融合蛋白。表达产物主要以包涵体形式沉积在细胞内。融合蛋白表达量的高低与诱导时的细胞密度,诱导的温度以及培养基有关。在一定范围内与诱导剂的剂量以及诱导时间的长短无关。p2X-TP1重组质粒在工程菌中的表达TGFα-PE40融合蛋白量约为50mg/L。
- 徐亚男沈敏慧赵庆顺张红宇徐永华
- 关键词：融合蛋白质粒基因工程
- “全鱼”转生长激素基因黄颡鱼首建者的建立被引量：3
- 2013年
- 黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)是一种重要的淡水名优经济鱼类,然而较小的体型和较慢的生长速率极大地降低了它的经济价值.为获得大规格且快速生长的黄颡鱼,开展了转生长激素基因黄颡鱼的研究.运用RT-PCR和RACE-PCR技术,克隆了黄颡鱼生长激素基因的603bp(碱基对)的编码序列和485bp的3′-UTR(非翻译区)序列.通过重叠PCR和限制性内切酶酶切连接,组建了一个长为2105bp的"全鱼"转生长激素基因构件,该构件含1017bp的黄颡鱼β-肌动蛋白近端启动子、603bp的生长激素基因编码序列和485bp的3′-UTR序列.采用显微注射将转生长激素基因构件导入黄颡鱼受精卵,从301尾由注射胚胎发育而来的黄颡鱼中共筛选获得40尾转生长激素基因黄颡鱼首建者.成功地建立了黄颡鱼基因组改造的技术平台,为黄颡鱼的基因工程育种奠定了基础.
- 葛家春宋伟董张及许志强鲍洁周国勤潘建林杨家新赵庆顺
- 关键词：黄颡鱼生长激素转基因
