李巧玲
- 作品数：8 被引量：26H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家重点实验室开放基金黑龙江省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 马立克氏病病毒囊膜糖蛋白Ⅰ的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2013年
- 提取感染MDV 814A3毒株的鸡胚成纤维细胞(CEF)总基因组,利用PCR技术扩增获得gI基因。将鉴定正确的gI基因克隆至pET-32a(+),构建原核表达载体pET-gI。将诱导表达获得的gI重组蛋白免疫新西兰大白兔,产生的抗血清能够与MDV814A3病毒发生特异性反应。本试验所制备的gI重组蛋白和多克隆抗体将在MDV检测、血清学诊断等方面具有重要应用价值。
- 李巧玲崔红玉牛军伟王云峰
- 关键词：马立克氏病GI基因原核表达多克隆抗体
- 禽传染性喉气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备被引量：2
- 2012年
- 为制备抗鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gD的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达gD重组蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,经细胞融合筛选获得一株稳定分泌抗ILTV gD蛋白的杂交瘤细胞株,MAb亚型经鉴定为IgG1,轻链为κ链。Western blot结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的MAb能够识别ILTV。ILTV gD蛋白的MAb的制备,为ILTV检测方法的建立奠定了基础。
- 胡顺磊赵妍崔红玉石星明王玫张晶薛美张晓敏闫帅孔聪聪李巧玲牛秀杰王云峰
- 关键词：传染性喉气管炎病毒原核表达单克隆抗体
- 马立克氏病病毒gE蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2013年
- 为了获得分泌抗鸡马立克氏病病毒(MDV)gE囊膜糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,将pGEX-6P-1表达的重组蛋白gE作为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术,共筛选获得4株能够稳定分泌抗MDV gE蛋白抗体的杂交瘤细胞株。抗体亚型鉴定结果表明,4株均为IgG1型,轻链为κ链。间接免疫荧光结果显示,4株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能特异性识别MDV,并具有一定的中和活性。本研究对MDV诊断、抗原表位分析及鉴定等具有重要的应用价值。
- 李巧玲崔红玉牛军伟闫帅高明杨红亚赵妍王云峰
- 关键词：马立克氏病病毒原核表达单克隆抗体
- 表达鸡新城疫病毒F蛋白的重组马立克氏病毒的构建及其鉴定被引量：3
- 2012年
- 为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的重组马立克氏病毒(MDV),本研究采用RT-PCR方法从NDV强毒株F48E9基因组中扩增出病毒的融合蛋白F基因,构建由CMV启动子和BGH polyA组成的2.7 kb F基因表达盒。将其插入带有黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(gpt)和MDV US2同源臂的中间转移载体pUAB-gpt中获得重组MDV转移载体pUAB-gpt-wF。将该转移载体与MDV-814疫苗株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA共转染CEF,经同源重组及gpt选择系统筛选,获得带有F基因表达盒的重组MDV(rMDV814-wF)。其体外增殖与亲本病毒没有差异。经间接免疫荧光试验、PCR、Southern-blot及western blot等试验证明,重组病毒在CEF中传至13代以上仍稳定表达NDV的F蛋白。该重组病毒的构建为MDV活载体疫苗的筛选及应用奠定了基础。
- 闫帅崔红玉李巧玲赵妍石星明赵晓岩胡顺磊王玫高明李越王云峰
- 关键词：马立克氏病毒重组病毒F基因
- 鸡传染性喉气管炎病毒TaqMan real-time PCR检测方法的建立被引量：4
- 2012年
- 为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TaqMan Real-time PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的ILTV gB基因序列设计了2对引物与一条特异性TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件的优化,特异性、敏感性以及重复性试验,证明该方法在核酸含量108拷贝/μL～101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;能够检测初始模板中10-3EID50的病毒核酸及16拷贝的标准品;与其它相关的鸡源病毒均无交叉反应,并且批内、批间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。该检测方法的建立为ILTV的临床检测和定量分析提供了一种快速、准确的技术手段。
- 赵妍孔聪聪张晓敏崔红玉石星明赵晓岩薛美胡顺磊闫帅牛秀杰李巧玲王玫王云峰
- 关键词：鸡传染性喉气管炎病毒GB基因TAQMANREAL-TIMEPCR
- 黑龙江散养鸡中一株乳酸菌的分离鉴定及益生特性和抗病毒特性研究被引量：6
- 2013年
- 为筛选具有优良益生及抗菌及抗病毒特性的禽源乳酸菌,本研究在黑龙江散养鸡新鲜粪便中分离出一株乳酸菌,经过菌落形态观察、革兰氏染色和菌体形态观察、API碳水化合物发酵试验鉴定以及16S rDNA序列的Mega Blast和LinnaeusBlast分析,鉴定为约氏乳杆菌,命名为LactobacillusjohnsoniiY 2。通过耐酸试验、抗胆盐试验、大剂量(8×109cfu)饲喂试验、体外抑菌试验和抗病毒(新城疫病毒La Sota株)试验表明,L.johnsoniiY 2可耐受pH 3.0的酸度和0.5%的高胆盐环境;大剂量饲喂无毒无害且具有增加采食量和增重的效果;具有较明显的抗菌和抗病毒作用。L.johnsoniiY 2显示出优良的益生特性,可作为益生菌候选菌株。
- 杨红亚崔红玉闫帅赵妍李巧玲王云峰何高明
- 关键词：乳酸菌益生特性
- 一株鸡传染性喉气管炎病毒的分离鉴定及TK基因分析被引量：8
- 2012年
- 黑龙江省牡丹江市某养鸡场28周龄蛋鸡发生以呼吸困难、咳血和产蛋下降为主要症状的疾病。本研究利用特异性引物,从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的567 bp大小片段;将发病鸡喉头及分泌物处理后接种鸡胚,在鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上形成痘斑。病毒接种鸡胚肾细胞48 h后电镜下可以观察到典型的疱疹病毒粒子形态,并且该分离株能够与ILTV单克隆抗体发生特异性反应。动物回归试验显示,感染的SPF鸡出现典型ILT症状,并能够从发病鸡体内重新分离到ILTV,由此判定该分离株为ILTV,并将其命名为MDJ0442。根据NCBI登录的ILTV序列(HQ630064)设计引物,以MDJ0442基因组为模板,PCR扩增TK的基因片段,进行测序和序列分析。结果表明,与其他ILTV参考病毒株相比,TK基因的核酸同源性为99.62%。本研究可以为ILTV的流行病学调查和分子生物学研究提供参考。
- 孔聪聪赵妍张晓敏崔红玉薛美胡顺磊闫帅李巧玲牛秀杰王云峰
- 关键词：传染性喉气管炎病毒TK基因
- 鸡传染性喉气管炎病毒(江苏株)的分离与初步鉴定被引量：4
- 2012年
- 本研究从江苏省某养鸡场采集临床疑似鸡传染性喉气管炎(infectious laryngotracheitis,ILT)的病鸡喉头气管,接种鸡胚绒毛尿囊膜分离病毒,命名为LJS091151。以分离毒人工感染SPF鸡,于攻毒后d3出现了ILT的典型临床症状,剖检亦可见喉头气管黏膜充血肿胀、消化道空虚、黏膜充血等病理变化。根据GenBank发表的鸡传染性喉气管炎病毒(Infectiouslaryngotracheitis virus,ILT)gB、TK基因保守序列设计2对引物对分离株基因组DNA进行扩增和序列测定。序列分析表明,获得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank发表的序列相似性均在99%以上,证明了分离株LJS091151为鸡传染性喉气管炎病毒。
- 赵妍孔聪聪张晓敏崔红玉石星明蒿莲薇胡顺磊闫帅薛美牛秀杰李巧玲王玫刘胜旺王云峰
- 关键词：鸡传染性喉气管炎病毒基因分析
