盛勇
- 作品数：10 被引量：1H指数：1
- 供职机构：上海交通大学更多>>
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- 相关领域：生物学文化科学自动化与计算机技术更多>>
- CRISPR/Cas13a系统在大肠杆菌RNA编辑过程中的逃逸现象
- 2024年
- 【目的】在大肠杆菌(Escherichia coli)MG1655-ΔrecA和Escherichia coli DH10B中构建CRISPR/LshCas13a质粒干扰系统,通过靶向非必需基因lacZ和必需基因polA,分别分析RNA编辑实验中的逃逸现象。【方法】选取来自沙氏纤毛菌(Leptotrichia shahii)中的Cas13a蛋白编码基因LshCas13a,构建可诱导的CRISPR/LshCas13a的RNA编辑系统相关质粒,选取MG1655-ΔrecA和DH10B为研究对象。通过Crisporo算法,设计靶向lacZ和polA的CRISPR RNA(crRNA)序列,考察利用LshCas13a质粒干扰实验靶向lacZ和polA的逃逸现象。再通过对逃逸菌落的数量和序列分析评估LshCas13a系统的逃逸现象,结合PCR和Sanger测序技术探究LshCas13a系统的逃逸事件。选取通过插入序列(insertion sequence,IS)转座破坏LshCas13a系统的LshCas13a基因的逃逸菌落,通过监测OD_(600)进一步考察菌株的生长情况。【结果】利用LshCas13a系统靶向MG1655-ΔrecA和DH10B中的lacZ和polA,发现靶向lacZ时,MG1655-ΔrecA通过LshCas13a基因点突变和IS转座突变方式逃逸;靶向polA时,MG1655-ΔrecA和DH10B通过点突变LshCas13a基因、IS转座和突变crRNA的直接重复(direct repeat,DR)序列等方式逃逸。LshCas13a编码基因的突变促进了菌株生长的恢复。【结论】本研究利用LshCas13a质粒干扰系统研究了E.coli宿主RNA编辑中的多样化逃逸现象,包括了染色体编码的IS介导的LshCas13a转座突变、LshCas13a点突变、crRNA的DR序列突变或重组等情况。本研究为进一步优化CRISPR/LshCas13a基因编辑系统奠定了基础。
- 张悦许杰张悦盛勇许杰王斌张蓓盛勇张丽
- 关键词：大肠杆菌
- 一种高效低毒四霉素B衍生物及其定向高产代谢工程方法
- 本发明公开了一种高效低毒四霉素B衍生物及其定向高产代谢工程方法；所述四霉素B衍生物，分子式为C<Sub>35</Sub>H<Sub>55</Sub>NO<Sub>12</Sub>，化学结构式为：<Image file="...
- 康前进盛勇白林泉欧一新
- 文献传递
- 一种高效低毒四霉素B衍生物及其制备和应用
- 本发明公开了一种高效低毒四霉素B衍生物及其制备和应用；所述四霉素B衍生物，分子式为C<Sub>35</Sub>H<Sub>55</Sub>NO<Sub>12</Sub>，化学结构式为：<Image file="DDA00...
- 康前进盛勇白林泉
- 文献传递
- Nonomuraea candida HMC10^(T)中新结构套索肽noncaromin生物合成基因簇的克隆及异源表达被引量：1
- 2022年
- 【目的】本研究旨在通过定向克隆菌株Nonomuraea candida HMC10^(T)中一个新的Ⅱ型套索肽类生物合成基因簇,通过在放线菌底盘宿主中的异源表达,获得新结构套索肽noncaromin,并完成其抑菌活性分析。【方法】通过anti SMASH软件分析菌株N.candida HMC10^(T)全基因组序列,确定新的Ⅱ型套索肽noncaromin的生物合成基因簇(biosynthetic gene cluster of noncaromin,nonc-BGC)。然后,利用ExoCET重组技术(exonuclease combined with RecET recombination)获得完整的nonc-BGC,得到重组质粒pJQK652,并通过λ-Red重组技术改造得到整合型质粒pJQK653。采用接合转移方法,将该质粒分别导入白色链霉菌、2株变铅青链霉菌、2株天蓝色链霉菌和红色糖多孢菌宿主中进行异源表达,再通过发酵和分离纯化获得目标套索肽noncaromin。最后,利用QTOF-ESI-MS^(2)完成套索肽noncaromin的结构鉴定,并通过抗菌活性检测确定该化合物的生物活性。【结果】本研究利用ExoCET技术成功获得了完整的nonc-BGC,在6种放线菌宿主中成功异源表达,完成了noncaromin的结构鉴定,确定了其具有微弱的抗枯草芽孢杆菌活性。【结论】本研究在克隆得到新结构套索肽nonc-BGC的基础上,实现了该基因簇在6个放线菌底盘宿主中的成功表达,获得了1个具有微弱抑制枯草芽孢杆菌活性的新结构Ⅱ型套索肽noncaromin。本研究结果为发掘菌株N.candida HMC10~T及其他放线菌中的新结构化合物提供了借鉴。
- 韩舒婷马婧贤盛勇盛勇邢利罗晓霞罗晓霞白林泉邓子新
- 关键词：异源表达活性检测
- 染色体DNA琼脂糖包埋法辅助的ExoCET技术克隆放线菌天然产物生物合成基因簇
- 2022年
- 【目的】本研究旨在通过将琼脂糖包埋染色体DNA的方法与ExoCET重组技术相结合,建立放线菌天然产物生物合成基因簇的捕获方法。然后将克隆基因簇导入通用底盘宿主中,实现目标生物合成基因簇的异源表达。【方法】首先,利用低熔点琼脂糖包埋技术制备菌株的染色体基因组总DNA,再用限制性内切酶消化含有染色体DNA的琼脂块,获得线性化的DNA样品;然后利用ExoCET重组技术,以p15A线性载体片段将目标基因簇线性片段进行捕获;再通过PCR-targeting的方法向目标质粒中引入所需的接合转移DNA元件。接着,将改造质粒通过接合转移导入到Streptomyces coelicolor M1252宿主中,获得不同的重组菌株。最后,对不同的菌株进行发酵并提取化合物,最后进行活性检测以及质谱检测。【结果】通过该方法,从菌株S.lincolnensis NRR2936中成功获得了林可霉素生物合成基因簇(lmb-BGC),从菌株Nonomuraea nitratireducens WYY166^(T)中克隆得到了2个核糖体肽类化合物的生物合成基因簇(nioblantin,niob-BGC和nitblantin,nitb-BGC),并实现了lmb-BGC在天蓝色链霉菌M1252中的成功表达。【结论】本研究通过将低熔点琼脂糖包埋技术与ExoCET重组技术进行合理整合,定向克隆得到了林可霉素以及2个新颖的羊毛硫肽类化合物的生物合成基因簇。然后,分别对重组质粒改造后,在天蓝色链霉菌M1252宿主中进行表达,分别获得重组菌株MJX01、MJX02和MJX04。最后,利用质谱以及活性测试的手段对发酵提取物进行了检测,确定了林可霉素生物合成基因簇在天蓝色链霉菌M1252中成功表达。本研究为通过基因簇克隆和异源表达发掘新化合物奠定了基础。
- 马婧贤韩舒婷盛勇盛勇邢利罗晓霞罗晓霞白林泉康前进邓子新
- 关键词：林可霉素异源表达
- 一种高效低毒四霉素B衍生物及其定向高产代谢工程方法
- 本发明公开了一种高效低毒四霉素B衍生物及其定向高产代谢工程方法；所述四霉素B衍生物，分子式为C<Sub>35</Sub>H<Sub>55</Sub>NO<Sub>12</Sub>，化学结构式为：<Image file="...
- 康前进盛勇白林泉欧一新
- 文献传递
- 一种抗真菌四霉素B定向高产的代谢工程方法
- 本发明公开了一种抗真菌四霉素B定向高产的代谢工程方法；采用对菌株刺孢吸水链霉菌北京变种CGMCC4.1123中制霉菌素生物合成基因簇聚酮合酶基因nysI的同框缺失技术，获得的基因突变菌株不仅实现了四霉素组分的定向生产，而...
- 康前进盛勇白林泉
- 文献传递
- 一种高效低毒四霉素B衍生物及其制备和应用
- 本发明公开了一种高效低毒四霉素B衍生物及其制备和应用；所述四霉素B衍生物，分子式为C<Sub>35</Sub>H<Sub>55</Sub>NO<Sub>12</Sub>，化学结构式为：<Image file="DDA00...
- 康前进盛勇白林泉
- 文献传递
- 一种抗真菌四霉素B定向高产的代谢工程方法
- 本发明公开了一种抗真菌四霉素B定向高产的代谢工程方法；采用对菌株刺孢吸水链霉菌北京变种CGMCC4.1123中制霉菌素生物合成基因簇聚酮合酶基因nysI的同框缺失技术，获得的基因突变菌株不仅实现了四霉素组分的定向生产，而...
- 康前进盛勇白林泉
- 文献传递
- 同步线路复用设备（SLM-16）故障分析方法的研究
- 该文首先将SLM-16系统的故障类型分为工艺、器件、性能的三大类,便于对产品故障进行定性分析.然后针对SLM-16系统的故障维修中存在的缺陷,提出了一套用于故障分析的改进方案.论文分析了现有的故障分析法--直接法的缺陷,...
- 盛勇
- 关键词：信息库
- 文献传递
