杜昕
- 作品数：10 被引量：48H指数：5
- 供职机构：复旦大学附属华山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市浦江人才计划项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新的细胞壁锚定蛋白SasX促进金黄色葡萄球菌黏附聚集和定植能力被引量：4
- 2012年
- 目的研究新的细胞壁锚定蛋白SasX对金黄色葡萄球菌黏附聚集和定植能力的影响。方法采用基因敲除及基因互补技术获得耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）ST-239HS770sasX基因突变株及基因互补株。显微镜下直接观察sasX基因突变前后细菌自身的黏附聚集能力。通过黏附实验检测sasX基因突变前后对金黄色葡萄球菌黏附至人体鼻腔上皮细胞能力，并通过阻断实验检测表达纯化的SasX蛋白对金黄色葡萄球菌黏附至人体鼻腔上皮细胞的阻断能力，分析SasX蛋白对金黄色葡萄球菌定植能力的影响。结果与野生株相比，突变株HS770asasX自身的聚集能力明显减弱，而互补表达株HS770asasX（pRBsasX）的自身聚集能力与野生株无明显差异。与野生株相比，突变株HS770AsasX黏附至人体鼻腔上皮细胞能力明显减弱（P〈0．01），互补表达株HS770 asasX（pRBsasX）黏附能力明显增强（P〈0．01）。表达纯化的GST融合蛋白SasX和人体鼻腔上皮细胞预培养对于野生株HS770黏附至人体鼻腔上皮细胞的能力具有明显的抑制作用。结论新的细胞壁锚定蛋白SasX影响金黄色葡萄球菌黏附聚集和定植能力，金黄色葡萄球菌通过获得sasX基因更加容易定植到宿主易感部位，进而引发感染。
- 陈健杜昕宋燕阮斐怡吕元李敏
- 关键词：金黄色葡萄球菌定植
- 建立高分辨率熔解曲线法筛选含VEB-3型基因菌株被引量：1
- 2010年
- 目的 建立高分辨率熔解曲线法筛选含VEB-3型基因菌株.方法 不重复收集2003年1-12月革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）菌株292株,用酚-氯仿法抽提基因组DNA;首先以基因组DNA为模板,PCR扩增VEB基因;挑选阳性菌株34株再PCR扩增包含168位点的一段约110 bp的基因片段,高分辨率熔解曲线（high resolution melt,HRM）分析后测序验证.结果 VEB-3亚型与其他亚型基因通过HRM分析具有显著的差别;测序结果与HRM分型结果一致.结论 应用HRM技术可以准确快速筛选含VEB-3型基因菌株.
- 李刚魏取好倪瑛乔王艳艳杜昕蒋晓飞
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶
- 金黄色葡萄球菌对替考拉宁药敏试验分析
- 艾芙琪杜昕王艳艳阮斐怡韩立中蒋晓飞
- 泛耐药肺炎克雷伯菌株的医院内流行特性的研究被引量：14
- 2011年
- 目的 了解华山医院泛耐药肺炎克雷伯菌株及其流行的特点.方法 收集2006年8月-2009年12月对CLSI推荐常规检测药物均耐药的肺炎克雷们菌临床分离株,共57株.所有菌株都进行药物敏感试验、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）初筛及表型确证试验、改良Hodge试验、等电聚焦电泳,聚合酶链反应及其产物测序、接合试验、肠杆菌基因间重复共有序列PCR（ERIC-PCR）和多位点序列分型（MLST）.结果 所有菌株都携带blaKPC-2、blaCTX-M-14、blaSHV12和blaTEM-1及qnrB和aac（6＇）-I b-cr基因.57株细菌中ST423型5株,MIST ST11型52株.ST423型散发,而ST11型呈医院内流行.57株细菌都对替加环素耐药,对多黏菌素、米诺环素和多西环素部分敏感.结论 本次泛耐药肺炎克雷们流行主要为ST11型菌株;不同的肺炎克雷伯菌株,播散能力不同;检出泛耐药肺炎克雷伯菌时应增加检测药物的种类.
- 王艳艳刘红杜昕李刚魏取好陈晓耘蒋晓飞
- 关键词：泛耐药肺炎克雷伯菌多位点序列分型PCR
- 白念珠菌唑类耐药和生物膜相关基因的表达被引量：6
- 2014年
- 目的研究白念珠菌临床分离株唑类耐药和生物膜形成相关基因的表达。方法收集上海市公共卫生临床中心2006至2011年92例感染性疾病患者[病毒性肝炎、结核、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)]血液、无菌部位和黏膜分离鉴定的白念珠菌104株,选用ATB FUNGUS3检测抗菌药物(氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑)的最低抑菌浓度(MIC),采用半定量逆转录聚合酶链反应(PCR)分析唑类敏感、浓度依赖性敏感(S-DD)和耐药菌株之间药物外排泵基因CDR1、CDR2、MDR1和药物靶酶基因ERG11表达的差异,同时通过甲基四氮盐(XTT)代谢试验筛选强生物膜形成能力菌株(HBFs),研究其与弱生物膜形成能力菌株(LBFs)相关基因ALS3和HWP1表达的差异。结果 104株白念珠菌中共检测出16株至少对1种唑类药物耐药,6株至少对1种唑类药物S-DD。药物靶酶基因ERG11在耐药株、S-DD株和敏感菌之间比较,差异有统计学意义(P=0.007 8),且耐药株、S-DD株分别与敏感菌比较,差异有统计学意义(P<0.05),然而CDR1、CDR2和MDR1表达量在3种菌株间无明显差异。生物膜形成能力试验显示16株菌生物膜形成能力增强,其HWP1表达量与LBFs比较差异有统计学意义(P=0.007 9),ALS3表达量差异无统计学意义。结论 ERG11基因的过度表达为白念珠菌唑类耐药的重要机制。菌丝细胞壁蛋白HWP1基因的高表达与白念珠菌生物膜形成增强相关。
- 胡绿荫宰淑蓓金鑫蔡金凤曹宇硕胡香南杜昕李天铭李敏
- 关键词：外排泵ERG11生物膜白念珠菌
- 新的细胞壁锚定蛋白编码基因sasX在金黄色葡萄球菌中的分布被引量：11
- 2011年
- 目的 研究细胞壁锚定蛋白编码基因sasX在金黄色葡萄球菌中的分布及对细菌耐药性的影响.方法 随机收集上海华山医院2004、2007和2010年从金黄色葡萄球菌感染的住院患者标本中分离鉴定的金黄色葡萄球菌共300株,收集同时期社区健康人群的鼻咽拭子分离鼻腔内定植的金黄色葡萄球菌170株.按照国际通用的MLST以及葡萄球菌A蛋白序列分析（spa typing）方法进行克隆株的鉴定分析.通过苯唑西林MIC值测定方法对MRSA进行检测.采用PCR结合测序方法对金黄色葡萄球菌携带sasX基因情况进行分析,采用纸片琼脂扩散法药敏试验分析临床sasX阳性和sasX阴性金黄色葡萄球菌对抗菌药物的耐药性.结果 300株从金黄色葡萄球菌感染的住院患者标本中分离到的致病性金黄色葡萄球菌克隆分型以ST239（110株,36.7％）和ST5（122株,40.7％）为主.2004至2010年,sasX基因在致病性的金黄色葡萄球菌中的阳性率从17％上升至39％,sasX基因在健康人鼻腔内分离的金黄色葡萄球菌中阳性率平均为0.59％.ST239中sasX的阳性率从47.2％上升至83.8％.携带sasX基因的MRSA百分率从26.4％上升至50.8％,携带sasX基因的MSSA的比率只约占10％.sasX基因阳性组对部分目前临床常用的抗菌药物的耐药性高于sasX基因阴性组.结论 sasX基因主要存在于医院环境内致病性的金黄色葡萄球菌中,SasX可能是金黄色葡萄球菌在医院环境内持续感染毒力因子之一,sasX基因的存在与细菌的耐药有关.
- 杜昕宋燕田月如阮斐怡吕元李敏
- 关键词：细菌蛋白质类
- 新的细胞壁锚定蛋白SasX对金黄葡萄球菌生物膜形成和毒力的影响被引量：6
- 2011年
- 目的 研究新的细胞壁锚定蛋白SasX对金黄葡萄球菌生物膜形成及毒力的影响.方法 采用基因敲除及基因互补技术获得耐甲氧西林金黄葡萄球菌（MRSA） ST-239 HS770 sasX基因突变株及基因互补株,应用半定量生物膜形成试验检测sasX基因突变前后对金黄葡萄球菌生物膜形成的影响,使用小鼠皮肤脓肿形成模型研究SasX对金黄葡萄球菌毒力的影响.结果 采用pKOR1质粒构建重组质粒并成功获得sasX基因敲除株.与野生株相比,突变株HS770△sasX生物膜形成能力明显减弱（P＜0.05）,互补表达株HS770△sasX（pRBsasX）生物膜形成能力无明显统计学差异（P＞0.05）.与野生株相比,突变株HS770△sasX初始黏附能力明显减弱（P＜0.05）,互补表达株HS770△sasX（pRBsasX）初始黏附能力无明显统计学差异（P＞0.05）.HS770和HS770△sasX接种小鼠后均形成明显的脓肿,PBS对照组小鼠皮肤表面未见脓肿产生.细菌接种后第2天小鼠皮肤脓肿面积达到最大,随着接种时间的延长小鼠皮肤脓肿面积逐渐缩小.但是从接种后第1天开始,HS770接种组小鼠皮肤脓肿形成面积在同一时间点上明显大于HS770△sasX接种组（P＜0.05）.结论 采用pKOR1质粒进行基因敲除可以明显提高目的基因的敲除效率.SasX可以通过影响细菌的初始黏附从而影响生物膜的形成,SasX是金黄葡萄球菌在医院环境内持续感染重要的毒力因子.
- 杜昕宋燕胡锦辉阮斐怡吕元李敏
- 关键词：金黄葡萄球菌生物膜毒力因子
- 高分辨率熔解曲线法检测临床常见KPC基因亚型被引量：3
- 2011年
- KPC是一种近年新出现的碳青霉烯酶,可以水解包括碳青霉烯类抗菌药物在内的所有β内酰胺类抗菌药物,且仅轻微或不被克拉维酸抑制,给临床治疗带来极大困难[1].目前已经公开报道的亚型有KPC-2至KPC-11,但临床中流行的主要是产KPC-2或KPC-3的肺炎克雷伯菌[2],
- 李刚赵燕魏取好王艳艳杜昕蒋晓飞
- 关键词：基因亚型熔解曲线法肺炎克雷伯菌抗菌药物碳青霉烯酶
- 新的细胞壁锚定蛋白SasX促进金黄色葡萄球菌粘附聚集和定植能力
- 目的医院环境中广泛流行的MRSA克隆株ST239含有编码新的细胞壁锚定蛋白的基因sasX是我们课题组新近发现并命名的。我们早期研究结果提示sasX可能是金黄色葡萄球菌在医院环境内持续感染的毒力因子之一,本
- 杜昕宋燕阮斐怡吕元李敏
- 六年间血流感染的金黄色葡萄球菌的分子特征分析被引量：8
- 2011年
- 目的分析上海三级甲等医院2004--2010年血流感染的金黄色葡萄球菌克隆分型特点以及随时间的变化趋势，检测不同克隆株耐药和毒力基因携带情况。方法收集上海华山医院2004--2010年从不同患者血液样本中分离鉴定的金黄色葡萄球菌103株，通过苯唑西林MIC测定和SCCmec基因分型等方法对MRSA进行检测；按照国际通用的多位点保守基因测序（MLST）以及葡萄球菌A蛋白序列分析（spatyping）方法进行克隆株的鉴定分析，采用PCR方法对103株细菌的耐药以及毒力基因携带情况进行分析。结果103株金黄色葡萄球菌共检出MRSA66株（64．1％），其中SCCmecⅡ型35株，SCCmecDI型29株，SCCmecIV型2株，MSSA37株（35．9％）。66株MRSA的克隆分型以ST5（33株）和ST239（29株）为主，另外还包括2株ST59，1株ST641，1株ST6；其他克隆型均为MSSA。从2009年开始ST5和ST239克隆株在血流感染中的分离率明显下降（ST5从52．9％降至15．4％；ST239从61．1％降至15．4％），而其他类型以及新出现的MSSA克隆株分离率明显增加（如2009年S17分离率为41．7％；2010年新出现ST188及ST15等）。2010年血流感染的MSSA为84．6％。103株金黄色葡萄球菌mupA耐药基因阳性19株（18．4％），qacA／B耐药基因阳性41株（39．8％），70．6％的ST239杀菌剂耐药基因qacA／B阳性。在这103株血流感染的金黄色葡萄球菌中发现5株动物来源的克隆株，分别为4株ST398以及1株ST9。22个毒力基因除了sasX、lukSF以及arcA外，同一克隆株无论MRSA还是MSSA其毒力基因携带情况无明显差异，但是不同克隆株携带毒力基因有明显的差异。结论以ST5和ST239为主的MRSA在血流感染中的分离率明显下降，新的MSSA克隆株分离率明显增加，不同的克隆株耐药以及毒力基因的携带情况存在明显差别。
- 宋燕杜昕田月如阮斐怡吕元李敏
- 关键词：葡萄球菌感染菌血症
