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一种利用海洋链霉菌发酵制备溶菌酶的方法: 本发明涉及一种利用海洋链霉菌发酵制备溶菌酶的方法。目前溶菌酶主要从蛋清中提取，产量有限。本发明方法首先将海洋链霉菌菌种接种于固体培养基中进行恒温培养，将种子液菌种接种于液体培养基中进行培养，制成种子液；然后将种子液进行放...; 王首锋赵小立

黄瓜子叶离体后的一些生理变化被引量：4: 1998年; 成熟种子的子叶离体后，在无外源激素和营养供应的滤纸保湿（26±1℃，2．92Wm-2，14h光照）条件下培养。0—4d内子叶的面积大小和鲜重迅速增加而干重基本保持不变，4d后子叶面积和鲜重继续增加但速度减慢，干重迅速下降；呼吸速率和叶绿素含量4d前稳定上升，第4天达到峰值后下降．离休后6d内，子叶中矿质元素含量发生了一定的变化；除Put含量在第2天有所下降外，子叶中Spm、SPd和Cad含量均不断上升，但上升幅度不相同，因此，离体并没有削弱黄瓜子叶多胺合成；GA3和ABA含量有不同程度的上升，但IAA和ZT含量剧增，表明离休子叶有很好的激素合成能力．离体后2d内，子叶中DNA含量、RNA含量、酸溶蛋白含量均成倍增加，此后DNA含量迅速下降，酸溶蛋白含量呈彼动状，RNA含量基本保持同样水平；0—4d碱溶蛋白含量不断减少，这表明子叶离体0—4d有活跃的核酸、蛋白质代谢活动．; 王首锋梁海曼周菊华; 关键词：黄瓜离体子叶生理性状

甲硫氨酸对黄瓜种子萌发、幼苗生长及离体子叶成花的影响被引量：2: 2007年; 以黄瓜种子为材料,采用甲硫氨酸(Methionine,Met)浸种的方法,研究了不同浓度Met对黄瓜种子萌发、幼苗生长及离体子叶成花的影响.结果发现:(1)10-4M Met处理3 h显著促进苗的生长而10-5M Met浸种处理则有利于子叶的生长;(2)10-5M Met浸种处理显著促进离体子叶成花;(3)离体子叶培养物的花芽分化力与子叶离体前的子叶/苗的鲜重比呈显著的正相关性(P<0.01);(4)添加10-5M DNA去甲基化试剂5-氮胞苷(5-Aza-cgtidine,5-Aza)能逆转10-5M Met处理对离体子叶培养物成花的促进作用.上述结果说明:10-5M Met浸种3 h能显著促进子叶培养物的花芽(无论直接花还是间接花)形成,Met对离体子叶成花的诱导作用可能是作为甲基供体通过DNA甲基化途径来实现的.; 王首锋方杰胡荣飞梁海曼; 关键词：黄瓜子叶甲硫氨酸浸种 DNA甲基化

不同条件下的大麦叶肉原生质体对电击导入外源荧光物质的影响被引量：1: 1994年; 本文以钙黄素为荧光标记物,使用电击法,研究了不同条件,如浸种液、苗龄、培养基、酶解时间等和电击参数对大麦叶肉原生质体的分离得率及电击导入外源荧光物质的影响。通过电击成功地将荧光标记物钙黄素导入大麦叶肉原生质体内。上述条件和电击参数对获得有活力的大麦叶肉原生质体的数量及电击导入钙黄素的频率均有明显的影响。这些实验结果为进一步进行电击导入GUS等外源基因于大麦叶肉原生质体内、并实现瞬间表达的研究打下了实验基础。; 钟华鑫黄孝俊赵小立张铭王首锋周菊华梁海曼; 关键词：大麦叶肉原生质体电击法

Identification of Phosphorus Starvation Inducible Genes in Rice by Suppression Subtractive Hybridization被引量：2: 2003年; Phosphorus is one of the three essential macroelements for plant growth. Plants respond to phosphorus starvation through adaptive mechanisms involved in morphological, biochemical and molecular changes. To investigate the molecular background of the adaptive mechanisms, the suppression subtractive hybridization (SSH) method was used to construct a rice phosphorus-starvation ( Pi-starvation) induced cDNA library. Through screening of the cDNA library and sequencing of the enriched cDNAs, 18 known genes and 47 novel genes were identified. The known genes are involved in different metabolic processes, including phosphate uptake and transport, signal transduction, protein synthesis and degradation, carbon metabolism and stress response. Northern analysis was performed to detect the expression patterns of some known genes and novel genes under different phosphorus levels. Different expression patterns of the selected genes were identified, which suggests that genes involved in different pathways may have different responses to Pi-starvation.; 夏铭王首锋王小兵李海波吴平; 关键词：RICE

重组人乙酰胆碱酯酶基因在毕赤酵母中分泌表达及其对农药的敏感性评估被引量：1: 2019年; 乙酰胆碱酯酶是用酶抑制法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的关键用酶,本研究利用毕赤酵母表达系统分泌表达人乙酰胆碱酯酶,并评估其对8种农药的敏感性,为工业化大规模生产高敏感性酶源奠定基础。根据GenBank上已发表的人乙酰胆碱酯酶(human acetylcholinesterase,hAChE)基因核酸序列设计引物,从pReceiver-M02-hAChE-ORF质粒中扩增出hAChE的开放阅读框(open reading frame,ORF)片段,接着利用SnaBⅠ和AvrⅡ双酶切将其克隆至载体pPIC9K中,构建pPIC9K-hAChE表达载体,然后将SalⅠ线性化的pPIC9K-hAChE电转化至毕赤酵母GS115中,在含4.00mg/mLG418抗性平板上筛选获得阳性克隆,最后经0.5%甲醇诱导分泌表达144h,发现其发酵上清液的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱在65kDa处有一条明显的蛋白条带,大小与预期的hAChE蛋白一致。利用Q-Sepharose FF柱层析法对其总蛋白进行纯化,获得了较纯的人乙酰胆碱酯酶。用Bradford法测得发酵上清液中hAChE蛋白质量浓度为1.330mg/mL,占总蛋白的5.58%,纯化后比酶活达到1080nmol(/ min mL)。通过初步计算比对重组工程菌发酵上清液对8种常见农药的半抑制浓度,得出敌百虫>敌敌畏>克百威>马拉硫磷>乐果>甲胺磷>甲萘威>毒死蜱,即人乙酰胆碱酯酶对毒死蜱最敏感。; 杨芳芳李佳慧张赛南王珍廖志银王首锋; 关键词：毕赤酵母分泌表达蛋白纯化酶活测定

一种利用海洋链霉菌发酵制备溶菌酶的方法: 本发明涉及一种利用海洋链霉菌发酵制备溶菌酶的方法。目前溶菌酶主要从蛋清中提取，产量有限。本发明方法首先将海洋链霉菌菌种接种于固体培养基中进行恒温培养，将种子液菌种接种于液体培养基中进行培养，制成种子液；然后将种子液进行放...; 王首锋赵小立; 文献传递

一种富含高度不饱和脂肪酸的开口饵料制备方法: 本发明涉及一种富含高度不饱和脂肪酸的开口饵料制备方法。本发明步骤首先采用PCR扩增获得斑马鱼Δ6-脂肪酸脱饱和酶基因全长cDNA；然后构建表达载体pBI121/DrFAD6，具体是制备大肠杆菌感受态细胞，纯化PCR产物；...; 王首锋; 文献传递

几种化学物质对黄瓜种子萌发、生长及子叶离体成花的影响被引量：2: 2000年; 研究了聚乙二醇 (PEG6 0 0 0 ,30 % )、亚精胺 (SPD ,0 .3mgL- 1)、三碘苯甲酸 (TIBA ,0 .5mgL- 1)和高pH缓冲液 (Na2 CO3 NaHCO30 .1molL- 1,pH =10 .3)浸种处理对黄瓜种子萌发、幼苗生长和子叶离体成花的影响。结果表明 :与对照 (双蒸水 )相比较 ,TIBA和SPD浸种 3h均能显著提高种子活力 ,促进幼苗生长 ;而pH处理则相反 ;SPD和高pH处理会显著提高 6d苗龄子叶中叶绿素a和可溶性蛋白质的含量和离体子叶成花百分率 ,同时抑制叶芽的发生。; 王首锋; 关键词：种子萌发黄瓜

密码子优化的人溶菌酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及抗菌活性分析被引量：1: 2022年; 人溶菌酶(humanlysozyme,hLYZ)是一种天然活性蛋白质,具有抗菌性,目前主要应用于食品添加剂、动物饲料、药物治疗领域。根据毕赤酵母表达偏爱密码子特点,通过优化hlyz基因密码子,人工合成目的基因,构建了分泌表达载体pPIC9K-hlyz。通过电击转化法将pPIC9K-hly质粒重组至毕赤酵母GS115染色体中,经筛选得到重组毕赤酵母GS115-pPIC9K-hlyz。在28℃、pH 6.0、转速240 r·min^(-1)、1%甲醇诱导下表达120 h,发酵液上清酶活达到最高,为(2414.9±108.1)U·mL^(-1),蛋白浓度为166.7μg·mL^(-1)。发酵液上清经过SephadexG50纯化,获得较纯的hLYZ,经SDS-PAGE分析,在近14.7 kDa处显示单一条带。抗菌实验结果表明,重组hLYZ对革兰氏阳性菌的抗菌效果大于革兰氏阴性菌;重组hLYZ的抗菌效果是hLYZ标准品的10~20倍。; 徐艳艳廖志银王珍王首锋; 关键词：人溶菌酶毕赤酵母密码子优化抗菌谱

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王首锋

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