王思明
- 作品数：52 被引量：124H指数：7
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- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程农业科学生物学更多>>
- 不同生长时期人参中水溶性蛋白含量比较被引量：4
- 2016年
- 目的:针对不同生长时期人参中水溶性蛋白的含量进行比较。方法:以5年生人参为供试材料,应用Bradford蛋白质定量试剂盒测定水溶性蛋白含量,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法得到人参水溶性蛋白的电泳胶片,并通过凝胶成像分析软件和Origin 7.5软件生成指纹图谱,导出重要技术参数,分析比较不同生长时期人参中水溶性蛋白的分布及含量差异。结果:不同生长时期的人参样品均显示12条水溶性蛋白谱带,且在人参果后参根生长中期直至枯萎期,水溶性蛋白含量达到最高。结论:人参水溶性蛋白的含量在不同生长时期存在较大差异,与人参生长的形态建成密切相关。
- 刘锡梅于江波张惠王思明刘诗超刘美辰潘智勇
- 关键词：人参不同生长时期水溶性蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳
- 梅花鹿胸腺素β4基因真核表达载体的构建及鉴定
- 2017年
- 为了构建梅花鹿胸腺素β4(Tβ4)基因真核表达载体,使用TRIzol法提取梅花鹿鹿茸总RNA,RT-PCR方法特异性扩增梅花鹿Tβ4基因,目的基因插入真核表达载体VR1012构建表达质粒,将质粒瞬时转染到293T人胚肾细胞系,使用Western blot和免疫荧光方法检测目的基因的表达。结果显示:克隆得到的梅花鹿Tβ4基因长度为135 bp,编码44个氨基酸,成功构建真核表达载体VR1012-Tβ4-HA,转染后梅花鹿Tβ4在293T细胞中表达,而且主要表达在细胞浆中。本试验为进一步研究Tβ4在鹿茸生长中的作用奠定了基础。
- 王佳雯高云鹏王敏王思明赵雨白雪媛
- 关键词：梅花鹿胸腺素Β4质粒构建转染真核表达
- 铁皮石斛水溶性总蛋白对大鼠胃黏膜损伤及炎症反应的保护机制研究被引量：6
- 2020年
- 研究铁皮石斛水溶性总蛋白对阿司匹林诱导大鼠胃黏膜损伤导致炎症的保护作用及相关机制。将Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、给药组。给药组灌胃铁皮石斛水溶性总蛋白(10、20 mg/kg)和奥美拉唑(3 mg/kg),5 d后灌胃阿司匹林300 mg/kg建立胃黏膜损伤模型。5 h后处死大鼠,测定胃黏膜损伤程度,血清中前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量;胃组织中环氧化酶-2 (cyclooxygenase-2,COX-2)、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA以及COX-2、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,Erk1/2)蛋白的表达。结果显示,铁皮石斛水溶性总蛋白能够有效降低阿司匹林造成的胃黏膜出血及糜烂,且能够使血清中PGE2、SOD含量有明显增加(p<0.01),IL-6、IL-1β、TNF-α、MDA含量明显减少(p<0.01),胃组织中COX-2、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达量以及COX-2、pErk1/2与Erk1/2蛋白表达量的比值均有明显下调(p<0.01)。
- 张婉迎白雪媛杨俊杰韩冰张巍王思明
- 关键词：阿司匹林胃黏膜损伤炎症
- 人参Cu/Zn SOD原核可溶性表达条件的优化被引量：4
- 2018年
- 目的在大肠杆菌中高效表达可溶性人参SOD,纯化后检测其活性。方法人参SOD cDNA插入到原核表达载体pET30α中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达。分别对诱导时间、诱导温度、IPTG浓度以及离子浓度进行条件优化。对表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色检测。检测上清中蛋白的抗氧化活性。结果双酶切结果显示质粒构建成功,经过条件优化,表达的SOD蛋白主要存在于破碎菌体的上清中,表达量约占菌体上清总蛋白的50%,上清酶活达到363.9 U/mg。结论成功在大肠杆菌中高效表达了可溶性人参SOD蛋白,且具有较高的酶活性,为其工业化生产和应用奠定了基础。
- 高云鹏赵雨王思明刘美辰王佳雯
- 关键词：人参CU/ZNSOD可溶性表达原核
- 人参叶生长发育过程中几种氧化还原酶活力比较
- 2012年
- 目的:对五年生人参叶生长发育过程中苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase MDH),乳酸脱氢酶(Lactate de-hydrogenase LDH),乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase ADH),葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphate Dehydro-genase G6PDH),α-磷酸甘油脱氢酶(α-Glycerophosphate dehydrogenaseα-GPD)5种氧化还原酶的活力进行比较,了解人参叶生长情况。方法:分别于展叶期、开花期、绿果期、红果期、枯萎期采取人参叶样品。采用中性缓冲液提取粗酶液,应用分光光度法测定MDH、LDH、ADH、G6PDH、α-GPD的活力。结果:在人参叶生长发育过程中,MDH、ADH和LDH活力在展叶期明显高于其他时期;LDH、G6PDH在展叶期和结果期末期活力最高;α-GPD在结果期出现活力峰值。结论:通过测量MDH、LDH、ADH、G6PDH、α-GPD的活力变化可判断人参生长情况。
- 杨菲赵雨王思明刘美辰陈雨
- 关键词：人参氧化还原酶
- 响应面法优化莲子蛋白提取工艺研究被引量：7
- 2017年
- 目的:研究莲子蛋白质水提取的最佳条件。方法:在单因素试验分析的基础上,采用合理的实验设计方案,通过响应面法优化莲子蛋白的提取条件。结果:提取莲子蛋白的最佳工艺参数为提取p H值8.0,料液比1∶15,提取时间7 h,蛋白提取率为14.53%。结论:响应面法优化的莲子蛋白提取条件简便易行,准确性和重现性好,具有实际应用价值。
- 孙天霞尹翌秋张鹏飞王敏张丽轩赵雨王思明
- 关键词：莲子蛋白质响应面法
- 响应面法优化黄精总蛋白提取工艺及其氨基酸含量被引量：6
- 2020年
- 为了优化黄精总蛋白的提取工艺,试验采用碱液提取盐酸沉淀的方法提取黄精总蛋白,考马斯亮蓝法测定黄精蛋白含量。以黄精蛋白提取率为指标,将提取液的料液比、提取时间、提取次数、pH作为单因素来考察,通过单因素试验确定各因素水平。在单因素试验的基础上,利用响应面分析法优化碱提酸沉法提取黄精蛋白的最佳工艺。采用高效液相色谱法测定黄精中氨基酸种类。结果表明,最佳条件为料液比1︰5.6 (g/mL)、提取时间3.5 h、提取次数2次、pH 9.7。在这个最佳条件下进行3次验证性试验,蛋白质提取率的平均值为0.51%,与理论值相比较为接近,表明该数学模型可用于优化黄精蛋白提取工艺。同时采用高效液相色谱法分析黄精中所含的氨基酸种类,证明黄精中有多种对人体有益氨基酸。
- 王远茜陈艳艳宋宸宇白雪媛王思明
- 关键词：响应面法高效液相色谱法
- 一种具有不上火作用的人参提取物及其制备方法和应用
- 本发明公开一种具有不上火作用的人参提取物及其制备方法和应用。该制备方法包括：(1) 对人参进行粉碎处理；(2) 将酿酒酵母接种至粉碎后的人参进行半固体发酵，得到发酵后的人参；(3) 采用梯度升温方式对发酵后的人参进行提取...
- 王思明林海宁潘黛安任吉祥刘诗超于士婷刘美辰赵大庆
- 人参Defensin基因表达载体构建及对锈病抗性分析被引量：2
- 2016年
- 通过人参Defensin基因在拟南芥中的过表达,研究其在人参锈病菌胁迫过程中的抗性作用。采用RT-PCR技术克隆人参Defensin基因,其全长为240 bp,编码80个氨基酸,预测其蛋白分子量为12.091 1 ku。通过农杆菌介导浸花法将人参Defensin基因转到拟南芥中,经过抗性筛选及分子鉴定获得转基因拟南芥。以野生型拟南芥作对照,分析植株对锈病菌的抗性作用。结果表明:经锈病菌胁迫5 d,转基因拟南芥的生长状态明显优于野生型拟南芥,Defensin基因在转基因拟南芥中的表达量极显著高于野生型对照。人参Defensin基因对人参锈病菌具有一定的抗性作用。
- 李宏灵张楠楠王思明孙天霞赵雨张惠
- 关键词：人参锈病菌拟南芥
- 3-酮基嘌呤还原酶(TSC10)基因表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达
- 2018年
- TSC10基因所编码的3-酮基嘌呤还原酶是酵母中神经酰胺合成的重要因子。设计了一种从酵母中提取神经酰胺经济、便捷、高效的方法:(1)利用构建含有TSC10基因的毕赤酵母GS115表达载体p PIC3.5K-TSC10;(2)电转化法将该表达质粒转化到GS115感受态细胞中;(3)用G418筛选以及PCR鉴定;(4)使用qRT-PCR和SDS-PAGE进行检测。结果经过G418筛选以及PCR鉴定后确定获得了包含TSC10基因的毕赤酵母转化子,经过qRT-PCR和SDS-PAGE进行检测后发现TSC10基因在20个阳性菌株中均可以稳定、高效表达。成功构建了3-酮基嘌呤还原酶高表达的毕赤酵母菌株,并为后续获得高收率神经酰胺奠定了基础。
- 郑丽娜刘美辰王思明白雪媛赵雨赵大庆王佳雯
- 关键词：毕赤酵母基因表达
