目的：建立SYBR Green I荧光定量PCR的方法,用于定量检测铜绿假单胞菌MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM、MexGHI-OpmD 5种外排泵基因转录水平的表达。方法：采用分子克隆技术,构建克隆载体pMD18-T-mexB、pMD18-T-mexD、pMD18-T-mexF、pMD18-H-mexF、pMD18-T-mexY及pMD18-T-rpsL作为定量模板,梯度稀释后进行SYBR Green I荧光定量PCR,绘制定量标准曲线,建立检测铜绿假单胞菌5种外排泵基因mRNA的SYBR Green I荧光定量RT-PCR的方法,并采用上述方法检测30株铜绿假单胞菌的5种外排泵表达情况。结果：rpsL、mexB、mexD、mexF、mexH、mexY标准曲线的线性范围分别为：104～109拷贝/μl,102～109拷贝/μl,105～109拷贝/μl,105～108拷贝/μl,104～107拷贝/μl,103～109拷贝/μl;斜率分别为：-3.008、-3.206、-3.126、-3.177、-3.024、-3.213;相关系数分别为0.99998、0．99954、0．99912、0．98845、0．98356、0．99962。30株多重耐药Pa中，16株高表达MexAB—OprM（53．33％），7株高表达MexCD—OprJ（23．33％），8株高表达MexEF—OprN（26．67％），2株高表达MexGHI—OpmD（6．67％），3株高表达MexXY—OprM（10％）。结论：建立的FQ—RT-PCR方法简便、快速，特异性强，可信度高，可用于铜绿假单胞菌外排泵表达的快速定量检测。
目的观察D-氨基半乳糖加脂多糖诱导的急性肝衰竭大鼠脑组织中水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP4)表达情况,探讨其在急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)继发性脑水肿中的作用。方法应用D-氨基半乳糖加脂多糖建立大鼠急性肝衰竭模型,腹主动脉采血检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血氨(NH3)水平,RT-PCR和免疫组织化学技术分别检测脑组织内AQP4mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常对照组比较,ALF组大鼠血清ALT、AST、NH3水平明显升高(P<0.01),AQP4mRNA和AQP4蛋白也显著升高[(1.15±0.25 vs 0.53±0.24)和(1.62±0.12 vs 1.41±0.11),均P<0.01]。结论急性肝衰竭时AQP4表达上调,AQP4在急性肝衰竭时脑水肿的形成过程中起重要作用。
