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夏立新

作品数:47 被引量:131H指数:7
供职机构:深圳大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金深圳出入境检验检疫局科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
相关领域:医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>

文献类型

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主题

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  • 6篇免疫印迹
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  • 5篇克隆表达
  • 4篇蛋白
  • 4篇致敏原
  • 4篇配合物
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  • 4篇免疫学
  • 4篇免疫学鉴定
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作者

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年份

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  • 3篇2015
  • 4篇2014
  • 1篇2013
  • 5篇2012
  • 12篇2011
  • 7篇2010
  • 1篇2009
  • 1篇2008
  • 1篇2006
47 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
花生过敏原Ara h 8的克隆表达、纯化及免疫学鉴定被引量:3
2011年
目的:克隆花生主要过敏原Ara h 8基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h 8基因;将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序。将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白Ara h 8;Western blot检测该重组蛋白的免疫原性。结果:测序结果表明克隆的花生Ara h 8基因片段全长为474 bp,编码157个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同。重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。Western blot结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性。结论:成功克隆并表达纯化了花生过敏原Ara h 8,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。
易海涛刘志刚刘芳闫浩汤慕瑾肖小军夏立新
关键词:ARAH克隆表达纯化免疫印迹
大蒜抗菌活性蛋白的分离、纯化和鉴定被引量:5
2012年
目的从大蒜中分离纯化具有抗真菌活性的蛋白。方法提取大蒜粗提液,通过DEAE-SephadexTM A-50阴离子交换层析、Affi-gel blue gel亲和层析和ResourceTMS阳离子交换层析纯化目的蛋白。通过Tricine-SDS-PAGE、抗真菌活性检测鉴定该蛋白对不同真菌的抑制活性。结果纯化得到的蛋白分子质量为13ku,该蛋白对落花生褐斑病菌有明显的生长抑制活性,而对绿色木霉、黑曲霉、白地霉和产黄青霉没有生长抑制活性。纯化得到另外一种蛋白的分子质量约为4.6ku,该蛋白对绿色木霉有明显的生长抑制活性,而对落花生褐斑病菌、黑曲霉、白地霉和产黄青霉没有生长抑制活性。结论大蒜中存在抗真菌活性蛋白。
魏雪盈徐栋梁闫浩夏立新刘志刚
关键词:大蒜离子交换层析活性抑制
花生抗菌活性蛋白的分离、纯化和鉴定
2012年
目的从花生中分离、纯化具有抗真菌活性的蛋白。方法提取花生粗提液,通过Affi-Gel Blue Gel亲和层析和SuperdexTM75分子筛层析,纯化得到目的蛋白。通过Tricine-SDS-PAGE、抗真菌活性检测鉴定该蛋白对不同真菌的抑制活性。结果对花生总蛋白进行SDS-PAGE电泳分析结果显示,其相对分子质量为12 000~70 000。组份C对绿色木霉有抑菌活性,对落花生褐斑病菌、黑曲霉、白地霉、产黄青霉均无抑菌活性。活性组份C层析得到的组份23对绿色木霉有抑菌活性。对活性组份23进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析结果显示,组份23相对分子质量为24 000。结论花生中存在抗真菌活性蛋白。
贾梦阳徐栋梁高安健闫浩夏立新刘志刚
关键词:花生离子交换层析
蚕蛹过敏原的初步分离与鉴定
夏立新蔡德丰肖俊文肖小军邬玉兰杨平常刘志刚
儿童家蚕过敏反应过敏原图谱的研究被引量:1
2015年
目的分析家蚕过敏的儿童血清IgE与蚕蛹过敏原反应的图谱。方法提取蚕蛹的蛋白质成分,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对粗提液的蛋白质组分进行分析;用免疫印迹法(Western blotting)对蚕蛹过敏原成分进行鉴定;用离子交换层析对其过敏原进行初步纯化并进行免疫印迹鉴定。结果蚕蛹有20余种不同的蛋白质条带,其中最多的蛋白质主带集中在30、28、14、12ku。免疫印迹结果显示,1条18ku的条带为反应频率最高的过敏原(5/11)。经过离子交换层析,发现反应的主要过敏原在离子交换层析的第3个洗脱峰。结论儿童家蚕过敏患者血清IgE的反应图谱与成人有所不同,可为家蚕过敏诊断及治疗提供理论依据。
蔡德丰马东礼肖小军邬玉兰刘志刚杨平常曹小勇夏立新
关键词:儿童家蚕
低致敏原应用于特异性免疫治疗的研究进展被引量:2
2011年
过敏性疾病是21世纪重点防治的3大疾病之一,目前仍无有效方法对患者达到治愈的目的.特异性免疫治疗(SIT)是针对过敏性疾病唯一的对因治疗方法,传统的SIT具有很大的副作用,开发低致敏原疫苗将对SIT的安全性方面有着十分重要的意义.
刘志刚易海涛夏立新
关键词:过敏性疾病疫苗
牛乳主要过敏原α-乳白蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建被引量:14
2010年
采用RT-PCR技术克隆牛乳主要过敏原α-乳白蛋白的全长基因,并根据序列设计带有酶切位点的特异性引物对所得cDNA的开放阅读框进行扩增,将所得基因片段克隆到PET-28a载体.结果克隆了牛乳主要过敏原α-乳白蛋白的完整基因,所克隆的基因开放阅读框全长为429 bp,编码142个氨基酸,该蛋白相对分子质量约为16 265,等电点为6.10,与理论值相符.通过与Genbank中已有序列比对分析,同源性高达100%.实现构建该基因的PET-28a原核表达载体,为牛乳主要过敏原α-乳白蛋白基因的相关研究奠定了基础.
闫浩邬玉兰夏立新刘志刚
关键词:牛乳Α-乳白蛋白基因克隆原核表达
拟穴青蟹抗菌肽CrusSp基因克隆表达及抑菌活性分析被引量:5
2011年
从拟穴青蟹血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增编码CrusSp成熟肽的cDNA序列,克隆至pET-32a(+)表达载体中,转化至E.coli OrigamiTM(DE3)中表达CrusSp蛋白,通过Ni2+亲和层析柱纯化获得CrusSp蛋白,表达出的CrusSp蛋白相对分子量约10.27 ku,等电点为8.54,滤纸片扩散法结果显示CrusSp蛋白抑制绿色木霉.
徐栋梁李洁颖彭永鹤夏立新刘志刚
关键词:拟穴青蟹抗菌肽纯化抑菌活性
小龙虾钙结合蛋白基因表达及纯化被引量:5
2010年
从小龙虾(Procambarus clarkii:pc)的肌肉组织中提取其总RNA,设计特异性引物,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆出编码小龙虾钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium-binding protein:SCP)基因片段,扩增片段为582bp.该序列与已报道的几类虾SCP序列比对结果表明:在氨基酸水平上同源性为81%~96%.将SCP基因与pET-28a载体连接,构建了原核表达载体pET-28a-pcSCP重组质粒,转化E.coliBL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE结果表明:表达蛋白约为22kDa,与预期的相对分子质量大小相符.并用Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化,得到了纯度较高的pcSCP.研究重组蛋白pcSCP的获得,为pcSCP变应原性及相关的研究奠定基础.
魏波夏立新陈红兵邬玉兰刘志刚
关键词:小龙虾钙结合蛋白基因表达
花生过敏原Ara h2.02的克隆、表达及免疫学鉴定被引量:13
2010年
通过提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h2.02基因,将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序,将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中,IPTG诱导表达、Western-blotting检测该重组蛋白的免疫原性.测序结果表明:克隆的花生Ara h2.02基因片段全长为519 bp,编码为172个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同.诱导表达后的蛋白经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western-blotting结果表明该蛋白能与花生过敏病人混合血清中的IgE结合,具有免疫原性.成功克隆并表达了花生过敏原Ara h2.02,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性.
易海涛刘志刚闫浩刘芳赵郭存夏立新
关键词:花生克隆免疫印迹
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