王建尧 作品数:66 被引量:131 H指数:7 供职机构: 深圳市儿童医院 更多>> 发文基金: 广东省医学科学技术研究基金 广东省自然科学基金 深圳市科技局立项课题 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
门静脉海绵样变性大鼠模型制作方法的探讨及体会 被引量:7 2010年 目的通过门静脉部分缩窄法建立大鼠门静脉海绵样变性(CTPV)动物模型,探索适宜的制模条件并为下一步研究其临床诊断和治疗方法提供可靠、稳定的模型动物。方法采用Sprague-Dawley(SD)大鼠80只,根据使用的不同直径的钝头针均分为4组:假手术组、19G组、21G组和23G组,除假手术组外,其余3组分别用19G、21G和23G直径的钝头针行大鼠门静脉部分缩窄术以建立CTPV动物模型。术后6周,同时采用门静脉测压、门静脉造影、门静脉及其周围组织病理学检查评估门静脉高压及海绵样变形成情况。结果假手术组无大鼠死亡,19G组、21G组和23G组在制模术后48 h内死亡的大鼠分别为2、4和16只。假手术组和19G组大鼠制模术后6周未形成门静脉高压;门静脉造影显示门静脉通畅,无曲张与扩张;病理学检查显示门静脉管腔无增大、内皮细胞光滑、中膜平滑肌层无增厚、外膜完整。21G组和23G组制模术后6周门静脉压力均升高,CTPV形成;门静脉造影显示门静脉周围侧支循环形成;病理检查显示多个管腔大小不一、外形不规则血管腔,管腔之间为较狭窄的纤维性间隔,其内可见脂肪细胞、散在的淋巴细胞及肥大细胞,门静脉管腔增大、血管内膜受损、内皮细胞脱落、中膜平滑肌增厚和血栓形成。结论门静脉部分缩窄法可以复制出类似CTPV的大鼠模型。21G钝头针更适宜CTPV大鼠模型的制作,该模型动物死亡率低,且成模率较高,比较稳定。 王建尧 刘磊 王斌 陈芳 毛建雄 姚君 曹娟关键词:门静脉海绵样变性 SPRAGUE-DAWLEY大鼠 动物模型 NF-κB和VEGF在大鼠门静脉海绵样变性形成过程中的表达及意义 被引量:3 2013年 目的观察大鼠门静脉海绵样变性(CTPV)形成过程中,门静脉及周围组织核转录因子-κB(NF-κB)、血管内皮生长因子(VEGF)以及CD31的表达,并探讨NF-κB和VEGF与门静脉区血管新生的关系,及其在CTPV形成过程中的作用及意义。方法将110只SD大鼠随机(随机数字表法)分为模型组和假手术组。模型组大鼠采用21G口径的钝头针行门静脉部分缩窄术,建立CTPV动物模型;假手术组大鼠仅行门静脉游离探查。取假手术组和模型组大鼠门静脉及周围组织标本,用免疫组化染色方法检测NF-κB、VEGF及CD31的表达,通过Image Pro Plus 6.0软件测定NF-κB表达的光密度(OD)值和VEGF表达的平均积分光密度(IOD)值,并计算微血管密度(MVD)值。结果与术前相比,假手术组大鼠术后第1、2、3、4及6周NF-κB的核浆OD比值、VEGF的平均IOD值以及MVD值的差异均无统计学意义(P>0.05),而模型组大鼠术后各时间点的差异均具有统计学意义,术后各时间点较高(P<0.01)。术前假手术组大鼠NF-κB的核浆OD比值、VEGF的平均IOD值以及MVD值与模型组相比,差异均无统计学意义(P>0.05),而术后各时间点,模型组大鼠的上述3个指标与假手术组比较差异均具有统计学意义,模型组较高(P<0.01)。在模型组大鼠中,NF-κB的表达与VEGF的表达及MVD呈正相关(r=0.654 6,P<0.01;r=0.620 7,P<0.01),VEGF的表达与MVD也呈正相关(r=0.636 9,P<0.01)。结论 NF-κB及VEGF可能与CTPV的形成有关,并可能参与CTPV的血管新生。 毛建雄 刘磊 李苏伊 王斌 王建尧关键词:门静脉海绵样变性 核转录因子-ΚB 血管内皮生长因子 微血管密度 重组人白介素10对低氧条件下人单核细胞凋亡变化规律的影响 被引量:6 2011年 目的研究低氧条件下,重组人白介素10(rhIL-10)对人单核细胞白细胞(THP-1)凋亡和caspase-3活性变化规律的影响。方法悬浮培养THP-1细胞株,分为正常对照组(常规培养);低氧(5%O2,5%CO2,90%N2)培养THP-1,rhIL-10以10、50、100 ng/mL的浓度干预,分为低氧对照组,rhIL-10低、中、高剂量干预组;培养12、24、48、72 h,离心收集细胞,化学比色法检测细胞核内caspase-3活性,48 h核荧光染色荧光显微镜观察,分析荧光强度,行统计学分析。结果凋亡蛋白caspse-3相对活性,12 h各组差异无统计学意义(P>0.05);24 h低氧对照组及低、中剂量rhIL-10干预组与正常对照组比较升高(P<0.05),高剂量rhIL-10干预组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),rhIL-10干预各组与低氧对照组比较降低(P<0.05);48 h低氧对照组和rhIL-10干预低、中、高剂量组与正常对照组比较升高(P<0.05),低、中、高剂量rhIL-10干预组与低氧对照组比较明显降低(P<0.05);72 h低氧对照组、低剂量rhIL-10干预组与正常组比较升高(P<0.05),其余各组差异无统计学意义(P>0.05);缺氧凋亡峰值见于48 h。取48 h行各组凋亡细胞核Hoechst荧光染色,灰度值分析低氧对照组和低、中、高剂量rhIL-10干预组与正常对照组比较升高(P<0.05);低、中、高剂量rhIL-10干预组与低氧对照组比较降低(P<0.05)。结论缺氧可促进单核细胞凋亡,rhIL-10可一定程度地抑制人单核细胞凋亡,这些变化可能与各器官急性缺氧性疾病有密切相关性。 姚君 王立生 王建尧 李迎雪 朱惠明 师瑞月 张茹 莫镜 张利国关键词:低氧 凋亡 人单核细胞 CASPASE-3 B7-1和B7-2基因转染神经母细胞瘤细胞免疫原性的研究 被引量:1 2012年 目的比较免疫共刺激信号B7-1和B7-2以腺病毒为载体转染神经母细胞瘤(NB)SH-SY5Y细胞株,观察其对肿瘤细胞免疫原性的影响。方法以携带绿色荧光蛋白的腺病毒质粒(Ad-GFP)转染SH—SYSY细胞,通过流式细胞仪(FCM)判断转染效率,确定合适的感染倍数(MOI)。分别以空病毒质粒(Ad)及携带B7-1或B7-2的腺病毒质粒转染SH-SYSY细胞,即对照组和B7-1或B7-2组;并以未转染的肿瘤细胞为空白对照(空白组)。采用流式细胞仪(FCM)检测B7-1分子和B7-2蛋白表达,Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞,分别以效靶比5∶1和10∶1进行混合淋巴细胞培养后,测定放射性核素闪烁计数(cpm)/min,同时检测上清液中细胞因子IFN-γ及IL-2的分泌水平。结果腺病毒对SH-SY5Y细胞有较高的转染效率,转染后目的基因B7-1和B7-2得到了有效表达。B7-1组、B7-2组cpm值及上清液IFN-γ、IL-2水平明显高于Ad组、SH组(P<0.01);B7-1组与B7-2组比较,cpm值及细胞因子水平增高无明显差别(P>0.05)。效靶比5∶1时,与10∶1相比,cpm值及IFN-γ、IL-2含量的增加更明显(P<0.05)。结论 B7-1和B7-2分子可促进T淋巴细胞的增殖及活化T细胞分泌IFN-γ、IL-2,而B7-1与B7-2两组间cpm值及细胞因子水平无明显差别。 王斌 陈芳 毛健雄 王建尧关键词:神经母细胞瘤 共刺激分子B7-1 肝门静脉海绵样变性模型大鼠组织抑制因子及基质金属蛋白酶表达与周围血管新生 被引量:1 2015年 背景:目前国内外尚无有效治疗肝门静脉海绵样变性的策略,且其病因的基础研究报道较为鲜见。目的:拟建立大鼠门静脉海绵样变性模型,检测基质金属蛋白酶2,9,基质金属蛋白酶组织抑制剂1,2在大鼠门静脉及其周围组织的表达及周围血管新生中的作用。方法:SD大鼠80只随机分为3组。以门静脉部分缩窄法复制门静脉海绵样变性的大鼠模型,以21 G钝针头操作。模型组和假手术组分别设术后2,4,6周3个时间点,对照组即不做任何处理的正常SD大鼠(造影后取材)。各组分别于处理后不同时间点行门静脉造影,免疫组织化学检测血管内皮细胞标记物CD31观察门静脉周围血管变化,并使用实时荧光定量PCR和免疫组织化学法检测大鼠门静脉及其周围组织的基质金属蛋白酶2,9,基质金属蛋白酶组织抑制剂1,2 mR NA的含量和蛋白的表达。结果与结论:门静脉造影及血管内皮细胞标记物CD31免疫组织化学显示,模型组门静脉周围新生血管明显增多。RT-PCR与免疫组织化学结果分析显示:对照组和假手术组基质金属蛋白酶2 mR NA及蛋白表达均较同期模型组低(P<0.01,P<0.05),基质金属蛋白酶9 mR NA及蛋白表达均较同期模型组低。模型组基质金属蛋白酶组织抑制剂1,2各个时间段的表达水平与对照组和假手术组相比差异无显著性意义(P>0.05);模型组造模后第2周基质金属蛋白酶2/基质金属蛋白酶组织抑制剂2比值明显高于对照组和假手术组同期(P<0.05)。结果提示,构建的门静脉海绵样变性的模型大鼠死亡率低,成模率高,且比较稳定。基质金属蛋白酶2,9表达升高以及基质金属蛋白酶2/基质金属蛋白酶组织抑制剂2的比值失衡,可能是大鼠门静脉海绵样变周围血管新生的分子机制之一。 赵璐 刘磊 毛建雄 王建尧 徐金永 叶晓烁关键词:实验动物 基质金属蛋白酶 血管新生 腹腔镜治疗小儿复杂性阑尾炎的临床治疗研究 被引量:6 2016年 目的:探究腹腔镜治疗小儿复杂性阑尾炎的临床疗效。方法:择取我院2012年12月至2015年12月收治的复杂性阑尾炎患儿100例设置为常规组,另选取同时间内收治的100例非复杂性阑尾炎患儿设置为实验组,比较两组患儿的手术治疗效果。结果:实验组患儿的手术时间与脓液量明显短于及少于常规组,比较数据差异显著(P<0.05);另外,比较两组患儿的排气时间、下床时间、住院时间、中转开腹率、切口感染与肠梗阻发生率等参数无明显差异(P>0.05)。结论:复杂性与非复杂性阑尾炎的病理本质具有一定的区别,给予腹腔镜手术治疗均可获得较为良好的手术治疗效果,手术方法安全有效,值得推荐并采纳。 叶晓烁 吴宙光 王建尧关键词:复杂性阑尾炎 患儿 腹腔镜 一种可计量负压收集大便的装置 一种可计量负压收集大便的装置,涉及患者大便收集装置领域,它包括用于贴合人体臀部的便袋(1)、引流管(2)、负压盒(3)和负压发生器(4),用于贴合人体臀部的便袋(1)的袋口设有臀部贴合圈(1-1),臀部贴合圈(1-1)的... 姚君 王建尧 徐正磊文献传递 婴儿年龄对胆道闭锁腹腔镜手术的影响分析 2015年 目的:探讨胆道闭锁患儿年龄对腹腔镜Kasai手术的影响。方法:回顾性分析2010年1月-2015年1月深圳市儿童医院经腹腔镜Kasai手术治疗的胆道闭锁患儿共72例。根据患儿手术时日龄将其分为两组,其中患儿手术日龄≤45 d为研究组25例,手术日龄>45 d为对照组47例,比较两组的手术时间、术中出血量、手术气腹压、中转开放率、术后转入PICU病房率等。结果:研究组平均手术时间及术中出血量比对照组多,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);两组平均手术气腹压比较差异无统计学意义(P<0.05);两组术后转入PICU病房率比较,研究组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);但在中转开放率比较上,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:对于年龄较小的胆道闭锁患儿,腹腔镜Kasai术手术难度及手术风险更大,术中需更加谨慎。 吴宙光 王建尧 王斌 陈子民 冯奇 叶晓烁关键词:胆道闭锁 腹腔镜 门静脉部分缩窄制作SD大鼠门静脉海绵样变性动物模型 被引量:2 2012年 目的采用门静脉部分缩窄法建立SD大鼠门静脉海绵样变性(CTPV)的动物模型,观察成模过程中门静脉压力、门静脉及周围组织的结构变化,为临床及基础研究提供可靠、稳定的模型动物。方法将SD大鼠100只,随机分为2组:假手术组和模型组,每组各50只。模型组用21G口径的钝头针对大鼠门静脉部分缩窄术;假手术组仅对门静脉进行游离探查,不进行缩窄。各组分别在术后1、2、3、4、6w随机取出10只,行门静脉测压、门静脉造影、病理学等观察门静脉及其周围组织侧支循环的形成情况。结果假手术组大鼠术后各时间段均未形成门脉高压,门静脉造影未见有侧支循环形成。模型组术后1w即形成门静脉高压,门静脉造影显示术后第3w,肝门区可见向肝性侧支循环,术后6w,门静脉区形成典型的海绵样变性。结论用21G钝针头行门静脉部分缩窄,可以复制出类似CTPV的大鼠模型。术后3w门静脉压力达到高峰,以后稍有下降并逐渐趋于稳定,在术后3w门静脉已出现向肝性侧支循环,到6w时形成典型的门静脉海绵样变性改变。 毛建雄 刘磊 王斌 王建尧关键词:门静脉海绵样变性 SPRAGUE-DAWLEY大鼠 动物模型 一种带有固定装置的戳卡 一种带有固定装置的戳卡,涉及手术器械技术领域,包括戳卡本体(1),它还有戳卡固定装置,戳卡固定装置包括包裹层(2)和固定搭扣装置(3),包裹层(2)上设有一组连接孔(2-1),固定搭扣装置(3)的扣座固定安装在包裹层(2... 王建尧 姚君 刘磊文献传递