吴忠香 作品数:38 被引量:45 H指数:4 供职机构: 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 云南省科技厅科研基金 云南省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 政治法律 更多>>
低血清培养Vero细胞和流感病毒条件的优化 被引量:11 2009年 目的优化低血清培养Vero细胞和流感病毒的条件,为开发Vero细胞流感疫苗奠定基础。方法分别在DMEM/F12和SLM-199培养基中,添加不同浓度的血清,培养Vero细胞,观察细胞连续传代的生长状态;接种流感病毒后,检测病毒培养液不同pH值、不同浓度TPCK-胰酶和病毒不同接种量对病毒血凝效价的影响。结果用SLM-199在1.0%血清浓度下培养的Vero细胞接种流感病毒血凝效价较高,病毒培养液pH值为7.2,TPCK-胰酶含量为1.0μg/ml,接种病毒MOI为1.0时,72h收获的病毒血凝效价最高。结论已筛选出低血清培养Vero细胞和流感病毒的适宜条件。 刘铮 孙明波 高菁霞 马磊 林小瑞 燕景恩 张勇 吴忠香 刘雅灵 姚忠萍 廖国阳 李卫东关键词:流感病毒 VERO细胞 CVA16感染对m^6A甲基化相关蛋白表达和定位的影响 被引量:4 2020年 目的本研究旨在探究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A 16,CVA16)感染后是否会影响N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)甲基化相关蛋白在人呼吸道上皮细胞(16HBE)、ICR乳鼠和SCARB2人源化小鼠中的表达,以及在细胞中的定位。方法病毒分别以感染复数(MOI)=0.1感染16HBE和107 CCID50/ml感染小鼠,Western blot分析甲基转移酶、去甲基化酶和甲基化阅读蛋白的表达变化,免疫荧光观察这些蛋白质在细胞中的定位。结果研究结果发现,随着CVA16病毒感染时间的增加,m6A甲基化相关蛋白在细胞中表达水平逐渐下调,在ICR乳鼠和SCARB2小鼠中无明显变化;病毒感染后,m6A甲基化相关蛋白在细胞核与细胞质中重新分布,甚至发生降解。结论CVA16在宿主细胞中复制时可以改变m6A甲基化修饰相关蛋白的表达和细胞定位。本研究结果提示m6A修饰可能是肠道病毒治疗的潜在新靶点。 李卫宇 蒋曦 郑雪麟 朱文兵 刘卓航 李慧 张雪梅 吴忠香 宋杰 董少忠pH值对甲肝减毒活疫苗后处理得率的影响 被引量:1 2001年 在甲肝减毒疫苗生产工艺中不同pH对疫苗得率有一定的影响 ,为提高疫苗的产量 ,在传统的氯仿抽提条件下 ,使用不同pH值 (pH1.0~ 12 .0 )的磷酸盐缓冲体系进行氯仿抽提 ,检测抽提后甲肝病毒(HepatitisAVirus ,HAV)抗原滴度和感染性滴度 ,结果表明 :经氯仿抽提后 ,HAV抗原滴度和感染性滴度均在pH8.0~ 9.0时最高 ,相应得率也比常规处理的得率有显著的提高 .说明改进pH抽提条件对甲型肝炎减毒活疫苗后处理工艺效率的提高 ,成品疫苗产量的增加具有实际应用价值 . 胡凝珠 王晓辉 柯华昕 杨丽仙 杨伟 路虹 吴忠香 金琼仙 杨净思关键词:甲型肝炎减毒活疫苗 PH值 生产工艺 后处理 得率 Protein A/G亲和层析在HCV抗体纯化中的应用效果 被引量:5 2010年 目的分析蛋白A/G亲和层析柱在纯化抗HCV血清的影响因素,以便选择最佳使用条件提高ProteinA/G亲和柱的利用效率。方法分别将抗HCV血清用不同处理方式、不同上样方式、不同使用次数的亲和柱进行纯化,并收集纯化样品进行检测、分析。结果用饱和硫酸铵粗纯后,在蛋白A/G亲和层析柱的纯化效果更好;样品在亲和柱内吸附30min可提高亲和柱的对目的蛋白的吸附。结论使用初纯的抗体并增加吸附时间能提高亲和层析柱的利用率,并有效延长亲和柱的使用寿命。 杨蓉 谢忠平 龙润乡 白惠珠 谭振国 王燕 吴忠香 张勇关键词:PROTEIN 抗体 纯化 丙型肝炎病毒 抗树鼩CD3分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用 本发明涉及一种抗树鼩CD3分子单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株与应用,属于分子生物学技术领域。该杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心建株,保藏名称为杂交瘤细胞株TSCD3‑77B2,保藏号为CCTCC NO:C2... 徐靖雯 董少忠 张雪梅 吴忠香 蒋曦 朱文兵 宋杰 李慧 巩蔚 严丽蔚文献传递 抗树鼩CD3ε单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定 被引量:1 2018年 目的:制备鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法:以GST-CD3ε蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术融合免疫后的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,通过间接酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测,筛选出多株能分泌抗树鼩CD3ε的杂交瘤细胞株,经过3次亚克隆筛选后,制备小鼠腹水单克隆抗体,并纯化得到鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,通过腹水单克隆抗体效价测定、单克隆抗体亲和力测定、单克隆抗体抗原表位分析、Western blot和流式细胞荧光分选技术(fluorescence activated cell sorting,FACS)分析其生物学特性。结果:筛选到5株能稳定分泌抗树鼩CD3ε单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为78I、87I、92D1、75II和35C8,腹水单克隆抗体效价分别为1∶10~6、1∶10~6、1∶10~4、1∶10~6、1∶10~3,亲和力解离常数(Kd)分别为1.8×10^-5、2.9×10^-5、4.9×10^-5、7.3×10^-5、3.6×10^-5。5株单克隆抗体抗原表位分析显示78I、87I和75II识别同一抗原表位,而92D1和35C8识别另一抗原表位。经Western blot检测,HRP标记后的92D1能识别GST-CD3ε蛋白和树鼩外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),并对大鼠、小鼠和猴的PBMC有抗体交叉反应。经FACS检测,PE-Cy5.5标记后的92D1能特异性识别树鼩PBMC。结论:成功制备出鼠抗树鼩CD3ε的单克隆抗体,为进一步应用于树鼩免疫检测奠定基础。 徐婧雯 张雪梅 吴忠香 朱文兵 蒋曦 巩蔚 严丽蔚 宋杰 李慧 董少忠关键词:树鼩 单克隆抗体 狂犬病病毒糖蛋白表达及纯化及其记忆性B细胞结合能力的分析 被引量:3 2017年 表达纯化不同标签、不同大小3个狂犬病病毒糖蛋白,分析其结合功能后,得到具备高亲和力的、可特异性结合记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。本实验通过基因工程的方法,采用不同的原核表达系统分别表达带有不同标签的、全长和膜外区的RVG,纯化蛋白并分析比较其结合功能,荧光标记候选蛋白,结合CD19及CD27的抗体,流式细胞术检测狂犬疫苗免疫后PBMCs中抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞的情况,确认候选蛋白与抗狂犬病毒特异性记忆性B细胞的结合功能。本实验成功构建了3个表达载体pGEX-5X-1-RVG、pET28a-RVG和pET30a-G,优化表达纯化条件成功获得了糖蛋白GST-RVG、His-RVG和His-G。纯化后的GST-RVG、His-RVG和His-G经Western blotting和ELISA鉴定均有抗原特异性;由竞争ELISA法测得3个纯化后糖蛋白与抗狂犬病病毒抗体的亲和力。通过流式细胞术可以检测到狂犬疫苗免疫后阳性志愿者PBMCs中的抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞,从而获得了高亲和力、可用于分选抗原特异性的记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。 严丽蔚 巩蔚 朱文兵 张雪梅 徐婧雯 吴忠香 卢孔杰 孙明 董少忠关键词:狂犬病病毒糖蛋白 流式细胞术 抗GII.4型诺如病毒衣壳蛋白VP1和病毒样颗粒VLP单克隆抗体的制备方法和应用 本发明涉及一种抗GII.4型诺如病毒衣壳蛋白VP1和病毒样颗粒VLP单克隆抗体的制备方法和应用,通过将目的序列插入原核表达载体中构建重组质粒pGEX‑5X‑1‑VP1,利用大肠杆菌表达系统表达并纯化得GII.4型诺如病毒... 董少忠 李慧 宋杰 徐婧雯 张雪梅 吴忠香 朱文兵 蒋曦 李卫宇 郑雪麟 刘卓航文献传递 浅谈离退休干部的心理特征及心理健康干预 2017年 离退休干部会因为从原有岗位的撤离而产生一定的落差感,如果没有及时进行调整,很容易形成负面心理,影响其老年的生活与健康,严重时还会影响其家属的日常生活与工作。因此根据离退休干部心理特点来采取相应的心理健康干预非常具有必要性。本文先分析了离退休干部的心理特征,再提出相应的心理健康干预措施,希望具有借鉴意义。 郭自全 仲志磊 汤洋 王海坚 吴忠香关键词:离退休干部 心理特征 心理健康干预 树鼩CD4蛋白多克隆抗体的制备及检测 被引量:1 2016年 目的 原核表达、纯化树鼩CD4蛋白并制备多克隆抗体,检测树鼩体内的CD4蛋白.方法 克隆树鼩CD4基因并连接到表达载体,构建重组质粒pET30a(+)-CD4和pGEX-5X-1-CD4,表达并纯化重组蛋白His-CD4和GST-CD4,用不同佐剂[弗氏佐剂、MF59和A1(OH)3]制备多抗,用Western blot法检测血清抗体特异性.结果 蛋白表达产物His-CD4和GST-CD4的相对分子质量分别约为53.5×103和70.0×103,纯化后蛋白浓度分别为600 μg/mL和1 mg/mL;三组佐剂均能诱导产生抗体,抗体几何平均滴度(Geometric Mean Titer,GMT)的比较结果为:弗氏佐剂组(GMT:97 420)>Al(OH)3佐剂组(GMT:67 202)>MF59佐剂组(GMT:55 128);其中弗氏佐剂组显著高于原蛋白组(P<0.001);Al(OH)3组显著高于原蛋白组(P<0.01);而MF59组显著高于原蛋白组(P<0.05).结论 制备了特异性良好的小鼠抗血清,能够特异性地结合树鼩的CD4蛋白.为下一步本实验室制备CD4单克隆抗体、CD4蛋白分子的功能研究以及树鼩的病毒感染模型等免疫相关实验的进行提供了基础. 卢孔杰 徐婧雯 张雪梅 吴忠香 任芳芳 马娜 巩蔚 严丽蔚 朱文兵 董少忠关键词:树鼩 纯化 多克隆抗体