谢鑫
- 作品数：29 被引量：100H指数：6
- 供职机构：西安医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- P-selectin糖蛋白配体-1的基因克隆及其Ig融合蛋白的表达和纯化被引量：1
- 2006年
- 目的:克隆P-selectin糖蛋白配体-1的基因,表达和纯化其Ig融合蛋白。方法:RT-PCR法克隆出P-选择素糖蛋白配体-1(CD162)cDNA,构建真核表达载体,DEAD-Dextran法转染COS7细胞,上清经纯化后,分别使用WesternBlot和流式细胞仪鉴定CD162-hIgFc融合蛋白的性质和活性。结果:RT-PCR克隆出801bp的CD-162cDNA片段,插入载体构建出pIg-CD162,将其转染COS7细胞后获得CD162-hIgFc融合蛋白,分子量为74KD。WesternBlot证实其为CD162-hIgFc融合蛋白,流式细胞仪证明获得的CD162-hIgFc融合蛋白能够识别血小板表面的CD62P。结论:本研究成功制备了CD162-hIgFc融合蛋白,为进一步探讨P选择素与其配体CD162之间的作用打下坚实的基础。
- 潘宝华谢鑫夏炜郭树忠杨力
- 关键词：融合蛋白
- 夹心ELISA检测可溶型LAIR-1方法的建立及其应用的研究被引量：11
- 2003年
- 为了探讨血清可溶型白细胞相关免疫球蛋白样受体 1 (sLAIR 1 )的水平与疾病的关系 ,用生物传感器鉴定了 3种抗LAIR 1分子胞膜外区mAb识别的表位 ,并应用 2种识别不同LAIR 1表位的mAb首次建立了检测sLAIR 1的夹心ELISA方法 ,其检测灵敏度达到 1 5 μg/L。以此方法检测了活化的人PBMC培养上清以及正常人和肾综合征出血热 (HFRS )患者血清中sLAIR 1的水平。在经PMA、PHA、LPS和抗CD3mAb活化的人PBMC细胞培养上清中检测到sLAIR 1。 2 4例正常人血清sLAIR 1的平均水平为 (6 2± 3 3) μg/L ,6 2例HFRS患者血清sLAIR 1的平均水平为 (4 7 2± 35 9) μg/L。证明体内和体外存在天然sLAIR 1。HFRS患者血清sLAIR 1水平明显升高。为进一步研究LAIR
- 薛江楠欧阳为明贾卫谢鑫刘京梅宁双飞户义宋朝君金伯泉
- 关键词：MAB夹心ELISALAIR-1HFRS
- pCDM8-GFP报告载体的构建及鉴定被引量：6
- 2003年
- 欧阳为明张继帅谢鑫金伯泉
- 关键词：绿色荧光蛋白基因克隆
- LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)与配体结合亲和力的比较被引量：1
- 2007年
- 目的:LAIR-1/LAIR-2(CD305/306)与配体结合亲和力的比较。方法:应用不同浓度混合的LAIR-1和LAIR-2融合蛋白,同时或先后与配体表达细胞孵育后,用特异性LAIR-1或LAIR-2单克隆抗体(mAb)进行免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析,比较LAIR-1和LAIR-2融合蛋白与细胞结合的百分率的变化及相互竞争情况。结果:LAIR-1和LAIR-2膜型配体的分布较广泛,人和小鼠LAIR受体与配体的结合具有相互交叉的特点。LAIR-2能够明显阻断LAIR-1与其膜型配体的结合,而LAIR-1对LAIR-2与其配体的结合无影响。结论:LAIR-1和LAIR-2可能结合相同的膜型配体,但LAIR-2结合配体的亲和力明显高于LAIR-1结合的亲和力。此结果为深入探讨LAIR家族免疫调节的分子机制提供重要的实验依据。
- 许晓光王春艳谢鑫张圆韩卫宁蔡明石炳毅金伯泉
- 关键词：LAIR-1配体
- 人pSecTag2B-CD226真核表达载体的构建、表达及初步鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:构建含有6His标签的可溶性人CD226分子的真核表达载体pSecTag2B-CD226,并进行表达和初步鉴定。方法:PCR扩增CD226细胞膜外区,插入真核表达载体pSecTag2B,构建真核表达载体pSecTag2B-CD226。酶切和测序法鉴定后,转染COS-7细胞进行表达,培养上清液经抗CD226抗体免疫亲和层析柱纯化后用酶标记免疫吸附分析法(ELISA)进行初步鉴定。结果:经表达和纯化获得了含有CD226细胞膜外区的CD226-6His融合蛋白。结论:成功构建了可分泌人CD226蛋白的真核表达载体pSecTag2B-CD226,本实验结果将为进一步的功能学研究奠定基础。
- 陈丽华张新海谢鑫金伯泉
- 关键词：CD226真核表达融合蛋白
- 小鼠CD226(PTA1)的基因克隆及其异型被引量：13
- 2002年
- 目的 :克隆小鼠CD2 2 6 (PTA1)分子。方法 :从GenBank中检索出与人CD2 2 6分子在氨基酸水平上有 5 1%同源性的EST序列 ,设计并合成特异性引物 ,采用快速扩增cDNA末端的RACE方法 ,从 4周龄BALB c小鼠的胸腺中扩增小鼠CD2 2 6cDNA序列。结果 :克隆出完整的小鼠CD2 2 6cDNA ,长 2 2 2 3bp ,其中开放读框为 10 0 2bp ,编码含信号肽在内的 333个氨基酸 ,属免疫球蛋白超家族分子 ,较人CD2 2 6分子少了 3个氨基酸 ,在氨基酸水平上有 5 3%的同源性。此外 ,还克隆了小鼠CD2 2 6分子的 3种异型。结论 :成功克隆出小鼠CD2 2 6 (PTA1)cDNA ,并发现 3种异型 ,全面探讨该分子生物学特性 ,进行体内功能实验 ,基因敲除小鼠和转基因小鼠的研究提供了坚实的基础。
- 张新海李德敏欧阳为明贾卫谢鑫陈丽华宁双飞张赟金伯泉
- 关键词：CD226血小板基因克隆PTA1
- 一种新的人内皮细胞可诱导性粘附分子PTA1的表达、调变及粘附功能被引量：25
- 2000年
- 目的观察PTA1分子在活化人内皮细胞的表达、调变及其所参与的粘附功能。方法用间接免疫荧光染色结合流式细胞仪分析观察PTA1在内皮细胞的表达和分布 ;用RT PCR方法检测内皮细胞中PTA1mRNA的表达 ;用Na251CrO4 标记静止和TPA活化Jurkat细胞 ,采用4h粘附实验观察不同条件下内皮细胞和Jurkat细胞间的粘附以及PTA1/Ig融合蛋白的粘附阻断作用。结果①静止内皮细胞表达很弱的PTA1分子 ,TNF α、LPS可显著上调PTA1在内皮细胞的表达 ,TNF α刺激8h、LPS刺激2d后PTA1分子在内皮细胞的表达达到高峰。用RT PCR方法在TNF α刺激6h后的内皮细胞中可检测到较高水平的PTA1mRNA ,但静止内皮细胞中只能检测到极微弱的PTA1mRNA。②TNF α活化内皮细胞与Jurkat细胞的粘附作用明显高于静止内皮细胞与Jurkat细胞的粘附作用 ,TPA活化Jurkat细胞与内皮细胞间的粘附作用明显高于静止Jurkat细胞与内皮细胞间的粘附作用 ,且这两种粘附作用均可部分被PTA1/Ig 融合蛋白所阻断。结论TNF α和LPS刺激后的活化内皮细胞可表达较高水平的PTA1mRNA和PTA1蛋白 ,且此PTA1分子可直接参与活化内皮细胞和Jurkat细胞间的粘附 ,表明PTA1是内皮细胞上一种新的可诱导性粘附分子。
- 陈丽华金伯泉贾卫谢鑫刘雪松欧阳为明
- 关键词：PTA1内皮细胞JURKAT细胞粘附
- 一种新的黑色素瘤相关抗原MAGE-C2的基因克隆及表达
- 2005年
- 目的：克隆人黑色素瘤相关抗原MAGE-C2的cDNA,构建真核、原核表达载体并转入相应细胞获得表达。方法：采用RT-PCR技术,从直肠癌细胞系SW480的总RNA中克隆了MAGE-C2 cDNA序列,并将开放读框分别插入质粒pEGFP-C1和pGEX-4T-3中,获得pEGFP-MAGE-C,2绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体和pGEX-MAGE-C2谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白表达载体,将pEGFP-MAGE-C2转染293T细胞,观察绿色荧光融合蛋白在细胞中的定位；将pGEX-MAGE-C2转化大肠杆菌B1221株,经IPTG诱导表达GST融合蛋白,并用谷胱甘肽亲和层析法纯化重组蛋白。结果：获得MAGE-C2开放读框并构建表达载体,测序结果与GenBank收录的序列相一致。真核表达载体转染293T细胞后显示MAGE-C2蛋白定位于细胞核；原核重组蛋白大部分以可溶性形式表达,亲和层析后,获得了较高纯度的MAGE-C2-GST融合蛋白。分析显示原核表达GS了融合蛋白的相对分子质量为70000,使用抗GST单克隆抗体进行Westem blot分析证实为目的蛋白。结论：成功的获得MAGE-C2基因,构建了其表达载体并获得表达,为进一步制备MAGE-C2特异性单抗及深入探讨MAGE-C2可能参与肿瘤发生发展的机制提供了重要条件。
- 庄然欧阳为明谢鑫张新海蓝天李林方亮金伯泉
- 关键词：基因
- 抗吗啡单克隆抗体的制备及其胶体金交联物的初步应用被引量：12
- 2003年
- 目的 :制备吗啡特异性单克隆抗体 (mAb)。方法 :将吗啡分子与兔血清白蛋白或牛血清白蛋白交联 ,免疫BALB/c小鼠并检测免疫效价后 ,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗吗啡mAb。将纯化mAb与胶体金颗粒交联后利用纸层析技术进行标本检测。结果 :成功地制备了 3株抗吗啡mAb ,利用其中 1株抗体制备的胶体金试纸条 ,检测样品灵敏度达 2 0 0 μg/L。 结论
- 谢鑫金伯泉朱勇刘雪松王文学李笑松吴汉源
- 关键词：毒品滥用单克隆抗体胶体金
- 人上皮细胞黏附分子融合蛋白真核表达载体的构建、表达及初步鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 :构建pIg EpCAM及pEGFP EpCAM真核表达载体 ,并在COS7细胞中表达。方法 :用PCR扩增EpCAMcDNA ,酶切后分别与pIg及pEGFP两种载体连接 ,用脂质体法转染COS7细胞。用免疫沉淀法检测pIg EpCAM的表达产物 ;用荧光显微镜观察EpCAM GFP的表达。结果 :DNA序列测定的结果显示 ,pIg EpCAM及pEGFP EpCAM载体的构建正确。免疫沉淀的结果显示 ,转染pIg EpCAM的COS7细胞的培养上清中含有相对分子质量 (Mr)为 6 5 0 0 0的融合蛋白 ,该蛋白与抗人IgGFc段的mAb具有良好的免疫反应性。荧光显微镜观察可见 ,转染空载体pEGFP的COS7细胞中绿色荧光均匀地分布于胞质和胞核 ;而转染pEGFP EpCAM的COS7细胞中绿色荧光主要分布于细胞表面。结论 :成功地构建了两种EpCAM的真核表达载体 ,并在COS7细胞中表达 ,为EpCAM的功能研究创造了条件 。
- 王春艳谢鑫宋朝君金镇勋欧阳为明金伯泉
- 关键词：上皮细胞黏附分子真核表达增强型绿色荧光蛋白
