孙寅剑
- 作品数:5 被引量:46H指数:3
- 供职机构:山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金山东省博士后创新项目山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域:农业科学更多>>
- 传染性法氏囊病超强病毒株VP2基因原核表达及其免疫原性检测被引量:3
- 2011年
- 为检测传染性法氏囊病超强毒株(vvIBDV)重组VP2蛋白的免疫原性,本研究利用RT-PCR方法扩增vvIBDV的结构蛋白VP2基因,并将其克隆到表达载体pGEX-4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-VP2。将其转化受体菌E.coli BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,表达的重组蛋白约69 ku,并以包涵体形式存在。表达的重组蛋白经纯化后,免疫6周龄BALB/c小鼠制备免疫血清,ELISA分析表明制备的血清效价在1∶5 120以上,表明vvIBDV VP2具有良好的免疫原性,为建立vvIBDV的ELISA检测方法提供了试验依据。
- 朱彩霞朱瑞良刘冠华翁立雪马荣德孙寅剑
- 关键词:VP2
- 鸡奇异变形杆菌外膜蛋白的抗血清制备及其荧光标记抗体检测方法的建立被引量:7
- 2010年
- 为建立鸡奇异变形杆菌(P.mirabilis)直接荧光标记抗体检测方法,本研究提取P.mirabilis外膜蛋白(OMP),以OMP免疫健康新西兰家兔制备兔抗鸡P.mirabilis OMP高免血清,纯化的IgG,用FITC标记得到兔抗鸡P.mirabilis OMP-IgG的荧光标记抗体,建立直接荧光标记抗体检测方法。应用该方法检测临床样品184份,检测结果与细菌分离法和微量平板凝集比较,结果表明提取的OMP含有6种成分,分子量分别为67.0ku、63.1ku、57.5ku、53.7ku、43.0ku和31.6ku,经过优化的OMP-IgG荧光标记抗体最佳工作浓度为0.25mg/mL,最佳感作时间为30min。临床检测结果显示该方法具有简便、快速、敏感和特异性强等优点,为鸡P.mirabilis病的流行病学调查和临床快速诊断提供了技术保障。
- 朱明华朱瑞良王慧孙寅剑马荣德谭燕玲魏凯王新建郭文龙
- 关键词:奇异变形杆菌外膜蛋白荧光抗体
- 鸡奇异变形杆菌的分离鉴定和16S rRNA基因序列测定与系统进化分析被引量:35
- 2011年
- 从山东泰安一鸡场发病雏鸡眼中分离到1株致病菌(编号为QY),通过细菌形态学等常规鉴定符合奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)特性。用奇异变形杆菌阳性血清诊断结果呈阳性,人工感染证明该菌株是造成该鸡场雏鸡大批发病死亡的致病菌。药敏试验结果显示对头孢类、恩诺沙星等高度敏感,而对青霉素和复合磺胺等不敏感。以细菌16SrRNA基因通用引物进行PCR扩增,得到QY的16SrRNA基因序列,长约1 453bp(GenBank,登录号为GU477712)。将该序列与GenBank中序列进行Blast比对,发现与其匹配度最高的均是奇异变形杆菌各株系的16SrRNA序列,均高达98%以上。运用DNAStar软件与其中10株奇异变形杆菌分离株构建系统进化树,结果表明,分离株(QY菌株)与10个代表菌株的同源性均为98.9%~99.9%,其中与AB272366同源性最高为99.9%。从分子水平证明该菌是奇异变形杆菌并分析了其遗传进化规律,为鸡奇异变形杆菌的鉴定及其引起的疾病的诊断与治疗提供了参考。
- 朱明华朱瑞良马荣德孙寅剑郭文龙
- 关键词:RRNA系统进化树
- IBDV-VP2多表位串联基因的原核表达及表达产物免疫原性分析
- 传染性法氏囊病/(Infectious bursal disease, IBD/)是由传染性法氏囊病病毒/(Infectious bursal disease virus, IBDV/)引起鸡的急性、高度接触性传染病,是...
- 孙寅剑
- 关键词:IBDV多表位基因原核表达SPF鸡
- 文献传递