刘国生
- 作品数：69 被引量：374H指数：9
- 供职机构：河南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省教育厅自然科学基金河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学化学工程环境科学与工程更多>>
- 革兰氏阴性细菌快速检定的研究
- 刘国生
- 关键词：革兰氏阴性细菌
- Geobacillus sp.POT5 α-淀粉酶基因的克隆及表达被引量：3
- 2007年
- 从高温环境土壤中分离到1株能在75℃生长并产生α-淀粉酶的菌株(POT5),扩增了其16Sr DNA核苷酸序列,序列分析表明该菌属于Geobacillus属.根据该属全基因序列测定数据中推定的α-淀粉酶基因,利用PCR方法从G.sp.POT5基因组中扩增得到该菌α-淀粉酶基因(amyP).序列分析表明该基因全长1.545 kb、G+C含量51.33%,编码514个氨基酸.构建重组表达质粒pET22b(+)-amyP,转化Escherichia coliBL21系统,表达产物经SDS-PAGE分析、活性染色及淀粉酶活力分析,表明amyP基因得到了表达,且产物具有生物学活性.
- 杨灵侯瑛余霖霖刘国生张志芳
- 关键词：GEOBACILLUS淀粉酶基因表达
- N离子束注入与DES复合诱变选育腺苷高产菌株被引量：5
- 2017年
- 为了获得腺苷高产菌株,以肌苷产生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HSD1206(Ade-、Thi-、SGr)为出发菌株,通过硫酸二乙酯(DES)处理、N离子束注入进行单因子和复合诱变。参照菌种致死率曲线,确定N离子束注入250 s与DES处理10 min为最佳诱变时间。经过多轮诱变和筛选,获得了黄嘌呤、硫胺素、组氨酸三重缺陷型,腺嘌呤脱氨酶活性缺失及磺胺胍抗性菌株DI4-24和DI4-182,其遗传标记为Xan-、Thi-、His-、Deam-、SGr,连续传代后性状稳定,在优化的发酵培养基中发酵后腺苷产量可分别达到18.56 g/L和17.13 g/L。由此证明,通过物理、化学复合诱变,阻断枯草芽孢杆菌营养缺陷型菌株产肌苷途径,打通合成腺苷途径的诱变思路在实验室环境下是可行的。
- 刘国生李金鑫刘磊谷艳昌许航
- 关键词：腺苷离子束注入硫酸二乙酯复合诱变
- 用于阿糖鸟苷合成的腺苷脱氨酶在大肠杆菌中的表达
- 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa TX16)具有腺苷脱氨酶活性,可以催化2,6-二氨基嘌呤核苷脱氨实现阿糖鸟苷的合成,但铜绿假单胞菌TX16是一种条件致病菌,直接用于工业生产存在一定风险.将铜绿...
- 刘国生黎梦刘磊常利草邢善涛
- 关键词：铜绿假单胞菌腺苷脱氨酶基因表达
- 一种虫草子实体的人工培养(简报)被引量：1
- 2001年
- 分离的虫草无性型在马丁和 3种大米培养基上均可形成子实体 ,子实体具明显的向光性 ;培养基中添加蛋白胨和酵母浸膏 ,子实体分化多而快 ;较低的温度 (15～2 0℃ )有利于子实体分化 ;培养基中添加虫草菌菌丝体的提取液和覆盖松针 ,促进子实体形成 。
- 李用芳刘国生李景原何方淑李大卫
- 关键词：虫草子实体培养基
- 腺苷高产菌株Bacillus subtilis DI4-24退化的遗传机制与控制研究被引量：3
- 2017年
- 经人工诱变获得的腺苷高产菌株Bacillus subtilis DI4-24很容易发生退化,通过分析回变菌株的遗传性状和考察理化条件对回复突变的影响,研究退化的机制,找到控制的方法。在选择培养基上筛选回变菌株,生长谱法分析其遗传型;于743 nm条件下分光光度法测定回复突变细胞内积累的特有红色物质,研究各理化条件对回复突变的影响。退化原因是由于组氨酸缺陷型发生回复突变所致,突变菌株腺苷产量大幅度下降;降低保藏温度、减少传代次数可以有效地减缓菌种的衰退;种子制备过程中适当降低培养温度2℃~3℃、缩短培养时间(8 h)、降低培养基pH至中性偏酸性(6.5)以及加入胡萝卜素、叶酸等物质都可以有效降低回变率,在此条件下制备的种子生产性能得到提高,其腺苷产量可比对照提高9%。
- 任韶霞刘磊常利草李金鑫刘国生
- 关键词：腺苷菌种退化回复突变
- 一种简易有效的提取真菌DNA化学改良方法被引量：5
- 2009年
- [目的]探索适合真菌基因组DNA提取的有效方法。[方法]以酵母菌(Hansenulasp.HS07A)和青霉菌(Penicilliumsp.HS07B)为供试菌株,分别采用煮沸裂解法、石英砂研磨法、研磨和反复研磨冻融法和化学改良法提取其基因组DNA,比较这4种方法的提取效果。[结果]化学改良法提取基因组DNA,除去了机械破壁过程,减少了机械力对DNA造成的破坏,运用阴离子去污剂SDS提取DNA安全、价廉,能有效、完整地提取高质量的基因组DNA,凝胶电泳条带清晰、无弥散,以此基因组DNA作为目的片段的PCR扩增模板,扩增效果优于改良前的方法,并且这种方法也适合多种真菌和细菌基因组DNA的提取。[结论]化学改良法是提取真菌基因组DNA的有效方法。
- 谷艳昌侯瑛王海磊刘国生王振宇吴飞燕段佩玲
- 关键词：真菌基因组DNA
- 根瘤菌吸氢基因种间转移的研究被引量：1
- 2007年
- 通过三亲本杂交将花生根瘤菌吸氢基因的重组质粒pZ55(Tcr)转入野生型的大豆、绿豆等根瘤菌菌株(Hup-、Apr),研究结果表明,在自生条件下,诱导大豆和绿豆根瘤菌吸氢活性的表达,实现了花生根瘤菌吸氢基因的种间转移。在豌豆和四季豆根瘤菌中却不能表达吸氢活性,提示外源吸氢基因的表达受到受体菌株的调控。
- 王振宇郭晓芳王海磊刘国生
- 关键词：根瘤菌
- 纸色谱-分光光度法测定生物转化体系中脱氧腺苷含量被引量：1
- 2012年
- 目的建立纸色谱-分光光度法测定生物转化液中脱氧腺苷(dAR)含量。方法用不同极性的展开剂进行纸色谱从混合物中分离dAR,分光光度法测定分离的dAR浓度。结果测试了4种展开剂对dAR的分离效果,发现用展开剂正丁醇-异丙醇-氨水-水(3∶3∶2∶2)一次色谱可将dAR与其它成分分离。将分离并重新溶解的dAR在258 nm处测定其吸光度值,根据标准曲线即可计算出转化反应液中的产物浓度。结论该法测定结果与高效液相色谱法测定结果一致,是一种简易有效的快速测定生物转化体系中dAR含量的方法。
- 刘国生王建琨邢善涛王海磊陈琳王玉娟
- 关键词：生物转化纸色谱展开剂分光光度法
- 纤维素酶CMC糖化力测定方法的改进被引量：18
- 1999年
- 本文研究和分析了３，５—二硝基水杨酸（ＤＮＳ）法测定纤维素酶羧纤维素（ＣＭＣ）糖化力的实验条件，如：波长、温度、ｐＨ、酶促反应时间、ＤＮＳ显色时间等。实验表明：在５０℃、ｐＨ４６条件下酶促反应时间５ｍｉｎ，ＤＮＳ显色５ｍｉｎ，于４９０ｎｍ处测定ＯＤ值比较适宜，从而简化了实验操作，便于在生产中应用。
- 刘国生王琳李学梅侯进怀刘翠然
- 关键词：DNS法纤维素酶发酵饲料
