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花生过敏原Ara h 8的克隆表达、纯化及免疫学鉴定被引量：3: 2011年; 目的:克隆花生主要过敏原Ara h 8基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h 8基因;将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序。将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白Ara h 8;Western blot检测该重组蛋白的免疫原性。结果:测序结果表明克隆的花生Ara h 8基因片段全长为474 bp,编码157个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同。重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。Western blot结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性。结论:成功克隆并表达纯化了花生过敏原Ara h 8,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。; 易海涛刘志刚刘芳闫浩汤慕瑾肖小军夏立新; 关键词：ARA H 克隆表达纯化免疫印迹

大蒜抗菌活性蛋白的分离、纯化和鉴定被引量：5: 2012年; 目的从大蒜中分离纯化具有抗真菌活性的蛋白。方法提取大蒜粗提液,通过DEAE-SephadexTM A-50阴离子交换层析、Affi-gel blue gel亲和层析和ResourceTMS阳离子交换层析纯化目的蛋白。通过Tricine-SDS-PAGE、抗真菌活性检测鉴定该蛋白对不同真菌的抑制活性。结果纯化得到的蛋白分子质量为13ku,该蛋白对落花生褐斑病菌有明显的生长抑制活性,而对绿色木霉、黑曲霉、白地霉和产黄青霉没有生长抑制活性。纯化得到另外一种蛋白的分子质量约为4.6ku,该蛋白对绿色木霉有明显的生长抑制活性,而对落花生褐斑病菌、黑曲霉、白地霉和产黄青霉没有生长抑制活性。结论大蒜中存在抗真菌活性蛋白。; 魏雪盈徐栋梁闫浩夏立新刘志刚; 关键词：大蒜离子交换层析活性抑制

花生抗菌活性蛋白的分离、纯化和鉴定: 2012年; 目的从花生中分离、纯化具有抗真菌活性的蛋白。方法提取花生粗提液,通过Affi-Gel Blue Gel亲和层析和SuperdexTM75分子筛层析,纯化得到目的蛋白。通过Tricine-SDS-PAGE、抗真菌活性检测鉴定该蛋白对不同真菌的抑制活性。结果对花生总蛋白进行SDS-PAGE电泳分析结果显示,其相对分子质量为12 000～70 000。组份C对绿色木霉有抑菌活性,对落花生褐斑病菌、黑曲霉、白地霉、产黄青霉均无抑菌活性。活性组份C层析得到的组份23对绿色木霉有抑菌活性。对活性组份23进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析结果显示,组份23相对分子质量为24 000。结论花生中存在抗真菌活性蛋白。; 贾梦阳徐栋梁高安健闫浩夏立新刘志刚; 关键词：花生离子交换层析

蚕蛹过敏原的初步分离与鉴定: 夏立新蔡德丰肖俊文肖小军邬玉兰杨平常刘志刚

儿童家蚕过敏反应过敏原图谱的研究被引量：1: 2015年; 目的分析家蚕过敏的儿童血清IgE与蚕蛹过敏原反应的图谱。方法提取蚕蛹的蛋白质成分,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对粗提液的蛋白质组分进行分析;用免疫印迹法(Western blotting)对蚕蛹过敏原成分进行鉴定;用离子交换层析对其过敏原进行初步纯化并进行免疫印迹鉴定。结果蚕蛹有20余种不同的蛋白质条带,其中最多的蛋白质主带集中在30、28、14、12ku。免疫印迹结果显示,1条18ku的条带为反应频率最高的过敏原(5/11)。经过离子交换层析,发现反应的主要过敏原在离子交换层析的第3个洗脱峰。结论儿童家蚕过敏患者血清IgE的反应图谱与成人有所不同,可为家蚕过敏诊断及治疗提供理论依据。; 蔡德丰马东礼肖小军邬玉兰刘志刚杨平常曹小勇夏立新; 关键词：儿童家蚕

低致敏原应用于特异性免疫治疗的研究进展被引量：2: 2011年; 过敏性疾病是21世纪重点防治的3大疾病之一,目前仍无有效方法对患者达到治愈的目的.特异性免疫治疗(SIT)是针对过敏性疾病唯一的对因治疗方法,传统的SIT具有很大的副作用,开发低致敏原疫苗将对SIT的安全性方面有着十分重要的意义.; 刘志刚易海涛夏立新; 关键词：过敏性疾病疫苗

牛乳主要过敏原α-乳白蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建被引量：14: 2010年; 采用RT-PCR技术克隆牛乳主要过敏原α-乳白蛋白的全长基因,并根据序列设计带有酶切位点的特异性引物对所得cDNA的开放阅读框进行扩增,将所得基因片段克隆到PET-28a载体.结果克隆了牛乳主要过敏原α-乳白蛋白的完整基因,所克隆的基因开放阅读框全长为429 bp,编码142个氨基酸,该蛋白相对分子质量约为16 265,等电点为6.10,与理论值相符.通过与Genbank中已有序列比对分析,同源性高达100%.实现构建该基因的PET-28a原核表达载体,为牛乳主要过敏原α-乳白蛋白基因的相关研究奠定了基础.; 闫浩邬玉兰夏立新刘志刚; 关键词：牛乳 Α-乳白蛋白基因克隆原核表达

拟穴青蟹抗菌肽CrusSp基因克隆表达及抑菌活性分析被引量：5: 2011年; 从拟穴青蟹血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增编码CrusSp成熟肽的cDNA序列,克隆至pET-32a(+)表达载体中,转化至E.coli OrigamiTM(DE3)中表达CrusSp蛋白,通过Ni2+亲和层析柱纯化获得CrusSp蛋白,表达出的CrusSp蛋白相对分子量约10.27 ku,等电点为8.54,滤纸片扩散法结果显示CrusSp蛋白抑制绿色木霉.; 徐栋梁李洁颖彭永鹤夏立新刘志刚; 关键词：拟穴青蟹抗菌肽纯化抑菌活性

小龙虾钙结合蛋白基因表达及纯化被引量：5: 2010年; 从小龙虾(Procambarus clarkii:pc)的肌肉组织中提取其总RNA,设计特异性引物,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆出编码小龙虾钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium-binding protein:SCP)基因片段,扩增片段为582bp.该序列与已报道的几类虾SCP序列比对结果表明:在氨基酸水平上同源性为81%～96%.将SCP基因与pET-28a载体连接,构建了原核表达载体pET-28a-pcSCP重组质粒,转化E.coliBL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE结果表明:表达蛋白约为22kDa,与预期的相对分子质量大小相符.并用Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化,得到了纯度较高的pcSCP.研究重组蛋白pcSCP的获得,为pcSCP变应原性及相关的研究奠定基础.; 魏波夏立新陈红兵邬玉兰刘志刚; 关键词：小龙虾钙结合蛋白基因表达

花生过敏原Ara h2.02的克隆、表达及免疫学鉴定被引量：13: 2010年; 通过提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h2.02基因,将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序,将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中,IPTG诱导表达、Western-blotting检测该重组蛋白的免疫原性.测序结果表明:克隆的花生Ara h2.02基因片段全长为519 bp,编码为172个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同.诱导表达后的蛋白经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western-blotting结果表明该蛋白能与花生过敏病人混合血清中的IgE结合,具有免疫原性.成功克隆并表达了花生过敏原Ara h2.02,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性.; 易海涛刘志刚闫浩刘芳赵郭存夏立新; 关键词：花生克隆免疫印迹

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夏立新

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