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细菌非编码小RNA研究进展被引量：2: 2014年; 细菌非编码小RNA（Small non-coding RNAs,sRNAs）是一类长度在40～500个核苷酸,通常位于细菌染色体基因间区转录但不编码蛋白的一类RNA分子.1967年,从大肠杆菌中分离出第一个sRNA-6SRNA,然而经历了30多年的时间才阐明其生物学功能.sRNAs广泛存在于生物界中,目前原核生物中以大肠杆菌和沙门菌中发现的sRNA数量最多,在霍乱弧菌、沙眼衣原体、产单核细胞李氏杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌以及产气荚膜梭菌中也均有发现.; 王勇祥孟霞孟宪臣聂佳佳朱国强; 关键词：小RNA 非编码金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌产气荚膜梭菌生物学功能

人源产肠毒素大肠杆菌疫苗的研发进展被引量：5: 2016年; 腹泻是全球范围内引起5岁以下幼童死亡的第二大病因,而产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是引起腹泻的最常见病原菌,其产生的细菌定植因子（CFs）和肠毒素是关键的毒力因子。CFs介导细菌黏附宿主小肠上皮细胞并完成定植,产生热敏肠毒素（LT）和热稳定肠毒素（ST）破坏宿主上皮细胞内的体液平衡,使体液和电介质过量分泌从而导致腹泻。预防ETEC腹泻的首选方法是使用能激发宿主产生抗黏附素免疫力和抗肠毒素免疫力的疫苗,阻断ETEC黏附和定植并中和肠毒素。目前一种名为Dukoral（R）的霍乱疫苗因能刺激机体产生抗热敏毒素免疫,已经被一些国家批准用于短期保护和预防旅行者腹泻。新型试验性ETEC候选疫苗正在研发中,旨在提供保护期长、反应谱广的抗ETEC感染免疫保护力。本文针对疫苗研发的关键问题和研究现状作一综述,并对未来的研究作出展望。; 夏芃芃孟宪臣孟宪臣; 关键词：腹泻免疫疫苗

肠炎沙门菌非编码小RNA isrC基因缺失株的致病性: 2015年; 细菌非编码小RNA(sRNA)是一类可在转录后水平调控基因表达的调节子。IsrC是存在于鼠伤寒沙门菌毒力岛上的一种与毒力相关的sRNA,可调节巨噬细胞存活蛋白MsgA的表达。本研究克隆了肠炎沙门菌50336菌株isrC基因,通过λ-Red同源重组系统构建了isrC缺失突变株50336△isrC,并利用表达载体pBR322构建了回补株50336△isrC/pisrC。将野生株,isrC突变株和回补株分别接种1日龄清远麻鸡,比较三者之间的致病性差异。结果显示,肠炎沙门菌isrC基因与鼠伤寒沙门菌同源性为100%;成功构建了isrC缺失突变株和回补株;野生株,突变株和回补株对雏鸡的半数致死量(LD50)分别为2.81×108 CFU,2.02×108 CFU和3.10×108 CFU,相比野生株50336,突变株50336△isrC的LD50明显下降,表明isrC基因的缺失增强了肠炎沙门菌的毒力。; 孟霞孟宪臣王金秋王亨朱春红倪杰王勇祥朱国强; 关键词：肠炎沙门菌

细菌非编码小RNA的分类及功能简介被引量：6: 2013年; 细菌非编码小RNA（non-coding small RNA,简称sRNA）是一类长度为40~500个核苷酸,在基因组中被转录但不编码蛋白质的一类RNA分子。它们大多数在Hfq的协助下,通过碱基配对识别靶标mRNA,在转录后水平调节基因的表达,是细菌代谢、群体感应和适应环境变化及毒力基因表达的重要调节因子。本文对sRNA的分类及功能作如下综述。; 聂佳佳金鑫孟宪臣朱国强; 关键词：HFQ

肠炎沙门氏菌非编码小RNA STnc640对菌毛相关基因的调控分析被引量：3: 2015年; STnc640是一种功能未知的沙门氏菌非编码小RNA(sRNA),为研究其对肠炎沙门氏菌(SE)菌毛相关基因的调控作用,本研究通过λ噬菌体Red同源重组系统构建了SE50336株stnc640缺失突变株(50336△stnc640),并利用表达载体p BR322构建了回补株50336△stnc640/pstnc640。利用荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)检测STnc640在SE50336株不同生长时期的转录水平,结果显示,细菌生长的稳定后期STnc640转录水平最高,为对数生长早期表达量的16.5倍;同时检测主要菌毛亚单位sefA、safA、stbA、sthA、csgA、csgD、peg 和外膜蛋白基因ompD的表达,结果显示,相比亲本株50336,50336△stnc640中sef A、csgD和ompD基因的表达均显著下调,而50336△stnc640/pstnc640回补株中以上各基因的表达均得到恢复。本实验结果表明STnc640对SE部分菌毛基因的表达具有调控作用。; 孟霞孟宪臣朱春红王亨王金秋倪杰王勇祥朱国强; 关键词：肠炎沙门氏菌菌毛

肠炎沙门菌非编码小RNA RyhB-1和IsrE对清远麻鸡的致病性被引量：2: 2017年; RyhB是一种大小为90bp左右的细菌非编码小RNA,已有研究表明存在于鼠伤寒沙门菌和霍乱弧菌中的2种RyhB同源物RyhB-1和IsrE可调控细菌生物膜形成、趋化性和耐酸性。为研究RyhB在肠炎沙门菌致病性上的作用,以及2种同源物能否对毒力调控发挥协同作用,本试验利用λ-Red同源重组系统构建了ryhB-1和isrE单、双缺失株,利用表达载体pBR322和pACYC184分别构建了回补质粒并导入缺失株50336△ryhB-1,50336△isrE,50336△ryhB-1/△isrE中,获得各突变株相应的回补菌株,检测了野生株和各突变株对1日龄雏鸡半数致死量(LD50)、致死率、体内分布等致病性差异。结果发现,ryhB-1和isrE基因缺失后导致肠炎沙门菌毒力减弱,双基因缺失株毒力下降更为明显,表明2种小RNA均对肠炎沙门菌致病性具有增强作用,且二者对毒力的调控具有协同作用。; 倪杰孟宪臣李芙蓉谢静陆广富朱春红陈凯孟霞朱国强; 关键词：肠炎沙门菌 ISRE 半数致死量

非编码小RNA InvR对肠炎沙门氏菌致病性调控的研究被引量：2: 2021年; 为研究肠炎沙门氏菌非编码小RNA Inv R对肠炎沙门氏菌致病性的作用,本研究克隆了肠炎沙门氏菌50336菌株inv R基因,通过λ-Red同源重组系统构建了inv R缺失突变株,并利用表达载体p BR322构建了回补株。采用比浊法测定了50336野生株,inv R缺失株和回补株的生长曲线,结果显示inv R的缺失不影响细菌的生长。通过细胞黏附实验检测了上述3种菌株对人结肠癌细胞系Caco-2的黏附性,结果显示,与野生株相比,inv R突变株对Caco-2细胞黏附能力有所增强,回补株黏附能力下降。将3种菌株分别感染1日龄雏鸡,检测雏鸡感染3种菌株后的发病与死亡情况、细菌在各脏器内的分布以及对雏鸡的半数致死量(LD50),结果显示,3株菌感染后均可引起雏鸡腹泻、内脏器官损伤等症状,严重者导致死亡;感染鸡心、肝、脾、肺、肾、小肠和盲肠均可分离到对应的细菌;野生株,inv R缺失株和回补株对雏鸡的LD50分别为9.47×10^(7)cfu,4.72×10^(7)cfu和7.50×10^(7)cfu,表明inv R基因的缺失增强了肠炎沙门氏菌的毒力,但与野生株相比,差异不显著。本研究首次证明了Inv R与肠炎沙门氏菌对宿主细胞的黏附和对易感动物的致病性密切相关,为Inv R毒力调控机制的研究提供了实验依据。; 孟霞李静孟宪臣孟宪臣王亨朱国强; 关键词：肠炎沙门氏菌

肠炎沙门氏菌hfq缺失株的构建和对fliC基因的调控分析被引量：2: 2013年; Hfq是一种介导细菌非编码小RNA(sRNA)与其靶标mRNA结合的伴侣蛋白,可协助多种sRNA在转录后水平调控基因表达。本研究通过λ噬菌体的Red同源重组系统构建了肠炎沙门氏菌hfq缺失突变株SE50336△hfq。利用荧光定量PCR技术分析了hfq突变株中鞭毛主要结构蛋白fliC的表达情况。结果表明与野生株相比,hfq突变株fliC的表达量明显下降,只有野生株的3.7%。细菌运动性试验表明突变株在半固体培养基上的运动能力减弱。以上结果表明Hfq蛋白可调节鞭毛结构蛋白FliC的表达,造成FliC蛋白表达量明显下降,鞭毛的合成受到抑制,从而导致肠炎沙门氏菌的运动能力减弱。; 孟霞孟宪臣朱春红王亨王金秋聂佳佳朱国强; 关键词：肠炎沙门氏菌 HFQ FLIC 运动性

肠炎沙门氏菌sRNA伴侣蛋白Hfq表达与纯化被引量：8: 2013年; 利用pET原核表达系统和亲和层析表达纯化肠炎沙门氏菌sRNA伴侣蛋白Hfq。首先构建含靶基因hfq的重组表达质粒pET28a(+)-hfq,经PCR及双酶切鉴定构建正确,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的基因高效表达。SDS-PAGE及Western blot结果表明:Hfq在大肠杆菌中成功表达,蛋白分子质量约为16.6ku,且主要存在于上清中,以可溶形式表达。进一步对表达产物进行Ni 2+亲和层析纯化,获得纯度较高的融合蛋白,为研究Hfq蛋白与sRNA的相互作用以及sRNA的调控机制提供基础。; 孟宪臣孟霞聂佳佳厚华艳王勇祥朱国强; 关键词：肠炎沙门氏菌 SRNA 纯化

肠炎沙门氏菌非编码小RNA STnc640调控菌毛相关基因的表达: 本研究以非编码小RNA STnc640为对象，探索其在调控沙门氏菌菌毛相关基因表达和毒力中的功能。并通过荧光定量PCR技术分析野生株和突变株中bcfAfimA以及其它菌毛主要亚单位基因表达量的变化。结果显示，与野生株相比...; 孟霞孟宪臣朱国强; 关键词：肠炎沙门氏菌非编码RNA 基因表达突变株; 文献传递

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孟宪臣

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