胡红玲
- 作品数：9 被引量：46H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
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- Diazoxide对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖的作用被引量：9
- 2007年
- 目的:研究线粒体膜上ATP敏感钾通道(MitoKATP)开放剂diazoxide和线粒体膜电位(ΔΨm)在缺氧导致的大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖/凋亡失衡中的作用,探索缺氧性肺动脉重建和肺动脉高压形成的发生机制。方法:取大鼠正常肺组织,分离出肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)进行常氧或慢性缺氧培养。将样本分为6组:①正常对照组;②线粒体膜上ATP敏感钾通道(MitoKATP)开放剂diazoxide组;③MitoKATP阻断剂5-HD组;④慢性缺氧(CH)组;⑤CH+diazoxide组;⑥CH+5-HD组。利用激光共焦显微镜(Leica SP-1 USA)成像检测线粒体膜电位,荧光染色检测细胞内氧自由基含量,流式细胞仪检测细胞周期和MTT法检测细胞增殖情况。结果:①Diazoxide作用24 h后,R-123荧光强度明显强于正常对照组,线粒体膜电位去极化,细胞内氧自由基含量明显高于正常对照组,细胞增殖明显多于正常对照组、凋亡少于正常对照组,P<0.05;而5-HD作用24 h后,上述指标与正常对照组相比较,均无显著差异,P>0.05;②慢性缺氧24 h,结果与di-azoxide组相似,R-123荧光强度明显强于正常对照组,线粒体膜电位去极化,细胞内氧自由基含量明显高于正常对照组,细胞增殖明显多于正常对照组、凋亡少于正常对照组,P<0.05;CH+diazoxide组,R-123荧光强度和线粒体膜电位去极化明显强于缺氧组,细胞内氧自由基含量明显高于缺氧组,细胞增殖明显多于缺氧组、凋亡少于缺氧组,P<0.05;CH+5-HD组,R-123荧光强度和线粒体膜电位去极化明显弱于缺氧组,细胞内氧自由基含量明显低于缺氧组,细胞增殖明显少于缺氧组、凋亡多于缺氧组,P<0.05;R-123荧光强度、MTT的A值与细胞内氧自由基含量均呈显著正相关;凋亡细胞百分比与细胞内氧自由基含量呈显著负相关。结论:本实验结果显示,diazox-ide能够通过开放线粒体膜上ATP敏感的钾通道,引起ΔΨm去极化,ΔΨm的变化影响细胞内
- 胡红玲汪涛张珍祥赵建平徐永健
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞缺氧线粒体膜电位线粒体ATP敏感性钾通道
- 低氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞中活性氧与低氧诱导因子-1α和细胞增殖的关系(英文)被引量：11
- 2007年
- 在低氧条件下,观察大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells, PASMCs)中活性氧(reactive oxygenspecies, ROS)的变化,探讨 ROS 的变化是否通过调控低氧诱导因子 -1α (hypoxia-inducible factor 1α, HIF-1α)的表达影响 PASMCs的增殖。采用组织块法原代培养大鼠PASMCs,分成3 组:常氧组(21% O2, 24 h),低氧组(5% O2, 24 h),低氧+ Mn-TBAP组(5% O2,24 h,Mn-TBAP 是一种ROS 清除剂)。用激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内ROS 的变化;用RT-PCR 和免疫组织化学方法分别测定HIF-1α mRNA 和蛋白的表达;用MTT 法检测细胞增殖程度。结果显示:(1) 低氧组 PASMCs内ROS水平明显高于常氧组(P<0.05),低氧+ Mn-TBAP 组ROS 水平明显低于低氧组(P<0.05),但仍高于常氧组(P<0.05) ;(2)低氧组及低氧+ Mn-TBAP 组的HIF-1α mRNA 和蛋白表达均高于常氧组(P<0.05),且低氧组表达高于低氧+ Mn-TBAP 组(P<0.05) ;(3) 低氧组细胞增殖明显高于常氧组和低氧+ Mn-TBAP 组(P<0.05),低氧+ Mn-TBAP 组细胞增殖高于常氧组(P<0.05)。结果表明:在低氧条件下大鼠PASMCs 中 ROS 水平明显升高,且ROS 的变化能够调节HIF-1α的表达,进而影响平滑肌细胞的增殖,提示ROS 可能在肺动脉高压的发病机制和低氧信号转导中具有重要作用。
- 赵建平周志刚胡红玲郭治汪涛甄国华张珍祥
- 关键词：低氧平滑肌细胞活性氧
- 缺氧肺动脉平滑肌细胞中线粒体ATP敏感钾通道开放对细胞色素C的分布及细胞增殖的作用被引量：14
- 2006年
- 为了探讨线粒体ATP敏感钾通道(mitochondrial ATP-sensitive K^+channel,mitoK_(ATP))和线粒体膜电位(ΔΨm)在细胞缺氧信号转导中的作用以及对缺氧肺动脉平滑肌细胞中细胞色素C在细胞内的分布及细胞增殖的影响,本实验将人肺动脉平滑肌细胞进行常氧或24h缺氧培养,并将标本分为六组：(1)对照组；(2)mitoK_(ATP)开放剂diazoxide组；(3)mitoK_(ATP)阻断剂5-HD组：(4)24h缺氧组：(5)24h缺氧+diazoxide组；(6)24h缺氧+5．HD组。利用激光共聚焦显微镜成像法检测ΔΨm：线粒体/胞浆成分分离试剂盒(BioVision)分离线粒体和胞浆成分后,Western blot检测两者细胞色素C：Western blot检测细胞中caspase-9的蛋白表达量；MTT法及PI染色后流式细胞仪检测细胞增殖情况。结果显示：(1)diazoxide作用24h后,R-123荧光明显增强,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显降低,caspase-9的蛋白表达显著减少,细胞增殖明显增多、凋亡减少,与正常对照组相比较,均P＜0．05；而5-HD作用24h与正常对照组比较,上述指标无明显变化(P＞0．05)。(2)缺氧24h组,结果与diazoxide组相似,R-123荧光明显增强,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显降低,caspase-9的蛋白表达显著减少,细胞增殖明显增多、凋亡减少,与正常对照组相比较,均P＜0．05：24h缺氧+diazoxide组与缺氧组相比较,R-123荧光明显增强,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显降低,caspase-9的蛋白表达显著减少,细胞增殖明显增多、凋亡减少(P＜0．05)；而24h缺氧+5-HD组与缺氧组比较,R-123荧光明显降低,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显升高,caspase-9的蛋白表达显著增加,细胞增殖明显减少、凋亡增多(P＜0．05)。上述实验结果提示,缺氧可以引起mitoK_(ATP)的开放以及ΔΨm的去极化,并进而抑制细胞色素C从线粒体释放到胞浆,抑制线粒体凋亡途径,从而参与并影响肺动脉高压
- 胡红玲张珍祥赵建平汪涛徐永健
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞缺氧线粒体膜电位细胞色素C
- 线粒体膜电位对缺氧人肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖的作用被引量：9
- 2006年
- 目的研究线粒体膜上ATP敏感钾通道(MitoKATP)的开放剂二氮嗪和线粒体膜电位在缺氧引起的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)内氧自由基的变化及细胞增殖/凋亡失衡中的作用。方法培养HPASMC并将所培养的细胞分为6组正常对照组(A组);MitoKATP阻断剂5-羟基癸酸盐(5-HD)组(B组);MitoKATP开放剂二氮嗪组(C组);慢性缺氧组(D组);慢性缺氧+二氮嗪组(E组);慢性缺氧+5-HD组(F组),每组样本数均为6。利用激光共焦显微镜成像检测线粒体膜电位,荧光染色检测细胞内氧自由基含量,免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、c-fos及c-jun的蛋白表达和四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况。结果C、D、E组细胞线粒体膜电位(以R123的荧光强度表示)分别为105±4、95±13、126±8,较A组(75±7)明显去极化(q值分别为5.474、3.659、9.213,P均<0.05);C、D、E组细胞内氧自由基含量分别为3045±126、3116±34、3236±31,与A组(2772±49)比较差异有统计学意义(q值分别为6.882、7.448、16.289,P均<0.05);C、D、E组细胞增殖活性[以MTT法检测出的A值表示]分别为0.305±0.022、0.328±0.078、0.440±0.023,与A组(0.237±0.013)比较差异有统计学意义(q值分别为2.993、4.017、8.919,P均<0.05),且E组线粒体膜电位、细胞内氧自由基含量、细胞增殖活性与D组比较差异有统计学意义(q值分别为5.554、8.841、4.902,P均<0.05)。F组线粒体膜电位、细胞内氧自由基含量、细胞增殖活性分别为71±4、2863±132、0.264±0.045,与D组(95±13、3116±34、0.328±0.078)比较差异有统计学意义(q值分别为4.367、5.907、2.832,P均<0.05)。结论二氮嗪或缺氧能够通过开放HPASMC线粒体膜上ATP敏感的钾通道,引起线粒体膜电位去极化,增加细胞内氧自由基的含量,最终导致HPASMC的增殖/凋亡的失衡,从而促进了缺氧性肺动脉重塑过程。
- 胡红玲汪涛张珍祥赵建平徐永健
- 关键词：肺动脉细胞低氧线粒体膜电位
- 线粒体ATP敏感钾通道调控哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖被引量：5
- 2009年
- 本文旨在探讨线粒体ATP敏感钾(mitochondrial ATP-sensitive K+,MitoKATP)通道对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖的影响及其调控机制。36只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为哮喘组(n=18)和正常组(n=18),哮喘组大鼠采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏及激发的方法制备哮喘模型,正常组大鼠吸入等量生理盐水。取各组大鼠肺组织,分离出ASMCs进行培养,将样本分6组分别进行干预:(1)正常组;(2)正常+MitoKATP通道开放剂diazoxide组(diazoxide组);(3)正常+MitoKATP通道阻断剂5-HD组(5-HD组);(4)哮喘(asthma)组;(5)asthma+diazoxide组;(6)asthma+5-HD组。利用罗丹明(Rhodamine123,R-123)荧光染色、激光共聚焦显微镜成像检测线粒体膜电位(ΔΨm),DCFH-DA荧光染色法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,RT-PCR检测核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡和MTT法检测细胞增殖情况。结果显示:(1)Diazoxide组与正常组相比,R-123荧光强度增强,ΔΨm去极化,ROS及NF-κB的表达增高,细胞增殖增多、凋亡减少(P<0.05);而5-HD组与正常组相比,上述指标均无显著差异;(2)与正常组相比,Asthma组R-123荧光强度增强,ΔΨm去极化,ROS及NF-κB的表达增高,细胞增殖增多、凋亡减少(P<0.05);Asthma+diazoxide组与Asthma组相比,R-123荧光强度和ΔΨm去极化增强,ROS及NF-κB表达增高,细胞增殖增多、凋亡减少(P<0.05);Asthma+5-HD组与Asthma组相比,R-123荧光强度和ΔΨm去极化减弱,ROS及NF-κB表达降低,细胞增殖减少、凋亡增多(P<0.05);(3)各组大鼠ASMCs的R-123荧光强度,NF-κB mRNA表达量与ROS含量均呈正相关;MTT的吸光度值与NF-κB mRNA表达量呈正相关,凋亡细胞百分比与NF-κB mRNA表达量呈负相关。以上结果提示,哮喘可引起大鼠ASMCs的MitoKATP通道开放及ΔΨm去极化,ΔΨm去极化促进ROS的表达,ROS可能作为信号分子刺激NF-κB表达增加,进而促进ASMCs增殖,参与
- 赵建平高敏叶永军胡伟华周志刚胡红玲
- 关键词：哮喘线粒体膜电位线粒体ATP敏感钾通道核因子ΚB平滑肌
- 线粒体ATP敏感钾通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞低氧诱导因子-1α表达及细胞增殖的作用被引量：5
- 2007年
- 本文旨在探讨线粒体ATP敏感钾(mitochondrial ATP-sensitive K+,MitoKATP)通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达和细胞增殖的影响。原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,分为常氧对照组、常氧+diazoxide(MitoKATP通道的选择性开放剂)组、常氧+5-hydroxydecanoate(5-HD,MitoKATP通道的选择性阻断剂)组、低氧对照组、低氧+diazoxide组、低氧+5-HD组,共6组,分别应用罗丹明123荧光技术检测各组大鼠肺动脉平滑肌细胞的线粒体膜电位,免疫组化检测HIF-1α的表达及酶联免疫检测仪检测细胞增殖的变化。结果显示,常氧+ diazoxide组与常氧对照组比较,罗丹明123荧光、HIF-1α表达及细胞增殖明显增强(P<0．05);低氧+diazoxide组与低氧对照组比较,罗丹明123荧光、HIF-1α表达及细胞增殖明显增强(P<0.05):常氧+5-HD组与常氧对照组比较,罗丹明123荧光、HIF-1α表达、细胞增殖没有明显变化(P>0．05);但低氧+5-HD组与低氧对照组比较,罗丹明123荧光明显减弱、HIF-1α表达及细胞增殖有所减弱(P<0．05)。结果提示:MitoKATP通道的开放能引起大鼠肺动脉平滑肌细胞线粒体膜去极化,并可以促进HIF-1α的表达及细胞增殖。
- 赵建平郭治周志刚陈俊胡红玲汪涛张珍祥
- 关键词：低氧低氧诱导因子-1Α线粒体膜电位平滑肌
- 缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞活性氧与缺氧诱导因子1α在细胞增殖中的作用被引量：1
- 2007年
- 活性氧可介导基因转录激活的启动和转录因子活性的调节。缺氧诱导因子1α（HIF-1α）是一种核转录因子，在缺氧性肺动脉高压（HPH）形成中起关键作用。我们观察缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）的活性氧变化，探讨其与HIF-1α和细胞增殖的关系。
- 赵建平周志刚郭治胡红玲张珍祥汪涛
- 关键词：缺氧诱导因子1Α肺动脉平滑肌细胞细胞增殖缺氧大鼠缺氧性肺动脉高压
- 线粒体膜电位对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内细胞色素C分布及细胞增殖的影响被引量：2
- 2008年
- 目的从线粒体ATP敏感性钾通道(MitoKATP)入手,研究在缺氧影响大鼠肺动脉平滑肌细胞内细胞色素C的分布及其引起细胞增殖变化中线粒体膜电位(Δψm)的作用。方法获取大鼠正常肺组织,分离出肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)进行常氧或慢性缺氧培养。将标本分为6组:①正常对照组;②MitoKATP开放剂Diazoxide组;③MitoKATP阻断剂5-hydroxydecanoate(5-HD)组;④慢性缺氧(CH)组;⑤CH+Diazoxide组;⑥CH+5-HD组。利用激光共聚焦显微镜成像检测线粒体膜电位,Western blot法检测线粒体和细胞质中细胞色素C蛋白含量,流式细胞仪检测细胞周期,MTT法检测细胞增殖情况。结果①Diazoxide作用24 h后,细胞R-123荧光强度明显增强,线粒体膜电位去极化,细胞胞质与线粒体细胞色素C的比值明显降低,细胞明显增殖,凋亡减少,与正常对照组比较均P<0.05;而5-HD作用24h与正常对照组比较,上述指标无明显变化,均P>0.05;②慢性缺氧24 h,结果与Diazoxide组相似,各项指标与正常对照组比较均P<0.05;CH+Diazoxide组与CH组比较,细胞R-123荧光强度明显增强,线粒体膜电位去极化,细胞胞质与线粒体细胞色素C的比值明显降低,细胞明显增殖,凋亡减少,与CH组比较均P<0.05;CH+5-HD组与CH组比较,细胞R-123荧光强度明显减弱,线粒体膜电位部分消失,细胞胞质与线粒体细胞色素C的比值明显升高,细胞增殖减少,凋亡增多,与CH组比较均P<0.05。结论缺氧可以引起MitoKATP的开放以及线粒体膜电位去极化,进而抑制了细胞色素C从细胞线粒体释放到细胞质,抑制线粒体凋亡途径,从而参与并影响了肺动脉高压的发生发展。
- 胡红玲张珍祥汪涛赵建平徐永健
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞缺氧钾通道线粒体膜电位细胞色素C
- 氨茶碱对哮喘大鼠肺组织TRAIL的表达及支气管肺泡灌洗液中T淋巴细胞凋亡的影响被引量：1
- 2006年
- 目的研究哮喘大鼠肺组织TRAIL的表达及支气管肺泡灌洗液(BALF)中T淋巴细胞凋亡情况,以及氨茶碱对其的影响。方法将大鼠分为4组:正常对照组、哮喘组、氨茶碱组及地塞米松组。应用免疫组织化学结合图像定量分析方法对TRAIL蛋白表达进行检测。急性分离大鼠BALF中T淋巴细胞,在植物凝聚素-P(PHA-P)的刺激下培养2 h,经流式细胞仪检测大鼠BALF中T淋巴细胞凋亡率。结果大鼠肺组织TRAIL呈组成性表达,哮喘时,其表达明显增加(P<0.05),氨茶碱可以减少哮喘大鼠肺组织TRAIL表达(P<0.05)。哮喘大鼠BALF中的T淋巴细胞凋亡率较正常大鼠明显下降(P<0.05),氨茶碱可以促进哮喘大鼠BALF中的T淋巴细胞凋亡(P<0.05)。结论氨茶碱可能通过抑制肺组织TRAIL的表达来抑制TRAIL的促炎作用,同时还可以通过促进哮喘大鼠气道的T淋巴细胞凋亡发挥抗炎作用。
- 胡红玲赵建平张珍祥徐永健
- 关键词：TRAIL蛋白哮喘T淋巴细胞细胞凋亡
