周凤云
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：江苏省教育厅自然科学基金江苏省高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Endo G基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察细胞凋亡因子核酸内切酶G(endonuclease G,Endo G)基因过表达在镉诱导人胚胎肾细胞HEK-293凋亡中的影响。方法从人肝癌细胞系(human hepatocarcinoma cells,HepG 2)中提取RNA,经逆转录获取互补DNA cDNA),通过聚合酶链反应(PCR)扩增Endo G基因,与pcDNA 3.0相连,构建pcDNA 3.0-Endo G真核表达载体,转染HEK-293细胞,并结合不同浓度氯化镉处理细胞;通过蛋白印迹实验(Western blot)验证基因过表达,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染法及流式细胞术(FCM)检测Endo G基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡的影响,噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率。结果成功构建pcDNA 3.0-EndoG真核表达载体,Endo G基因扩增片段大小约1 100 bp;该载体转染细胞后,Endo G成功过表达,使HEK-293细胞凋亡率>37%,且随氯化镉浓度增加,Endo G表达量先上升后下降。结论 Endo G以诱导细胞早期凋亡和晚期凋亡为主要形式。
- 周凤云潘杨滨何志娟毛伟平李文秀刘宣宣徐翀
- 关键词：氯化镉真核表达HEK-293细胞
- 重组人ICOS胞外区原核表达载体的构建及表达
- 2011年
- 构建重组人ICOS胞外区原核表达载体,并进行初步表达。根据GenBank基因库中ICOS胞外区基因序列设计引物,用RT-PCR法从人T淋巴瘤细胞Jurkat的总mRNA中扩增出ICOS胞外区基因并运用重叠延伸PCR技术扩增出ICOS胞外区同源二聚体,并将ICOS胞外区同源二聚体插入到原核表达载体PET-28a中,并对重组质粒进行鉴定。转化E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白。结果获得ICOS胞外区同源二聚体基因大小为757 bp,构建的重组表达载体中目的基因序列完全正确。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达,相对分子质量约为31 ku。这说明成功地构建人重组ICOS胞外区同源二聚体的原核表达载体,并实现在大肠杆菌中大量表达。为下一步蛋白纯化及制备抗ICOS单克隆抗体奠定了基础。
- 李文秀周凤云毛伟平潘杨滨何志娟徐翀刘宣宣
- 关键词：ICOSJURKAT细胞重叠延伸PCR原核表达
- 抗HepG2核糖体展示抗体库的构建
- 2009年
- [目的]构建鼠源抗HepG2核糖体展示抗体库。[方法]以培养的HepG2肝癌细胞4次免疫Balb/c小鼠,取脾脏分离总RNA,逆转录合成第一条链,PCR扩增重链可变区和轻链k,经linker DNA连接形成VH/k核糖体展示抗体库。将VH/k与pMD18-T载体的连接产物转化E.coli TG1,蓝白斑筛选,挑取白色菌落,提取质粒,PCR鉴定,并测序。[结果]VH和k链得到正确的扩增,长度分别为399和647bp,VH/k连接产物正确,连接产物长度为1 093 bp。[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗HepG2核糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗HepG2特异性单链抗体奠定基础。
- 周雷毛伟平冯娟刘洪云魏传静李文秀周凤云
- 关键词：核糖体展示单链抗体肝癌抗体库
