李世东
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 霍乱弧菌TcpA蛋白的表达及其免疫活性分析
- 2011年
- 采用PCR方法从鱼源霍乱弧菌Y1株(Vibrio cholerae Y1)扩增毒素共调菌毛蛋白A(toxin-coregulated pilin A,TcpA)基因并克隆至pMD18-T载体。序列分析显示tcpA基因ORF长675 bp,编码224个氨基酸(GenBank登录号EU649677)。同源性比对发现,该基因与GenBank中登录的7个霍乱弧菌参考株相应基因序列的核苷酸同源性和氨基酸同源性均很高,分别为99.6%～99.7%和98.7%～99.1%,表明TcpA蛋白相当保守。将tcpA基因亚克隆到表达载体pGEX-4T-1,并进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析发现分子量约为47.0 kD的重组TcpA融合蛋白主要以包涵体形式表达。Western blot检测结果显示,重组TcpA融合蛋白可与鼠抗Vc Y1菌株菌毛蛋白抗血清发生特异性结合反应。用纯化的重组TcpA融合蛋白免疫草鱼(Ctenopharyngodon idellus)制备抗血清,双相免疫扩散试验检测抗体效价达1∶16,且该抗血清能够明显抑制Vc Y1菌株对HEp-2细胞的黏附。草鱼免疫后第25天用Vc Y1菌株攻毒,结果相对免疫保护率达到73.33%。研究结果表明,重组TcpA蛋白仍保留着天然菌毛蛋白的免疫原性、免疫反应性和免疫保护性,重组TcpA蛋白可作为霍乱弧菌的候选诊断抗原和疫苗抗原。
- 陆吉虎李槿年岑俊宇李世东李冠青
- 关键词：霍乱弧菌基因表达免疫活性
- 重组质粒pET-OmpU的构建、表达及其对锦鲤的免疫保护作用
- 水产动物腹水病是由拟态弧菌(Vibriomimicus，Vm)引起的一种重要的细菌性疾病。现阶段尚无有效的疫苗用于该病的免疫预防。外膜蛋白U(OutermembraneproteinU，OmpU)是存在于多种病原弧菌中比...
- 李世东
- 关键词：拟态弧菌可溶性表达锦鲤免疫保护作用
- 拟态弧菌重组蛋白OmpUa的表达条件优化及其抗原性分析
- 2011年
- 目的分析重组蛋白OmpUa的表达形式和抗原性,优化拟态弧菌OmpUa基因工程重组菌(pMALc4X-OmpUa/TB1)的表达条件。方法诱导基因重组工程菌表达,分别采用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白OmpUa的表达形式及其抗原性。采用正交试验设计L9(34)方案,通过SDS-PAGE和电泳图谱光密度扫描分析培养基种类、诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度等因素对重组蛋白表达的影响。结果重组蛋白OmpUa主要以可溶性形式表达,具有良好的抗原性。基因工程重组菌接种LB培养基,37℃振荡培养3 h时加入0.5 mmol/LIPTG诱导4 h,即可获得高表达量的重组OmpUa蛋白。结论摸索出拟态弧菌OmpUa基因工程重组菌的最佳表达条件,为下一步大量制备OmpUa诊断性抗原奠定了基础。
- 李世东岑峻宇李槿年王莉
- 关键词：拟态弧菌正交试验设计抗原性分析
