刘红霞
- 作品数：11 被引量：44H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡毒害艾美耳球虫LZ株MIC5基因的重组表达及其表达产物的抗原性分析被引量：6
- 2008年
- 根据已发表的鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)微线蛋白5(Microneme protein 5,MIC-5)基因的核苷酸序列设计引物,以毒害艾美耳球虫(E.necatrix)DNA为模板,利用PCR方法扩增出EnMIC-5部分基因片段。将基因片段与pMD18-T simple载体连接,重组质粒测序结果表明EnMIC-5基因大小为1 470 bp,编码490个氨基酸。EnMIC-5与pET-28a(+)载体构建重组表达质粒pET-EnMIC-5,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE检测,表达产物为相对分子质量约57.5 ku的融合蛋白。Western-blot分析结果表明表达蛋白可被鸡感染E.necatrix阳性血清识别。用重组蛋白免疫昆明鼠,一免后15 d即可检测到相应抗体,且抗体在三免后40 d仍维持较高水平,证实重组蛋白具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体。
- 刘红霞贾万忠郭爱疆张少华闫鸿斌岳城才学鹏
- 关键词：毒害艾美耳球虫基因克隆免疫原性
- 重叠延伸PCR法扩增猪囊尾蚴AgB基因及其在BHK-21细胞中的表达被引量：4
- 2009年
- 【目的】克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达。【方法】采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列。采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构建到真核表达载体pVAX1,将酶切、PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染BHK-21细胞。通过SDS-PAGE、Western-blotting、间接免疫荧光法,检测细胞中B抗原的表达。【结果】琼脂糖凝胶电泳显示扩增的不同片段大小分别与预期的相同。重组表达载体转染BHK细胞后有荧光出现。表达的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。【结论】通过重叠延伸PCR法成功扩增了AgB基因全长并构建到真核表达载体,目的蛋白在BHK-21细胞中表达。
- 郭爱疆才学鹏贾万忠房永祥乔军刘红霞潘小梅景志忠
- 关键词：猪囊尾蚴重叠延伸PCR真核表达BHK-21
- 猪囊尾蚴rTS-CC18蛋白的原核表达、纯化及其抗原性分析被引量：1
- 2009年
- 目的制备猪带绦虫囊尾蚴rTS-CC18抗原并对其抗原性进行鉴定,为建立猪囊尾蚴检测技术提供诊断抗原。方法用PCR方法从重组质粒pGEM-TS-CC18中扩增TS-CC18编码基因,构建pET30a-TS-CC18重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导筛选高表达量菌株。采用Ni-FF亲和层析方法提纯表达蛋白。Western blotting及间接ELISA检测重组蛋白的反应活性。结果Tricine-SDS-PAGE表明,重组菌经0.5 mmol/LIPTG诱导6 h,可稳定表达可溶性rTS-CC18蛋白,其相对分子质量约16×103。Western blotting检测诱导的蛋白能与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应;间接ELISA检测血清抗体结果表明:纯化的rTS-CC18蛋白与全囊虫抗原的相对特异性达100.0%,相对敏感性达84.0%,总符合率为94.3%。结论成功制备了猪囊尾蚴rTS-CC18抗原,其特异性、敏感性及稳定性良好,对诊断猪囊尾蚴病及开发诊断制剂具有潜在应用价值。
- 张少华才学鹏贾万忠骆学农刘红霞赵松波景志忠
- 关键词：猪囊尾蚴原核表达纯化抗原性
- 香菇β-葡聚糖对雏鸡脾和胸腺淋巴细胞以及腹腔巨噬细胞一氧化氮产生的影响被引量：2
- 2007年
- 为探讨香菇β-葡聚糖(lentinan,LTN)对雏鸡免疫增强作用的机理,从体内和体外2种途径研究了LTN对雏鸡脾和胸腺淋巴细胞以及腹腔巨噬细胞NO产生的影响。体内试验的4组21日龄雏鸡分别腹腔注射1 g/L的LTN、10 g/L的LTN、20 g/L的硫乙醇酸钠和生理盐水各2 mL,3 d后测脾和胸腺淋巴细胞以及腹腔巨噬细胞产生NO的量;分别以50、100、200、400 mg/L的LTN刺激经硫乙醇酸钠活化的巨噬细胞,测定其NO的生成量。结果显示,1 g/L和10 g/L的LTN均能刺激体内脾和胸腺淋巴细胞以及腹腔巨噬细胞产生NO;不同浓度的LTN均能使体外巨噬细胞NO的生成量增加。证实,适度促进免疫细胞NO的生成可能是LTN的主要免疫作用机理之一。
- 李万坤闫鸿斌田广孚才学鹏刘红霞张冬峰景志忠郭福存赵兴绪
- 关键词：淋巴细胞巨噬细胞一氧化氮雏鸡
- 重组CE18蛋白在绵羊绦虫蚴病诊断上的应用被引量：6
- 2009年
- 【目的】探讨细粒棘球蚴CE18重组蛋白作为绦虫蚴病免疫诊断抗原的应用价值,为筛选绦虫蚴病血清学诊断抗原提供依据。【方法】应用棘球蚴CE18重组抗原建立间接ELISA方法,分别对18份脑多头蚴、15份细颈囊尾蚴、19份棘球蚴感染绵羊血清及194份棘球蚴病疫区绵羊血清和13份健康羊血清进行检测,通过显著性差异分析评价CE18蛋白作为诊断抗原的意义。同时,应用生物学软件对CE18抗原蛋白同源序列进行分析,进一步从分子水平上提示CE18蛋白作为绦虫蚴病诊断抗原的依据。【结果】序列分析表明棘球蚴CE18蛋白基因为多种绦虫如泡状带绦虫、多头带绦虫、猪带绦虫等的共有序列,其蛋白质氨基酸序列相似性很高,不同种属之间高达99%,从分子水平上表明CE18蛋白为带绦虫蚴共同抗原成分之一。重组抗原CE18-ELISA方法检测绵羊血清抗体水平显示:脑多头蚴病、细颈囊尾蚴病、棘球蚴病和棘球蚴病疫区血清的阳性率分别为38.89%、73.33%、100%和76.14%,而对照组血清为阴性反应。【结论】CE18重组蛋白可作为绵羊棘球蚴病和细颈囊尾蚴病血清学诊断抗原,用于畜群活体检疫初筛试验。
- 刘红霞才学鹏张少华郭爱疆闫鸿斌苟惠天付宝权贾万忠
- 关键词：绵羊抗体免疫诊断
- 猪囊尾蚴TS-CC18蛋白的原核表达及其血清学检测效果评价
- 目的制备猪带绦虫囊尾蚴TS-CC18重组抗原并对其生物学活性进行鉴定,为建立猪囊尾蚴检测技术提供诊断抗原。方法PCR扩增获得TS-CC18编码基因,构建pET30a-TS-CC18重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE...
- 张少华才学鹏贾万忠骆学农郑亚东景志忠刘红霞赵松波
- 关键词：猪囊尾蚴ELISA检测
- 文献传递
- 细粒棘球绦虫重组EG95抗原在绵羊绦虫蚴病血清抗体检测中的应用被引量：5
- 2012年
- 为了分析评价细粒棘球绦虫重组蛋白EG95(rEG95)在血清抗体检测上的效果,以细粒棘球绦虫EG95重组质粒pGEM-EG95为模板,经PCR扩增后将目的片段亚克隆至pET-28a(+),构建重组表达载体pET-EG95,在大肠杆菌BL21中表达,SDS-PAGE分离和电洗脱纯化重组表达产物rEG95。建立重组蛋白间接ELISA方法,检测绵羊带绦虫蚴病血清抗体水平。结果表明,表达产物经SDS-PAGE测定分子质量为21ku左右。该蛋白可被棘球蚴病阳性血清特异性识别,表明该表达产物具有反应原性。应用该重组蛋白间接ELISA检测18份脑多头蚴、15份细颈囊尾蚴、20份棘球蚴感染绵羊血清,24份疫苗抗原rEG95免疫羊血清和来自棘球蚴病疫区的179份绵羊血清,其阳性检出率分别是66.67%、80.00%、100%、91.67%和58.2%,而14份健康羊血清反应为阴性,组间差异有一定统计学意义(P<0.05)。表明EG95蛋白可作为绵羊带绦虫蚴病共同保护性抗原和诊断抗原而加以应用。
- 刘红霞张德祯闫鸿斌娄忠子倪兴维苟惠天贾万忠
- 关键词：细粒棘球绦虫血清抗体酶联免疫吸附试验
- 6种鸡艾美耳球虫兰州株的致病性研究被引量：5
- 2009年
- 在试验条件下,测定了鸡艾美耳球虫兰州株的毒力,为进行鸡球虫病疫苗免疫和药物防治效果评价试验等研究提供攻虫剂量的选择依据。试验设空白对照组(NC)、不同剂量感染组1组～8组,共9个组,每组20只鸡。结果显示:(1)NC组、第1组～第7组(第8组全部死亡)相对增重率依次为100%、77.23%、77.02%、76.42%、72.86%、63.91%、67.19%和42.06%,其中NC组相对增重率极显著高于所有感染组(p<0.01);第1组和第2组显著高于第5组和第6组(p<0.05),极显著高于第7组间(p<0.01);第7组极显著低于其他试验组(p<0.01)。(2)空白对照组、第1组～第7组各组料肉比依次为2.01、2.21、2.24、2.29、2.33、2.78、2.94和4.06,呈现出剂量依赖关系,其中第7组极显著高于其他各组(p<0.01);第6组和第5组显著大于NC组和第1组～第5组(p<0.05)。(3)攻虫后第8d,每组剖检5只鸡,各肠段平均病变记分各组依次为0、1.79、2.33、2.54、2.63、2.5、2.67和2.8。(4)感染后排卵囊高峰期间,各组平均每克粪便中卵囊数(OPG)值分别为0、3.05×104、2.35×104、32.20×104、62.23×104、60.45×104、103.51×104和150.11×104(第8组除外)。(5)各组死亡率依次为0、5.0%、5.0%、15%、25%、40.0%、45.0%、95%和100%。结果表明:本试验所选用虫株均具有较强的毒力,每只鸡感染6个虫种每个虫种1×104个孢子化卵囊时,感染鸡生长严重受阻;感染剂量为6个虫种每个虫种2×105/只时,半数感染鸡死亡;6个虫种每个虫种3×105/只的感染剂量可导致全部感染鸡死亡,因此,攻虫试验时选择6个虫种每个虫种1×104/只～1×105/只的剂量为宜。
- 闫鸿斌田广孚贾万忠刘红霞张冬峰才学鹏
- 关键词：艾美耳球虫致病力
- 香菇葡聚糖对雏鸡脾和胸腺淋巴细胞以及腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响
- 为探讨香菇β-葡聚糖(lentinan,LTN)对雏鸡的免疫增强调节机理,本试验从体内和体外两种刺激途径研究了 LTN 对雏鸡脾和胸腺淋巴细胞以及腹腔巨噬细胞产生一氧化氮(NO)的影响。体内试验：4组21日龄雏鸡分别腹腔...
- 李万坤闫鸿斌田广孚才学鹏刘红霞张冬峰贾万忠景志忠郭福存赵兴绪
- 关键词：淋巴细胞巨噬细胞一氧化氮
- 文献传递
- 鸡毒害艾美耳球虫MIC5基因在大肠杆菌的重组表达产物抗原性分析
- 从鸡毒害艾美耳球虫孢子化卵囊中提取基因组DNA,用Oligo6.0软件设计EnMIC-5基因特异性引物,通过PCR扩增出1 470 bp的片段,扩增产物再连接到pMD18-T载体中,经PCR扩增、酶切鉴定和测序分析后证明...
- 刘红霞
- 关键词：毒害艾美耳球虫基因克隆免疫原性
- 文献传递
