史佳楠
- 作品数：23 被引量：69H指数：7
- 供职机构：河北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种微藻收集和浓缩的方法与装置
- 一种微藻收集和浓缩的方法，是将含微藻的液体注入微孔不锈钢网做成的网桶中，因水面提高产生自然压力使水分通过微孔排出，而微藻留在桶中，达到收集和浓缩微藻的目的。本发明的装置包括：（1）微藻收集桶，该桶由三部分组成，上部和下部...
- 刘国振柴帅杰史佳楠郭美岑李莉云刘丽娟窦世娟魏健
- 文献传递
- 转基因水稻中GUS蛋白质的检测及其表达特征被引量：10
- 2014年
- 【目的】建立转基因水稻中GUS蛋白质的免疫学检测方法,并了解花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以细菌基因组DNA为模板,PCR扩增GUS基因后克隆到表达载体pET30a中,测序验证的重组子转入大肠杆菌表达菌BL21中,IPTG诱导获得重组表达的GUS蛋白质,用HIS-tag beads纯化后作为免疫原免疫小鼠制备GUS蛋白质特异的抗体,通过免疫印迹分析筛选高特异性的单克隆抗体,用Broadford法对重组的GUS蛋白质进行定量,对不同浓度的GUS蛋白质进行免疫印迹分析,绘制检测GUS蛋白质的标准曲线,通过与标准曲线的比较对水稻叶片中GUS蛋白质进行定量分析。提取不同时期、不同部位的水稻总蛋白质,包括苗期的地上部、地下部,分蘖期的茎、茎节、叶鞘、叶枕、叶片上部、叶片中部和叶片下部,孕穗期的茎、穗轴、叶鞘、叶枕、叶片、幼穗(长度分别为1、2、10和20 cm),开花期的茎、穗轴、叶鞘、叶片、穗子,成熟期的茎、叶片、授粉后不同时期的种子(分别为授粉后10、20、30和40 d)、乳熟期的胚、胚乳和颖壳、成熟种子的全种子、胚、胚乳和颖壳以及不同时期的叶片和根部材料等。SDS-PAGE分离后用抗体检测其GUS蛋白质的丰度。【结果】筛选获得了高特异性的抗GUS单克隆抗体(编号为#27),用该抗体检测转基因水稻中及重组的GUS蛋白质均呈现特异条带,没有可见的背景信号,用本研究建立的免疫印迹方法对重组GUS蛋白质的检测下限约为4 ng,可检出转基因水稻单粒大米2.5%样品中(约0.6 mg)的GUS蛋白质。在不同时期的转基因水稻叶片中GUS蛋白质的表达丰度基本稳定,而在水稻根部的GUS丰度随生长急剧减少,5叶期根中的表达量不到3叶期的三分之一,到6叶期检测不到GUS蛋白质。在水稻苗期叶片中,GUS蛋白质约占鲜重的0.02‰。另外,除分蘖期以后的根部之
- 牛东东郝育杰荣瑞娟韦汉福兰金苹史佳楠魏健李雪姣杨烁奚文辉武鹏程刘丽娟吴琳刘斯奇尹长城刘国振
- 关键词：水稻转基因植物免疫印迹
- 莱茵衣藻油脂合成关键蛋白质的表达研究
- 人类对传统化石能源的过度开采在推动经济发展的同时,其造成的能源危机、环境污染等问题也日益凸显.微藻因为油脂含量高、油脂质量好、洁净可再生等特点成为生物能源领域研究的热点.莱茵衣藻是微藻研究及分子生物学研究的模式生物,研究...
- 史佳楠刘国振柴帅杰郭美岑郭亚璐黄腾张剑硕李莉云窦世娟刘丽娟
- 关键词：莱茵衣藻蛋白质组学基因表达
- 文献传递
- 基于转录特征的水稻WRKY转录因子功能注释被引量：2
- 2016年
- 转录水平的变化是转录因子功能发挥的重要体现形式,高通量测序技术的发展和应用揭示了丰富的转录数据,对转录数据的深度分析有助于基因的注释和功能研究。本文以水稻WRKY转录因子家族为对象,在总结WRKY基因功能的基础上,对生物和非生物胁迫、发育、营养和激素处理等不同生物学过程中的转录数据进行了系统的整理和挖掘,获得了不同反应中转录变化的特定WRKY基因清单,丰富了水稻WRKY转录因子家族成员的注释信息,以期这些信息为后续的功能研究提供有价值的参考。
- 李莉云史佳楠杨烁孙财强刘国振
- 关键词：WRKY转录因子水稻注释转基因
- 病程相关蛋白质在水稻与白叶枯病菌互作过程中的表达被引量：1
- 2013年
- 【目的】了解病程相关(pathogenesis-related,PR)蛋白质在植物防卫体系中的表达模式进而探讨水稻抗病的分子机理。【方法】选取10个前期工作中鉴定的差异转录PR基因,利用免疫印迹(Western blotting,WB)技术检测它们在水稻正常生长和与白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae Xoo)互作过程中的表达丰度变化。【结果】发现随着水稻的生长,Os12g43380、Os12g36830、Os12g36860、Os12g36840、Os02g41670、Os05g35290和Os12g33610的表达逐步增加,一般在开花期达到最高,成熟期有所降低。在白叶枯病抗性基因Xa21介导的水稻-Xoo非亲和互作过程中,检测到Os01g51570、Os01g71680和Os12g36850的表达量上调,Os12g36830、Os12g36840、Os02g41670和Os05g35290的表达量下调,并且发现,在亲和互作和非亲和互作反应中PR蛋白质的变化模式相似。对PR基因上游启动子区进行分析,发现存在与抗病相关的顺式作用元件,其中,ARE、HSE、MBS、TC-rich repeats等元件在抗病相关的PR基因上游出现频率较高。【结论】鉴定了在水稻-Xoo互作过程中发生丰度变化的7个PR蛋白质。
- 关明俐窦世娟李雪姣贾霖史佳楠曾祥然贾盟郭美岑刘丽娟李莉云刘国振
- 关键词：水稻白叶枯病抗性反应
- 水稻病程相关PR1家族蛋白质在叶片生长及与白叶枯病菌互作反应中的表达被引量：10
- 2014年
- 病程相关(PR)蛋白质经常被用作抗病反应的分子标记。利用免疫印迹(WB)技术检测了7个PR1家族蛋白质在水稻(Oryza sativa)叶片生长及与白叶枯病菌互作反应过程中的表达,发现6个PR1家族蛋白质在叶片生长中有表达。检测PR1蛋白质在Xa21介导的抗白叶枯病过程中的表达,结果显示PR1#052、PR1#072、PR1#073和PR1#121四个蛋白质在抗病反应后期呈上调或诱导表达,PR1#071则表达下调。进一步比较它们在抗病、感病和对照(Mock)反应中的表达丰度,发现在抗病和感病反应中的变化幅度均明显大于对照反应,推测这些PR蛋白质在水稻-白叶枯病菌互作反应中发挥作用。另外,对PR1基因上游启动子区的cis元件进行了分析。该研究初步揭示了水稻PR1家族蛋白质的表达谱,为进一步了解PR1蛋白质的功能提供了线索。
- 李雪姣范伟牛东东关明俐缪刘杨史佳楠窦世娟魏健刘丽娟李莉云刘国振
- 关键词：水稻免疫印迹白叶枯病菌
- 水稻转录因子OsWRKY68蛋白质的表达特征及其功能特性被引量：7
- 2019年
- [目的]水稻中有近百个WRKY转录因子家族成员,其中很多与生长发育、生物与非生物逆境胁迫应答有关。河北农业大学生命科学学院分子生物学与生物信息学实验室(molecular biology & bioinformatics lab,MBB)前期发现OsWRKY68在水稻接种白叶枯病菌后诱导表达,本研究试图进一步探究 OsWRKY68的功能。[方法]采集水稻TP309不同生长发育时期的组织样品,包括萌发期、幼苗期、分蘖期、孕穗期和开花期的根、茎、叶、叶鞘、叶枕、穗子、花药、颖壳和种子,以及非生物胁迫(4℃、44℃、48℃、淹、NaCl、PEG、恒光和恒暗)和激素处理(脱落酸、茉莉酸甲酯、水杨酸和乙烯利)的叶片,提取总蛋白质,用水稻 OsWRKY68 蛋白质特异抗体,通过免疫印迹(western blot,WB)技术系统调查OsWRKY68蛋白质在水稻正常发育过程中不同时期、不同组织、非生物胁迫及激素处理条件下的表达特征。构建 RNAi 载体,通过农杆菌介导的方法转化水稻 TP309,对转基因植株进行PCR和WB鉴定,观察OsWRKY68 RNAi 转基因植株的表型并测量其株高、分蘖数、穗长、小穗数和结实率等性状。[结果]调查OsWRKY68蛋白质的表达丰度,发现OsWRKY68蛋白质在水稻正常生长发育过程中基本呈组成型表达,且在大部分组织中表达丰度差异倍数不大,但在开花期的花药中OsWRKY68表达量高于成熟穗、穗轴和颖壳;在分蘖期和孕穗期的叶鞘中不表达,仅在开花期的叶鞘中表达;在孕穗期的幼穗中,随着幼穗长度的增加其表达丰度逐渐降低。调查水稻非生物胁迫和激素处理后OsWRKY68蛋白质的表达特征,发现盐胁迫后OsWRKY68蛋白质的表达丰度随时间延长持续下降,恒光处理后OsWRKY68蛋白质表达量持续上升,3 d 时明显出现一条分子质量较大的条带(记作 OsWRKY68+),且表达量逐渐增加,茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)和乙烯利(ethephon,ET)处理后同样也呈现 OsWRKY68+蛋白质丰度
- 陈悦王田幸子杨烁张彤马金姣燕高伟刘玉晴周艳史佳楠兰金苹魏健窦世娟刘丽娟杨明李莉云刘国振
- 关键词：水稻WRKY转录因子免疫印迹RNA干扰
- 8个WRKY转录因子在水稻叶片生长和抗病过程中的表达分析被引量：3
- 2014年
- WRKY是植物体内最大的转录因子家族之一,其成员在植物生长发育和抗逆过程中发挥重要作用。为了解水稻WRKY的功能,本研究利用蛋白质免疫印迹(w estern blotting,WB)技术,检测了8个WRKY转录因子在水稻叶片生长和Xa21介导的抗白叶枯病过程中的表达丰度变化。结果表明:OsWRKY12、43、55和86在苗期表达量较低,随叶片的生长表达逐步增加;OsWRKY50和84在苗期叶片中的表达量相对较高,成熟期下降;未检测到OsWRKY40/64和52在叶片中的表达。在Xa21介导的白叶枯病抗性反应中,OsWRKY40/64、50和52受白叶枯病菌诱导表达,OsWRKY84受侵染后表达量上调,OsWRKY12、43、55和86在抗病过程中没有检测到表达丰度的变化。进一步比较这些转录因子在抗、感和对照(Mock)反应中的表达,发现抗、感反应间蛋白质的表达变化是相似的。研究结果提示:OsWRKY12、43、55和86可能在叶片正常生长中发挥作用;OsWRKY40/64和52可能在水稻-白叶枯病菌互作过程中发挥作用;OsWRKY50和84则在叶片生长和抗白叶枯病过程中都有一定的功能。
- 史佳楠李莉云徐文静关明俐李雪姣牛东东兰金苹窦世娟刘丽娟刘国振
- 关键词：WRKY水稻免疫印迹白叶枯病转录因子
- 蛋白质印迹技术升级版（WB 2.0）的概念与设想被引量：4
- 2019年
- 蛋白质印迹技术(Western blot,WB)基于抗体的特异性了解蛋白质的表达特征.该技术已经成为生命科学基础与应用研究的最常用技术之一.但目前WB手工操作多、实验流程难规范、一般只能用于同一WB分析内不同样品中目标蛋白质丰度的定性或相对定量,难以在不同实验室间进行WB数据比较.本文简要回顾了WB发展的历程,提出了升级版蛋白质印迹(WB 2.0)的概念,介绍了包括数字化、标准化、自动化、微量化、通量化以及基于内参的归一化建立数据库等为核心内容的设想.展望了WB 2.0的应用前景,提出在WB 2.0技术大规模应用的基础上,逐步建立开放的蛋白质表达特征数据库,成为继基因组、转录组等数据库之后生命科学领域的又一支撑平台.
- 张柳史佳楠刘国振
- 关键词：蛋白质印迹抗体蛋白质组学
- 水稻几丁质酶基因的转录与表达特征被引量：7
- 2014年
- 几丁质酶与植物的生长发育、抗逆和防御反应相关。水稻PR3家族几丁质酶编码基因有19个成员,本文分析其转录特征,了解到有些基因属于组成型转录,有些基因属于组织特异型转录,分析几丁质酶蛋白质的结构域,并对其进行聚类和亚家族分类。利用免疫印迹技术分析几丁质酶蛋白质的表达谱,发现CHIT5的表达量在水稻叶片生长过程中下调,而CHIT6、CHIT14、CHITC1和CHITC2的表达量上调。在水稻与白叶枯病菌(Xoo)的不亲和反应中,CHIT1、CHIT2、CHIT5、CHIT6、CHIT10、CHIT15和CHIT16的表达量上调,CHIT14、CHITC1和CHITC2的表达下调。进一步比较几丁质酶蛋白质在水稻-Xoo不同互作反应中的表达,发现其在亲和及不亲和反应中的表达模式类似,但一般在亲和反应中强度变化较大。此外,CHIT6蛋白质在对照反应中的表达量上调,提示CHIT6的表达受创伤的诱导。本文比较系统地揭示了水稻PR3家族几丁质酶编码基因的转录和蛋白质表达特征,为其功能解析提供了线索。
- 范伟李雪姣关明俐缪刘杨史佳楠窦世娟刘丽娟李莉云刘国振
- 关键词：水稻几丁质酶聚类分析白叶枯病菌转录免疫印迹
