肖素勤
- 作品数：13 被引量：28H指数：3
- 供职机构：昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程技术研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 二羟基丙酮激酶的原核表达载体及其构建方法和应用
- 本发明提供一种巴斯德毕赤酵母DAK的原核表达载体(pET28a-DAK)，该载体含有T7启动子和终止子、细菌核糖体结合位点和DAK基因及一个组氨酸标签，从巴斯德毕赤酵母中克隆出DAK基因，用T7启动子控制它在大肠杆菌中的...
- 陈丽梅肖素勤孙振张婧
- 文献传递
- 假丝酵母二羟基丙酮合成酶的原核表达载体及其构建方法和应用
- 本发明提供一种高效表达假丝酵母二羟基丙酮合成酶蛋白DAS的原核表达载体(pET28a-DAS)，该载体含有T7启动子和终止子、细菌核糖体结合位点和DAS基因及一个组氨酸标签，从假丝酵母中克隆出DAS基因，用T7启动子控制...
- 陈丽梅肖素勤孙振张婧
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- 在叶绿体中过量表达酵母菌的二羟基丙酮合成酶和二羟基丙酮激酶构建植物的光合作用甲醛同化途径
- ＜正＞甲醛（HCHO）是工业生产中应用最广泛的化学原材料。随着经济的发展和人民生活水平的提高,各种含有甲醛的原料制成的建筑装饰材料已走入千家万户,使甲醛成为一种无处不在的空气污染气体。
- 肖素勤潘正波宋中邦李昆志陈丽梅
- 文献传递
- 在叶绿体中过量表达AOD1和HPS-PHI创建光合甲醇同化途径增加烟草同化甲醇能力
- 2013年
- 最近的研究证明在叶绿体内过量表达甲基营养细菌RuMP中固定HCHO的关键酶6-磷酸己酮糖合成酶(HPS)和6-磷酸果糖异构酶(PHI)的融合蛋白HPS-PHI可以在转基因天竺葵中构建一条甲醛光合同化途径从而提高植物对甲醛的同化和脱毒能力。甲醇氧化酶(AOD1)是甲基营养型酵母甲醇代谢途径的第一个关键酶,可催化甲醇氧化为甲醛。在烟草叶绿体中过量表达AOD1或/和HPS-PHI产生过量表达AOD1(AO)、HPS-PHI(AB)、同时过量表达AOD1和HPS-PHI(AA)的转基因烟草。用2和6mmoL/L^(13)CH_3OH处理3种转基因烟草和野生型烟草(WT),^(13)CNMR分析表明AO植株中积累的H^(13)COOH最多,[U-^(13)C]Gluc和[U-^(13)C]Fruc的生成量在AO和WT间无显著差异,在AA和AB中的产生量显著高于AO和WT,且在AA中的生成量又高于AB,这种差异在6mmol/L^(13)CH_3OH处理植株中比2 mmol/L更为明显。这些结果证实在叶绿体中过表达AOD1增加烟草氧化甲醇为甲酸的能力,同时过量表达AOD1和HPS-PHI在烟草中成功地构建一个甲醇光合同化途径,提高烟草同化甲醇为糖类物质的能力。
- 刘蕾孙振宋中邦肖素勤陈丽梅
- 关键词：转基因烟草
- 常春藤代谢气体甲醛中间产物及甲醛胁迫下叶片相关生理特性变化分析被引量：9
- 2013年
- 很多研究发现常春藤(H.helix)能吸收甲醛(HCHO),对常春藤气体HCHO吸收能力分析表明常春藤能有效清除空气中污染的气体甲醛.13CNMR分析发现用高浓度气体H13CHO处理常春藤,在叶片中出现的主要代谢中间产物为13CH3OH、[[5-13C]Met、U-13C]Gluc、[U-13C]Fruc、[3-13C]Ser、[2-13C]Gly、[5-13C]Arg、[3-13C]Ala、[4-13C]malate、[3-13C]malate及少量的[2-13C]Ser和H13COOH.此外,在气体H13CHO处理短时间的叶片抽提物中有游离H13CHO和甲醛加合物H13CHO-Gln,证实H13CHO确实被吸收到叶片细胞中,随着处理时间的增加这两个峰消失,说明通过自身的代谢作用H13CHO被有效清除.在气体甲醛胁迫下,常春藤叶片丙二醛、过氧化氢和羰基化蛋白质的含量升高,说明甲醛胁迫在常春藤叶片里诱发了氧化损伤,从而使叶片气孔传导率下降,甲醛吸收速率和效率减小.
- 轩秀霞肖素勤游览陈丽梅
- 关键词：常春藤甲醛污染生理响应
- 叶面喷施甲醇和乙醇对万年青生理特性的影响被引量：2
- 2013年
- 为了比较甲醇和乙醇对植物生理特性的影响,分别用5%(V/V)的甲醇和乙醇均匀喷洒于温室条件下盆栽培养的万年青叶片上,以喷施蒸馏水的植物为对照,每周喷施2次,喷施3周后分析这两种醇对万年青叶片生长、生理特性及相关光合基因表达的影响。结果表明,喷施甲醇和乙醇均增加了万年青叶片鲜重、可溶性总蛋白质含量、气孔导度、蒸腾速率、胞间CO2浓度、净光合速率、叶绿素a、b及总叶绿素的含量,降低了过氧化氢的含量,提高了质膜H+-ATPase及H+-泵活性,并且乙醇的作用效果比甲醇更加明显。RT-PCR分析结果表明,光合作用相关基因叶绿素a/b结合蛋白基因(Cab)和铁氧还蛋白-2编码的基因(2-FdO)在处理12h时被甲醇抑制但却被乙醇诱导,72h时被甲醇诱导但却被乙醇抑制;两种醇均诱导光系统Ⅱ反应中心PsbP家族蛋白编码基因(PsbP)的表达。由此推测甲醇和乙醇可能在植物中作为信号分子起作用,且乙醇的刺激效果比甲醇更加显著。
- 孙利利赵艳周磊刘昂王莎莎肖素勤陈丽梅
- 关键词：甲醇乙醇生理特性
- 通路克隆入门载体pEN-L4＊-PrbcS-＊T-gfp-L3＊的构建及其应用被引量：1
- 2011年
- 为了利用通路克隆(Gateway)技术构建一个含有两个目的基因表达盒的植物表达载体,并把目的基因编码的蛋白质定位到转基因植物的叶绿体中,通过定点突变技术,在含有attL4和attL3重组位点的Gateway入门载体pEN-L4-2-L3中产生HindⅢ和XhoⅠ的酶切位点,然后在这两个酶切位点之间插入一个含有1,5-二磷酸核酮糖羧化酶小亚基的光诱导型启动子(PrbcS)及其叶绿体基质定位序列(*T)和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因(gfp)的DNA片段,获得pEN-L4*-PrbcS-*T-gfp-L3*入门载体.用该载体和另一个含有attL1和attL2重组位点的入门载体(pENTR*-PrbcS-*T-gus)与Gateway的目的载体pK7 m34GW2-8 m21GW3进行LR重组反应可以构建一个能串联gfp和gus两个报告基因表达盒的植物表达载体pKm-35S-PrbcS-*T-gfp-PROLD-PrbcS-*T-gus,所构建的植物表达载体转化烟草后,gfp和gus基因能插入到转基因烟草的基因组中并正常表达,所表达的GFP蛋白可正确定位到转基因植物的叶绿体中,而GUS蛋白也可以在叶片中表达.利用此表达载体通过一次转化事件不仅可以完成两个目的基因的转化操作,而且还可以利用叶绿体基质定位序列(*T)把PrbcS控制表达的目的蛋白直接定位到转基因植物的叶绿体中.因此pEN-L4*-PrbcS-*T-gfp-L3*入门载体的应用进一步扩大了Gateway技术及植物表达载体的应用范围,为叶绿体基因工程操作提供了一个更方便的技术平台.
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- 用于通路(Gateway)克隆技术的植物表达载体研究进展被引量：6
- 2012年
- 通路(Gateway)克隆技术是根据λ噬菌体基因组和大肠杆菌基因组之间的位点专一性重组分子机制开发的一套分子克隆新技术。利用该技术LR反应构建目的基因的表达载体时不需要经过酶切和连接等繁琐而又费时的过程,因此,可以节省很多时间。为了扩大Gateway技术在植物基因工程领域的应用,最近有很多研究机构和研究小组开发了能用于组成型或诱导型表达目的基因、基因沉默、启动子分析、蛋白质亚细胞定位、蛋白质/蛋白质相互作用、多个DNA片段的模块化组装和DNA组片段功能验证等研究用的植物表达载体。该文对这些技术的研究进展进行了综述。
- 肖素勤孙振轩秀霞陈丽梅
- 关键词：植物表达载体
- 液体甲醛胁迫下天竺葵叶片甲醛代谢途径对甲醛吸收的贡献作用被引量：1
- 2015年
- 通过2mmol/L H13 CHO溶液处理天竺葵叶片4、24和48h,以及用2、4和6mmol/L HCHO溶液处理天竺葵叶片4h,13 C-NMR分析H13 CHO在天竺葵叶片内的具体代谢途径及主要代谢途径对甲醛吸收的贡献.在时间梯度处理中,天竺葵叶片枸橼酸（citric acid,Cit）的含量一直处于上升趋势,在处理48h后,其相对信号积分达到未处理天竺葵叶片（control,CK）的4.54倍.13C-糖类物质[U-13C]葡萄糖（glucose,Gluc）和[U-13C]果糖（fructose,Fruc）的含量在处理的前4h下降再上升,最后为CK的1.72和1.94倍.在浓度梯度处理中,Cit的含量随HCHO浓度增大而明显上升,最后为CK的7.58倍,13C-糖类物质[U-13C]Gluc和[U-13C]Fruc的含量随HCHO浓度增大先大幅下降后稍有上升,最后为CK的0.15和0.2倍.结合天竺葵的HCHO吸收曲线,表明在甲醛胁迫的早期（0-24h）,叶片中起作用的主要甲醛代谢途径是从甲醛产生Cit的途径;在胁迫后期（24-48h）,叶片中产生Cit的途径和13C-糖类物质[U-13C]Gluc和[U-13C]Fruc合成途径同时起作用,使这个时期内叶片从溶液中吸收甲醛量显著增加.在这一时期可能还有部分[U-13 C]Gluc和[U-13 C]Fruc流入糖酵解或三羧酸（tricarboxylic acid,TCA）循环使有机酸的信号峰增强.综上可知,天竺葵主要通过Cit和糖类物质（[U-13C]Gluc和[U-13C]Fruc）合成途径来代谢液体甲醛.
- 韩双肖素勤孙振轩秀霞李昆志陈丽梅
- 关键词：天竺葵
- 叶片喷施C1化合物对拟南芥生理特性和C1代谢、光合作用及胁迫相关基因表达的影响被引量：9
- 2011年
- 为了比较甲醇、甲醛和甲酸3种C1化合物对植物生理特性及基因表达的影响,更好地理解这3种C1化合物的作用机制,分别用5 mmol·L-1甲醇、甲醛、甲酸溶液均匀喷洒于温室条件下盆栽培养的拟南芥叶片上,以喷蒸馏水的植物为对照,每周喷1次,4周后分析施用这3种C1化合物对其生长及生理特性的影响.结果表明:甲醇促进拟南芥生长,而甲醛和甲酸抑制其生长,甲醛的抑制作用特别明显;甲醇处理显著降低了叶片花青素含量但提高了叶绿素a含量及叶绿素a/b的比值,甲醛处理显著降低了叶绿素a含量及叶绿素a/b的比值,甲酸处理显著提高了叶绿素a含量但大幅度降低了叶绿素b含量从而使叶绿素a/b的比值比对照高2倍;3种C1化合物处理都能增加叶片中可溶性总蛋白质含量,甲醇处理尤为明显,只有甲醛处理可显著提高叶片可溶性总糖、H2O2及羰基化蛋白质含量,产生氧化胁迫.对基因表达谱进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的结果表明:所选的大多数光合作用相关基因的表达被甲醇诱导,而甲醛抑制它们的表达但诱导很多胁迫相关基因的表达,甲酸对大多数光合作用相关基因的表达没有显著影响;3种C1化合物对大多数C1代谢相关基因没有显著影响,但都抑制5,10-亚甲基-四氢叶酸还原酶基因的表达.
- 王莎莎孙利利肖素勤周磊孙振陈丽梅
- 关键词：甲酸拟南芥基因表达
