樊宇
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- hsa-microRNA-218对颗粒溶素表达影响的探讨
- 2014年
- 目的:探讨hsa-microRNA-218(hsa-mir-218)对颗粒溶素(Granulysin,GLS)表达的影响。方法:抽提佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetatefor,PMA)激活的THP-1细胞的总RNA,逆转录后PCR扩增GLS基因,将其克隆至pDsRed-Express-C1,构建GLS表达质粒pDsRed-GLS。将pDsRed-GLS与pGenesil-mir-218(pGenesil-mir-control)共转染293T细胞,36 h后激光共聚焦显微镜观察两种质粒在细胞中的表达情况,48 h后提取细胞总RNA和蛋白,RT-PCR和Western blot检测hsa-mir-218对GLS表达的影响。结果:酶切和测序结果证实重组质粒pDsRed-GLS构建成功,且能与microRNA干扰质粒在293T细胞中共表达。与转染pGenesil-mir-control组细胞相比,Western blot结果显示转染pGenesil-mir-218组细胞GLS蛋白表达下降约50%,而GLS mRNA表达无明显变化。结论:hsa-mir-218在转录后水平干扰了GLS的表达,为进一步探讨mir-218干扰GLS表达的机制打下基础。
- 樊宇杨春张璐渝杨静何永林徐蕾冯鑫张春燕穆柳青
- 关键词：颗粒溶素T细胞RNA干扰激光共聚焦
- 结核分枝杆菌ClpC2蛋白的纯化、抗血清的制备及抗原性分析
- 2014年
- 目的:分别探索结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)ClpC2蛋白和兔抗ClpC2多克隆抗体作为肺结核检测抗原或抗体的可行性。方法:诱导表达重组蛋白ClpC2(rClpC2);SDS-PAGE与Western blot鉴定rClpC2后利用亲和层析法进行纯化;纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔,Western blot检测兔抗血清的特异性;双向免疫扩散法与酶联免疫吸附法(ELISA)测定兔抗血清效价;rClpC2通过间接ELISA进行抗原性的初步检测,兔抗ClpC2多克隆抗体通过间接ELISA检测肺结核病人血清中ClpC2抗原。结果:rClpC2经SDS-PAGE分析,在相对分子质量46 kD处可见特异性条带;Western blot分析rClpC2可与MTB H37Rv株感染的小鼠血清发生抗原抗体反应;经Bandscan分析rClpC2约占菌体总蛋白的58.7%,纯化后rClpC2的纯度为88.5%;Western blot验证兔抗血清可与卡介苗(Bacillus calmette-guerin,BCG)的ClpC2蛋白发生抗原抗体反应;双向免疫扩散法测定兔抗血清效价为1∶32,ELISA法测定兔抗血清效价为1∶320 000;rClpC2在检测肺结核病人中的检出率为46%,检测敏感性为46%,特异性为90%;兔抗ClpC2多克隆抗体在检测肺结核病人中的检出率为40%,检测的敏感性为40%,特异性为90%。结论:成功纯化结核分枝杆菌ClpC2蛋白,制备特异性兔抗ClpC2多克隆抗体,为进一步研究ClpC2蛋白的生物功能、ClpC2作为诊断靶标、药靶候选蛋白的可行性及兔抗ClpC2多克隆抗体生物学功能提供实验基础。
- 穆柳青李岱容张春燕樊宇何永林杨春
- 关键词：结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌ClpP1重组蛋白的特性探讨及初步应用被引量：1
- 2014年
- 目的用纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)ClpP1重组蛋白免疫新西兰白兔制备ClpP1多克隆抗体并检测其效价,间接ELISA法分析重组蛋白的抗原性,以初步评价其应用价值。方法通过SDS-PAGE确定ClpP1重组蛋白的主要表达形式,利用纯化包涵体方式对重组蛋白进行纯化;将纯化蛋白免疫新西兰白兔制备ClpP1多克隆抗体并检测其效价;再分别以纯化蛋白为抗原,制备抗体为一抗,间接ELISA法检测临床诊断结核病患者血清中抗M.tb抗体和M.tb抗原。结果 SDSPAGE显示ClpP1重组蛋白主要以包涵体表达形式存在,将纯化蛋白免疫新西兰白兔4次,取血测抗体效价为1∶64 000;Western blot结果显示制备抗体可较好的与ClpP1蛋白特异性结合;间接ELISA法结果表明,以重组蛋白为抗原测患者血清中抗M.tb抗体和以制备抗体为一抗测血清中的M.tb抗原的2实验组分别与对照组相比均具有显著性差异。结论制备了具有免疫原性的M.tb ClpP1重组蛋白及效价较高的多克隆抗体,并得出ClpP1多克隆抗体具有较好的免疫反应性,为进一步研究ClpP1重组蛋白的特性及其应用奠定了基础。
- 张春燕杨春李岱容穆柳青樊宇何永林
- 关键词：结核分枝杆菌多克隆抗体
- Hsa-microRNA-218与颗粒溶素表达关系的探讨
- 目的： 将颗粒溶素（Granulysin,GLS）表达质粒与microRNA（miRNA）干扰质粒共转染入293T细胞中，在细胞层面上观察hsa-microRNA-218(miR-218)对GLS蛋白表达的干扰效果;应...
- 樊宇
- 关键词：结核分枝杆菌MIR-218流式细胞术
- 结核分枝杆菌Zmp1基因原核表达载体的构建及表达鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的构建结核分枝杆菌锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增Zmp1基因;定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-Zmp1;转化入大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot法鉴定。结果PCR法扩增出Zmp1基因;重组表达质粒经双酶切及基因测序鉴定构建正确;表达的重组Zmp1融合蛋白相对分子质量(Mr)约为94 000,大小与预期融合蛋白一致;重组Zmp1融合蛋白可与His标签单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了Zmp1基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得重组Zmp1融合蛋白表达。
- 张继明杨春何永林穆柳青张春燕樊宇徐蕾
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达
- 锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)抑制小鼠RAW264.7细胞增殖以及吞噬体-溶酶体的融合被引量：3
- 2016年
- 目的观察卡介苗（BCG）的锌离子依赖金属蛋白酶1（Zmp1）对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21（DE3）中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测（0、24、48、72、96）h的细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期分布;用减毒沙门菌感染RAW264.7细胞诱导吞噬体形成后,用Zmp1处理细胞,在吞噬体内的减毒沙门菌和溶酶体的溶酶体相关膜蛋白1（LAMP1）分别用相应Alexa Fluor（R）350抗沙门菌抗体（蓝色荧光）和Cy5抗LAMP1抗体（红色荧光）标记,通过荧光显微镜观察RAW264.7细胞内两种荧光,将其重合分析吞噬体与溶酶体融合情况。结果用Zmp1蛋白处理细胞48 h后,细胞增殖活性明显降低;处理48 h后,细胞周期中G1期细胞比例下降,S期比例增高;采用双荧光标记感染沙门菌的RAW264.7细胞,Zmp1处理后显示紫色荧光的吞噬溶酶体融合减少。结论 Zmp1抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞增殖,抑制吞噬体-溶酶体融合。
- 方陈城张继明卢楠李鹏樊宇康月茜杨春何永林
- 关键词：细胞增殖溶酶体
- microRNA与结核病相互关系的研究进展被引量：2
- 2015年
- microRNA(miRNA)是一类广泛存在于各种生物体内的小分子非编码单链RNA,主要在转录后水平调控靶基因的表达。越来越多的证据表明它在细胞分化与沟通、机体发育、免疫反应等诸多方面都发挥着重要作用。尤其在疾病相关研究中,miRNA更是具有广泛的用途和美好的前景。本文主要针对miRNA的相关特性、与结核病(tuberculosis,TB)相互关系的研究进展以及应用前景等做综述。
- 樊宇杨春何永林徐蕾卢楠穆柳青张春燕康月茜
- 关键词：MICRORNA结核病结核分枝杆菌BACILLUS
