谢芳
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
- 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>
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- 山羊痘弱毒疫苗株TK基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2007年
- 以提取的山羊痘弱毒疫苗株HLJ—V9 DNA为模板，设计特异性引物并进行PCR扩增，获得了2078bp的DNA片段，并将PCR产物克隆至pGEM—T Easy载体。酶切鉴定、PCR鉴定和测序结果表明，成功获得了TK基因，获得的TK基因内存在一个Kpn Ⅰ酶切位点和编码区的早期转录终止信号TTTTTN（T）T。核苷酸和氨基酸同源性分析表明，弱毒疫苗毒株HLJ—V9 TK基因与参考毒株的同源性在95．5％～100％之间，说明羊痘病毒TK基因具有高度的保守性。
- 鞠厚斌张强袁明施程洪韩若婵谢芳吴国华颜新敏李健朱海霞朱彩珠卫广森
- 关键词：山羊痘病毒TK基因
- 山羊痘病毒温度敏感株基因组DNA复制非必需区的筛选被引量：2
- 2007年
- 提取山羊痘病毒温度敏感株基因组DNA，用HindⅢ酶切，随机克隆到pUC18质粒中，限制性内切酶片段电泳分析和序列测定结果表明，克隆到4个不同大小的HindⅢ片段pUA、pUB、pUC和pUD。随后，将它们和羊痘病毒Pellor（AY077835）株进行了同源性比较，发现核苷酸同源性为90。0％～94．5％，氨基酸同源性为83．0％～91．4％。选取克隆或亚克隆后的单一酶切位点，插入P11P7.5-LacZ报告基因，构建了pUAl、pUBl、pUCl和pUDl共4个重组载体质粒。通过脂质体分别转染山羊痘病毒感染的BHK-21细胞，在X-gal存在条件下经蓝白斑筛选重组病毒，获得1株重组病毒，证明筛选出了1个复制非必需区片段。
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- 关键词：山羊痘病毒基因克隆转染
- 山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定被引量：9
- 2007年
- 转移载体的构建是重组羊痘病毒构建的重要环节,在分析羊痘病毒基因组的基础上,以TK基因为插入靶序列,经PCR、酶切鉴定,获得了带有EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位点的TK基因片段。将此片段与经相同酶切的pUC119载体连接,构建转移载体pUC119-TK,并且以此为基础构建表达绿色荧光蛋白山羊痘病毒转移载体pTK-P7.5-GFP。将pTK-P7.5-GFP转染羊痘病毒感染的BHK21细胞,48 h后报告基因得到表达,这为羊痘病毒载体系统的进一步开发奠定了基础。
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- 关键词：羊痘病毒TK基因
- 羊痘病毒多重PCR检测方法的建立被引量：5
- 2008年
- 根据羊痘病毒(CaPV)末端反向重复序列中的一段序列和P32基因序列,设计合成了2对引物,通过确定最佳的PCR反应条件,建立了检测羊痘病毒核酸的多重PCR方法。结果显示,用这2对引物均能扩增出羊痘病毒相应的特异性片段,而用此PCR方法检测口蹄疫病毒和羊口疮病毒,结果均为阴性。与中和试验比较,建立的PCR方法具有更好的敏感性。表明,该PCR方法可对组织病料中的CaPV进行快速检测。
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- 关键词：羊痘病毒多重PCR特异性敏感性
- 山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2008年
- 从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。采用G418抗性梯度筛选法得到高拷贝重组菌株,甲醇诱导目的基因表达。SDS-PAGE和Western-blotting分析结果表明,用酵母成功表达出了31 kD的重组蛋白,该蛋白具有生物学活性,能被山羊痘阳性血清识别。
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- 关键词：山羊痘病毒P32基因毕赤酵母
- 羊痘病毒P32基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
- 羊痘病毒(Capripoxvirus，CPV)能分别引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病。羊痘(绵羊痘和山羊痘)被世界动物卫生组织(OIE)列为A类重大传染病，我国将其列为一类动物疾病。羊痘病毒P32蛋白是CPV具有很好...
- 谢芳
- 关键词：羊痘病毒P32基因毕赤酵母分泌型表达载体
- 文献传递
- 山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2009年
- 从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。采用G418抗性梯度筛选法得到高拷贝重组菌株,甲醇诱导目的基因表达。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,用酵母成功表达出了31000的重组蛋白,该蛋白具有生物学活性,能被山羊痘阳性血清识别。
- 谢芳张强颜新敏吴国华李健朱海霞郭爱疆韩若婵施程洪鞠厚斌朱彩珠岳城才学鹏
- 关键词：山羊痘病毒P32基因毕赤酵母
