冯广达
- 作品数：37 被引量：184H指数：7
- 供职机构：广东省微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：环境科学与工程生物学农业科学医药卫生更多>>
- 一个硫链丝菌素抗性基因标记、用于DNA导入链霉菌的pSET152衍生载体(英文)被引量：1
- 2013年
- 【目的】在链霉菌PCR-targeting系统中,安普霉素是使用最普遍的选择标记。然而在基因敲除阶段利用安普霉素选择标记后,在遗传补偿时就不能使用相同选择标记的许多重要载体,如pSET152。这常给研究带来不便,特别是当研究对象基因如一些调控基因,其生理功能对剂量敏感时更是如此。基于此,拟以pSET152为基础构建一个不以安普霉素为抗性标记的通用整合型载体。【方法】利用融合PCR和λRed重组等方法构建载体。【结果】来自pHZ1358上的硫链丝菌素抗性基因tsr和来自pCR2.1的氨苄抗性基因bla以"tsr在前bla在后"的次序融合。融合后的抗性片段替换pSET152上的安普霉素抗性基因aac(3)-IV,从而获得新载体pGIM6626。利用该载体将删除的榴菌素最小聚酮合酶基因重新导入到Streptomyces vietnamensis突变株中,该突变株恢复了产榴菌素的能力,证实了该载体的有效性。【结论】构建了一个新的pSET152衍生载体pGIM6626。该载体包含氨苄和硫链丝菌素抗性基因,分别在大肠杆菌和链霉菌中作为选择标记。pGIM6626与pSET152用途相似,但前者由于与PCR-targeting系统不存在选择标记的冲突而与该系统更兼容。
- 邓名荣郭俊冯广达朱红惠
- 关键词：链霉菌
- 用于PCR扩增的细菌DNA提取方法比较被引量：81
- 2013年
- 以14个属的革兰阴性菌和阳性菌为研究对象,采用16S rRNA基因PCR扩增对4种细菌DNA提取法进行了比较.结果表明,对细菌DNA的提取效果排序,依次为冻融法、煮沸法、碱解法、ROSE法.冻融法效果最好,具有成本低、省时省力、无污染等优点,但仍存在少数革兰阳性菌DNA提取失败的现象.因此,在菌株较多的情况下可先采用冻融法提取细菌DNA,对少数提取失败的菌株,弃冻融法得到的上清液,再以SDS法、CTAB法或DNA试剂盒的提取进行补充.采用该操作流程既能节省成本和时间,又减少了提取过程中有机废弃物的产生.
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- 关键词：DNA提取RRNA基因PCR
- 利用PCR-DGGE技术研究越南不同植被根际土壤中粘细菌的多样性
- 粘细菌是一类可滑行运动的单细胞革兰氏阴性杆菌,具有独特的复杂多细胞结构。传统上研究粘细菌多样性主要采用平板分离法,既耗时又费力,而借助于分子生物学手段不仅可以快速了解样品中可培养粘细菌的多样性,而且可以对不可培养的粘细菌...
- 原红娟谭志远冯广达谢小林薛东朱红惠
- 文献传递
- 利用PCR-DGGE溯源典型农村塘坝饮用水中的污染被引量：7
- 2011年
- 以华南地区典型农村塘坝饮用水为研究对象,采用基于大肠杆菌的两种特异性基因(β-D-葡萄糖苷酶编码基因uidA和膜外周磷通道蛋白编码基因phoE)的群体差异分析(PCR-DGGE),对饮用水中的污染情况进行了溯源研究.结果表明,采用富集培养的混合菌体DNA作为模板扩增大肠杆菌特异性基因更加实用.uidA和phoE的引物均具有较强的特异性.对Genebank中已有的两种特异性基因序列的分析结果表明,phoE的平均变异程度约为uidA的2倍,基于phoE的PCR-DGGE分析技术能够更好地反映样品之间的联系,适合在微生物溯源中应用.研究还表明,塘坝饮用水及其周围环境污染呈现面源特征,养殖废弃物是水体污染的主要来源.
- 冯广达邓名荣郭俊王东东朱红惠张曦梁浩亮朱昌雄
- 关键词：PCR-DGGE
- 微生物对煤系固体废弃物淋滤液污染性影响被引量：4
- 2009年
- 煤矸石和粉煤灰是煤矿区的两种主要废弃物,它们不仅占用大量的土地,同时也对矿区环境产生了严重污染。分别接种氧化硫硫杆菌和解磷细菌于煤矸石和粉煤灰中,通过柱状淋滤试验研究微生物对两种固体废弃物淋滤液污染性的影响。结果表明:煤矸石中添加氧化硫硫杆菌能显著脱除煤矸石中的硫,同时淋滤液中也生成了大量的H+和铁离子,使淋滤液中硫酸根和磷酸根离子浓度显著增大,超出了GB3838-2002《地表水环境质量标准》的指标。粉煤灰中添加解磷菌能显著提高淋滤液中的磷含量和电导率,但对淋滤液的pH、SO42-和铁离子影响不明显。氧化硫硫杆菌和解磷细菌对煤矸石和粉煤灰混合工艺处理效果较好,粉煤灰在一定程度上降低了硫、磷和铁的污染性。
- 毕银丽冯广达刘榕榕张翠青
- 关键词：氧化硫硫杆菌解磷细菌煤矸石粉煤灰污染性
- 废弃铅锌矿石和钨矿砂中可培养细菌多样性分析被引量：1
- 2018年
- 为了了解废弃铅锌矿石和钨矿砂中可培养细菌的多样性,发掘其中的微生物新资源,采用3种培养基(R2A、无磷R2A、无磷R2A+Cd^(2+))分别对其中的可培养细菌进行分离纯化和培养。再通过16S rRNA基因测序获取相关的分类学信息,并进行系统进化分析。从2种材料中共分离到可培养细菌152株。其中,废弃铅锌矿石中的可培养细菌涵盖了5个门、7个分支,分属于Alphaproteobacteria、Betaproteobacteria、Gammaproteobacteria、Deinococcus-Thermus、Actinobacteria、Bacteroidetes和Firmicutes,以Massilia、Methylobacterium、Deinococcus和Sphingomonas为主要类群;而钨矿砂中的可培养细菌涵盖了3个门、4个分支,分属于Alphaproteobacteria、Betaproteobacteria、Actinobacteria和Firmicutes,以Methylobacterium、Massilia、Ralstonia和Microbacterium为主要类群。废弃铅锌矿石中可培养细菌的多样性和新分类单元发现率均大于钨矿砂,且两者的可培养细菌类群组成存在较大差异。此外,向培养基中添加重金属Cd^(2+)降低了可培养细菌的多样性。研究分离到的Cd^(2+)耐受菌株主要属于3个属:Methylobacterium、Herbaspirillum和Ralstonia,其能耐受2 mmol/L Cd^(2+),是金属尾矿中重金属耐受菌的优势种群。研究结果为金属尾矿中微生物新资源的深入发掘提供了依据。
- 邹卫玲冯广达李华平朱红惠
- 关键词：可培养细菌RRNA基因
- 一种根围金黄杆菌及其应用
- 本发明公开了一种根围金黄杆菌及其应用。本发明分离得到了一种能够产纤维素酶的新的细菌——根围金黄杆菌(Chryseobacterium rhizosphaerae)GIMN1.005，该菌于2009年10月20日保藏于中国...
- 朱红惠黎志坤羊宋贞冯广达王永红陈美标
- 一种产二甲基二硫醚(DMDS)的恶臭马赛菌及其应用
- 本发明公开了一种恶臭马赛菌及其应用。本发明的恶臭马赛菌(Massilia putida)6NM‑7是一个微生物新物种，已于2015年7月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：中国北京...
- 冯广达朱红惠羊宋贞王永红李燕旋杨瑞恒
- 文献传递
- 一株羽毛降解菌的分离与鉴定被引量：1
- 2013年
- 【目的】从土壤中分离并鉴定羽毛降解菌,测定其生长最适温度及起始pH,并观察酶活动态。【方法】采用系列稀释法和选择培养基法筛选目的菌株,基于16S rRNA基因序列及Biolog方法鉴定其分类地位,利用全自动生长曲线分析仪监测菌株的最适生长条件,并通过测定蛋白水解活性观察其酶活动态。【结果】从混合羽毛的土壤样品中筛选到一株羽毛降解菌,命名为菌株GIMN1.015,初步判定该菌株属于芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)。最适生长pH为9.0,温度为30°C。蛋白水解活性最高值出现在培养后96 h。【结论】菌株GIMN1.015在利用羽毛角蛋白资源中具有潜在的应用价值。这是芽孢八叠球菌在羽毛降解方面的首次报道。
- 顾振红谢小林刘晓迪冯广达朱红惠姚青
- 一种用于粘细菌菌体规模制备的液体发酵方法
- 本发明公开一种用于粘细菌菌体规模制备的液体发酵方法。本发明通过粘细菌固体种子的培养、液体培养基发酵培养，菌丝体过滤等工艺环节来获取大量粘细菌菌体。本发明利用简单易行的平板培养基便可培养出生长能力强、浓度高的粘细菌发酵种子...
- 白志强朱红惠冯广达李燕璇陆雪影
- 文献传递
