胡宝成
- 作品数：60 被引量：144H指数：7
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 人源抗HIV-1整合酶单链抗体基因的构建及表达
- 1998年
- 目的：获得人源抗ＨＩＶ－１整合酶单链抗体基因并在大肠杆菌及细胞中进行表达。方法：从人的抗ＨＩＶ－１整合酶的Ｆａｂ抗体基因片段中通过ＰＣＲ扩增出此抗体的重链可变区（ＶＨ）和轻链可变区（ＶＬ）基因，经一弹性连接肽连接构建成人源抗ＨＩＶ－１整合酶的单链抗体（ｓＦｖ）基因。将此单链抗体基因分别插入原核表达载体ｐＥＴ１９ｂ及小鼠的白血病病毒介导的逆转录病毒表达载体中。结果：ＤＮＡ序列分析结果表明，获得的单链抗体基因的ＶＬ属于人λ轻链Ｖλ第Ⅰ亚群，ＶＨ属于人的ＶＨ第Ⅱ亚群。结论：构建的人源抗ＨＩＶ－１整合酶单链抗体基因全长为７５６个碱基，在大肠杆菌及细胞中均获得了表达。表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析，此单链抗体相对分子质量约为２８０００。
- 胡宝成
- 关键词：整合酶单链抗体艾滋病毒基因治疗
- 肿瘤血管特异结合抗体ScFvH1的靶向性和抑瘤性被引量：2
- 2007年
- 目的:检测从肿瘤特异单链抗体库中筛选到的肿瘤血管特异结合单链抗体ScFvH1的靶向性和抑瘤性,探讨该抗体在癌症诊断和治疗中应用的可能性。方法:将该单链抗体基因插入到含绿色荧光蛋白(EGFP)基因及带有硫氧还原蛋白(Trx)基因的原核表达载体pET-28a(+)/EGFP及pTIG-Trx中,在大肠杆菌中进行表达,并经镍柱(Ni-NTA)纯化。建立人宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤模型,尾静脉注射纯化的单链抗体-EGFP融合蛋白,通过荧光显微镜观察肿瘤部位及其他器官中EGFP信号,考察该单链抗体的靶向性;同时在裸鼠致瘤部位注射纯化的单链抗体蛋白,观察该单链抗体对肿瘤生长的抑制性。结果:在大肠杆菌中表达了该单链抗体基因片段,并使单链抗体-EGFP融合蛋白得到了很好的表达,经镍柱纯化后得到了电泳级的单一条带。靶向性实验结果显示,单链抗体-EGFP融合蛋白在肿瘤部位得到了富集,而只注射EGFP蛋白的肿瘤组织中荧光很少,并且在裸鼠肺部组织中没有观察到EGFP荧光信号。抑瘤性实验发现,单链抗体处理组移植瘤生长速率与PBS组类似。结论:从肿瘤特异单链抗体库中筛选到的肿瘤血管特异抗体ScFvH1具有较好的肿瘤血管靶向性,而对肿瘤生长的抑制作用不明显,为进一步研究抗体在肿瘤诊断和治疗中的应用奠定了基础。
- 秦玺马航航薛建红胡宝成
- 关键词：肿瘤血管单链抗体靶向性
- 特异性肝癌细胞结合单链抗体的筛选及克隆表达被引量：3
- 2002年
- 用人肝癌细胞系SMMC7721免疫小鼠,提取脾细胞总RNA,构建单链抗体库,从中筛选到1个与人肝癌细胞系HepG2特异性结合的噬菌体-单链抗体。此单链抗体与HepG2细胞结合滴度比正常肝细胞低100倍以上。构建表达质粒pTrx-scFv5-56,单链抗体scFv5-56在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地进行了可溶性表达。
- 李赏胡宝成绳纪坡黄培堂
- 关键词：噬菌体展示单链抗体人肝癌细胞系
- 转化的大鼠胚胎成纤维细胞系与p53^(val135)功能关系的研究被引量：8
- 2002年
- A1-5是一株典型的温度敏感的p53val135细胞系,许多实验室用它来研究p53的功能。我们首次报道了A1-5细胞表现出非常强的抗辐射性并伴随不同寻常强的G2延迟效应。B4是另一株温度敏感的p53val135细胞系,A1-5与B4细胞都是来源于同样的原代转化的大鼠胚胎成纤维细胞系,只是来自不同的转染实验。本文阐明了A1-5细胞非常强的抗辐射性及不同寻常强的G2停滞效应与p53val135的功能无关。A1-5细胞系具有的特殊表型是研究放射敏感性新性质的独特的模型。
- 胡宝成Iliakis George王亚
- 关键词：基因功能
- 脆性组氨酸三联体突变体在DNA损伤应答中的作用机制
- 2013年
- 目的:用建立的稳定表达脆性组氨酸三联体(Fhit)突变体的细胞株,研究Fhit与复制蛋白A(RPA)之间的相互作用对细胞在DNA损伤后的影响。方法:用电离辐射或DNA损伤诱导剂喜树碱处理稳定表达Fhit突变体的阳性细胞株HeLa-FhitA/D/F后,通过流式细胞技术、MTT比色法及克隆形成实验,检测这些细胞系的细胞周期变化情况以及对DNA损伤诱导剂的敏感性。结果:DNA损伤诱导剂处理后,Fhit突变体基因的高表达可以使细胞表现出更强的G2期阻滞及对DNA损伤诱导剂更耐受。结论:Fhit与RPA相互作用的改变影响了细胞对DNA损伤诱导剂的耐受性,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。
- 于芳绳纪坡胡宝成
- 关键词：脆性组氨酸三联体突变体
- 肿瘤睾丸抗原CT45-5在DNA损伤应答中的作用
- 2013年
- 目的:用建立的CT45-5-siRNA研究肿瘤睾丸抗原CT45-5在DNA损伤应答中的作用。方法:通过靶向CT45-5基因小干扰RNA(siRNA)下调CT45-5的表达,用MTT比色法检测经喜树碱和依托泊苷处理后细胞对DNA损伤诱导剂的敏感性,用流式细胞技术检测电离辐射后细胞周期的变化。结果:在DNA损伤诱导剂处理后,在脆性组氨酸三联体(Fhit)高表达细胞中下调CT45-5的表达可以使细胞表现出更强的G2期阻滞及对DNA损伤诱导剂更耐受,而在Fhit缺失表达的细胞中却没有此现象。结论:CT45-5可能是以Fhit依赖的途径参与了DNA损伤应答。
- 柯波绳纪坡于芳林宇翔罗维胡宝成
- 关键词：RNA干扰脆性组氨酸三联体
- 脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用的鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的:研究脆性组氨酸三联体(Fhit)对ATR/CHK1通路的影响,确定Fhit与复制蛋白A(RPA)存在相互作用,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法:将Fhit全长基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达纯化GST-Fhit融合蛋白,并用GST沉降技术研究Fhit与RPA是否在体外存在相互作用;在表达Fhit的人细胞中用免疫共沉淀技术分析Fhit与RPA是否在体内存在相互作用,同时用免疫荧光染色方法研究Fhit与RPA在细胞内是否可以共定位。结果:通过免疫共沉淀、免疫荧光染色及GST沉降技术,确定了Fhit与RPA在体内及体外均可以相互作用。结论:确定了Fhit与RPA之间存在相互作用,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。
- 于芳绳纪坡张勇张鸿声高宁张宏达胡宝成
- 关键词：脆性组氨酸三联体蛋白质相互作用
- 与抗辐射性相关蛋白AA12相互作用蛋白的筛选被引量：1
- 2004年
- 将AA12基因克隆入酵母双杂交载体中,转化入酵母菌AH109,Western印迹检测其在酵母中的表达;将转化有AA12基因的酵母菌AH109培养再转化人前列腺cDNA文库质粒,检测报告基因的表达情况。Western印迹结果表明AA12可以在酵母菌AH109中表达。共转化子中有2个β-半乳糖苷酶活性分析和α-半乳糖苷酶活性分析结果为阳性的克隆,但测序结果为相同序列。本实验筛选到1个与AA12相互作用的蛋白,此结果为进一步研究新基因AA12的功能奠定了基础。
- 薛恒钢胡宝成刘爽田媛黄翠芬王亚
- 关键词：AAWESTERN印迹相互作用蛋白新基因酵母双杂交共转化
- 人尿激酶原cDNA在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中高效表达研究被引量：3
- 1993年
- 通过构建高效表达载体,改进转染方法,与二氢叶酸还原酶(dhfr)基因共扩增等手段在CHO细胞内高效表达了人尿激酶原(Pro-UK)cDNA。首先将pro-UK cDNA插入到SRα启动子的下游,构建成表达质粒pMG10102,在COS-7细胞内进行暂时性表达,结果表明此启动子的表达水平比SV40早期启动子高约5倍。然后将质粒pMG10102和pSV2-dhfr线性化后用磷酸钙共沉淀法转染CHO-dhfr^-细胞,经一系列筛选后获得20个能表达pro-UK的细胞克隆,纤维蛋白溶解平板法(FAPA)测定表达水平为12.5—100IU/10~6 cells/d.再经MTX加压共扩增,得到9株高表达细胞系,其中最高的表达水平达到400—500IU/10~6 cells/d。经2—3个月连续传代,表达水平未下降,表明细胞株是稳定的。Western Blot分析证明细胞分泌的重组pro-UK具有与天然pro-UK相同的分子量,而且培养液中不加蛋白酶抑制剂时,分泌的重组UK大部分为单链(60%以上)。
- 程度胜俞炜源韩素文李秀珍李风知胡宝成方继明黄翠芬
- 关键词：尿激酶原CDNA基因工程
- 肿瘤-睾丸抗原CT45-5的表达纯化及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2009年
- 目的:原核表达、纯化肿瘤-睾丸抗原CT45-5基因,并制备多克隆抗体,以研究其在Fhit特异的信号通路中的作用。方法:设计出特异针对CT45-5的引物,通过RT-PCR扩增出CT45-5的编码基因,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,经ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果:原核表达和纯化了CT45-5,并获得了其多克隆抗体,抗体效价达到1∶12800,Western印迹结果显示,该抗血清能够特异识别原核及真核细胞表达的CT45-5蛋白。结论:肿瘤-睾丸抗原CT45-5能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究CT45-5的功能奠定了基础。
- 张勇张鸿声于芳绳纪坡高宁胡宝成
- 关键词：表达纯化多克隆抗体
