左大明
- 作品数：50 被引量：101H指数：6
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学一般工业技术更多>>
- 人野生型MBL基因在大肠杆菌中的表达
- 2002年
- 为获得人MBL蛋白,并对其功能进行初步研究,用DNA重组法构建了组氨酸标签融合原核表达质粒pET 28(b)-MBL。将重组质粒转入大肠杆菌BI21(DE3),经IPTG在37℃条件下诱导培养,利用SDS-PAGE、Westem-blot检测目的蛋白的表达,用IMAC金属螯合层析柱对其进行纯化。成功地表达了重组MBL蛋白,纯化的MBL浓度约为844μg/mL,为制备MBL的基因工程抗体奠定了基础。
- 李雷王宏伟左大明戴景兴陈政良
- 关键词：野生型MBL基因大肠杆菌融合蛋白DNA重组基因表达
- 一种甘露糖自组装纳米粒及其制备方法与应用
- 本发明属于纳米颗粒技术领域，公开了一种甘露糖自组装纳米粒及其制备方法与应用，具体公开了一种甘露糖自组装纳米粒，所述甘露糖自组装纳米粒由3‑氨基苯硼酸修饰的介孔二氧化硅与甘露糖自组装而成。本发明提供的甘露糖自组装纳米粒以3...
- 周嘉罗嘉亮左大明侯鸿浩孙乐栋
- 小鼠PGRP-L分子PGRP结构域基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的克隆小鼠长型肽聚糖识别蛋白(PGRP-L)的PGRP结构域基因并在大肠杆菌中表达。方法采用RT-PCR技术,从Balb／C小鼠肝组织总RNA中扩增PGRP-L的PGRP结构域基因片段,将其克隆入pUCm-T载体,以PCR、酶切和测序进行鉴定。以PCR从含PGRP结构域基因的重组质粒中扩增目的基因片段,插入表达质粒pQE-30构建重组表达质粒,转化大肠杆菌M15,诱导表达并纯化目的蛋白。结果 RT-PCR扩增得到约500bp的基因片段,将其与pUCm-T 载体连接构建成重组质粒pmPGRPd,其酶切图谱与计算机分析结果一致,该基因片段长518 bp,序列与Genbank中相应基因序列相同。构建成重组表达载体pQE-PGRPd,在大肠杆菌M15中表达,表达产物主要存在于菌体裂解液上清中,为一相对分子质量约29 000的可溶性蛋白。结论成功克隆并原核表达了小鼠PGRP-L分子PGRP结构域基因,为 PGRP-L分子的研究奠定了一定基础。
- 何智左大明陈政良
- 关键词：基因克隆原核表达
- 抗脂多糖单克隆抗体的制备及功能研究
- 2009年
- 目的:制备广谱结合活性抗脂多糖单克隆抗体,并探讨其保护活性。方法:将脂多糖模拟肽与蓝载体交联后免疫BALB/c小鼠并制备单克隆抗体;间接ELISA检测其结合活性;小鼠体内、外实验检测其保护活性。结果:经过3次融合,筛选到一株具广谱结合活性的抗脂多糖单克隆抗体SMU-3A8;间接ELISA显示其可以和4种商品化脂多糖反应;体外实验显示SMU-3A8可以部分抑制脂多糖刺激小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7产生一氧化氮;体内实验表明其可以延长致死量鼠伤寒杆菌感染BALB/c小鼠的生存时间、提高生存率。结论:本实验成功制备了一株具广谱结合活性、对鼠伤寒菌感染小鼠模型有保护作用的抗脂多糖单克隆抗体,为脂多糖相关研究提供了一个有力工具。
- 蒋小滔卢晓左大明吴砂
- 关键词：脂多糖类抗体单克隆噬菌体展示模拟肽
- 将科研与本科生医学免疫学教学有机结合的尝试被引量：2
- 2008年
- 教学和科研是培养高级人才的重要途径，创新人才的培养与科研的融合是高校教育发展的必然趋势。在医学免疫学教学过程中紧密联系科研进展，有助于拓展学生的思维能力和创新能力，提高教学效果。
- 左大明刘艳君
- 关键词：医学免疫学教学方法
- Balb/c小鼠甘露聚糖结合凝集素-C基因的克隆与鉴定被引量：2
- 2003年
- 目的获得小鼠甘露聚糖结合凝集素-C(MBL-C)基因的全长编码区cDNA。方法利用RT-PCR方法,从Balb/c小鼠的肝细胞中分离出MBL-C基因cDNA片段,将其克隆入pUC-T载体并测序,对基因结构及其与人MBL基因的同源性进行比较分析。结果扩增得到的Balb/c小鼠MBL-C基因cDNA全长735 bp,编码245个氨基酸残基,包含了完整的编码区基因序列。经核苷酸序列比较分析发现,扩增得到的Balb/c小鼠MBL-C基因与Genbank中发表的序列具有100%的同源性,与人的MBL基因的同源性为71.4%。结论成功地克隆到完整的Balb/c小鼠MBL-C编码区基因,为进一步在整体水平研究MBL分子的天然免疫功能提供了必要的条件。
- 王宏伟陈政良左大明卢晓余新沛
- 关键词：RT-PCRCDNA克隆小鼠
- 突变型和野生型MBL基因在COS7细胞中的瞬时表达被引量：3
- 2006年
- 采用PCR技术,从质粒pMBLm52、pMBLm54和pMBLm57中分别获取含CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA点突变的人甘露聚糖结合凝集素(MBL)突变体全长编码区cDNA序列,将其分别插入质粒pcDNA4/HisMax C中,构建成相应的3种真核表达载体。将各突变型MBL基因的真核表达载体和野生型MBL基因真核表达载体以脂质体法分别转染COS7细胞。72 h后,以双抗体夹心ELISA技术检测各细胞培养上清中目的蛋白的含量分别为0.980μg/ml、0.971μg/ml、0.900μg/ml和1.047μg/ml;用One-way ANOVA分析这些目的蛋白的含量无显著性差异(P>0.05)。因此,MBL结构基因的点突变并不影响MBL蛋白的合成与分泌。
- 刘凤玲左大明陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素点突变免疫缺损COS7细胞
- 小鼠PGRP-L编码区基因的克隆及序列分析
- 2007年
- 目的:获得小鼠长型肽聚糖识别蛋白(mPGRP-L)全长编码区基因。方法:采用RT-PCR技术,从BALB/c鼠肝组织总RNA中扩增PGRP-L编码区基因片段,将其插入pUCm-T载体,以PCR和测序进行鉴定。结果:从BALB/c小鼠肝脏cDNA中,分别以Primer-F和Primer-R1、Primer-F1和Primer-R为引物对进行PCR,扩增得到约1050bp的上游基因片段和约540bp的下游基因片段。以纯化的上、下游片段为模板,Primer-F和Primer-R为引物进行PCR,扩增获得约1600bp的DNA片段,并将其克隆至pMD18-T载体获得重组质粒pMD18-mPGRP-L。鉴定结果表明,mPGRP-L编码区基因全长1593bp,与GenBank中mPGRP-LcDNA比较仅2个位置的核苷酸不同,两者的同源性为99.87%。结论:成功地克隆了mPGRP-L的cDNA,为mPGRP-L分子的研究奠定了一定基础。
- 何智张丽芸左大明陈政良
- 关键词：编码区基因克隆
- MASP2在小儿上呼吸道感染中的意义被引量：5
- 2015年
- 目的探讨血浆甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)水平在儿童上呼吸道感染(上感)中的意义。方法取103例上感患儿和35例健康体检儿童作为研究对象,测定其血浆MASP2和C反应蛋白(CRP)浓度并进行白细胞计数(WBC)。根据CRP和WBC值、感染不同时期及有无治疗,上感儿童分为CRP升高组(n=48)与正常组(n=54)、WBC升高组(n=61)与正常组(n=40)、感染早期未用药组(n=68)与感染中后期已用药组(n=35),对各组资料进行统计学分析。结果上感组MASP2浓度显著高于对照组(P<0.001),CRP升高组血浆MASP2浓度与CRP值正相关(r=0.310,P<0.05),WBC升高组MASP2水平与WBC值显著正相关(r=0.392,P<0.01),感染早期未用药组MASP2浓度显著高于感染中后期已用药组(P<0.01),MASP2、CRP、MBL2基因具有共同的转录因子HNF-4α结合位点。结论 MASP2蛋白可能为急性期蛋白,血浆MASP2水平可作为辅助诊断小儿上感的一个参考指标。
- 熊思敏赵娜裘宇容张丽芸左大明陈政良
- 关键词：上呼吸道感染C反应蛋白白细胞计数
- Balb/C小鼠甘露聚糖结合凝集素-A糖识别域的原核表达被引量：1
- 2009年
- 目的获取具有生物学活性的Balb/C小鼠血清型甘露聚糖结合凝集素(MBL-A)糖识别域(CRD)蛋白。方法应用PCR从含Balb/C小鼠MBL-A基因的质粒pmMBL-A中扩增目的基因片段,将其克隆至原核表达载体pET41a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白。表达产物(包涵体)经洗涤和复性处理后,利用GST柱纯化,以SDS-PAGE、Westernblotting和ELISA进行分析鉴定。结果从pmMBL-A中扩增到约450bp的DNA片段,构建重组载体pET41a-mMBL-A-CRD,经酶切和测序鉴定后,将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物主要以包涵体形式存在,其相对分子质量约47000。包涵体经洗涤及复性处理,GST柱纯化后,融合蛋白的纯度达90%以上。Westernblotting显示重组融合蛋白与抗GST抗体特异性反应,糖结合试验表明表达产物具有生物学活性。结论成功获得了具有生物学活性的Balb/C小鼠MBL-ACRD蛋白,为MBL-A分子的研究奠定了一定基础。
- 左大明张丽芸卢晓陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素原核表达天然免疫
