冯丽丽
- 作品数：22 被引量：49H指数：5
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- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项河南省科技攻关计划更多>>
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- PRRSV ADE途径感染对猪肺泡巨噬细胞TNF-α的表达调控
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒/(PRRSV/)可引起母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病。PRRSV在世界范围内流行,造成巨大的经济损失。抗体依赖的感染增强作用/(ADE/)是PRRSV的一个重要免疫学特征,同时也是PRRS防控中遇到...
- 冯丽丽
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒TNF-Α荧光定量PCR
- 文献传递
- 脂多糖对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β及TNF-α的影响被引量：12
- 2009年
- 研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞，收集细胞，提取RNA，用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平；同时收集培养上清，用ELISA检测试剂盒检测IL-1β、TNF-α蛋白表达水平。结果表明，脂多糖浓度（1-1000ng／mL）对IL-1β、TNF-α影响显著（P％0．05）；刺激时间（1-24h）对IL-1β、TNF-α影响显著（P〈0．05），且蛋白的表达水平迟于mRNA的表达水平。脂多糖诱导猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α具有剂量、时间依赖性。
- 冯丽丽张丽萍张改平乔松林田晓辉万博王秋霞
- 关键词：脂多糖猪肺泡巨噬细胞白细胞介素-1Β肿瘤坏死因子-Α
- 猪乙脑病毒BHK-21细胞传代株BSF.ZZ-1-p60和BSF.ZZ-3-p60的全基因组序列分析
- 2016年
- 为研究猪源乙脑病毒分离株基因遗传稳定性,对猪源乙脑病毒分离株BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3在BHK-21细胞上连续传代60次后的病毒全基因组进行序列测定及分析。结果表明,BSF.ZZ-1-p60、BSF.ZZ-3-p60基因组全长均与各自的亲本毒株BSF.ZZ-1、BSF.ZZ-3一致,均为10 977 nt,在2个病毒基因组的10 701 nt位点处均插入1个碱基G。与亲本毒株相比,2个细胞传代毒株的病毒基因组经连续传代后趋于稳定,均有10个位点发生氨基酸突变,这些突变主要集中在E蛋白区域。核苷酸序列同源性比对分析发现,与其他JEV参考毒株相比,BSF.ZZ-1-p60和BSF.ZZ-3-p60与弱毒疫苗株SA14-14-2的核苷酸序列同源性较高,分别为99.6%和95.9%,其氨基酸序列与猪源野毒分离株SH0601和HW的氨基酸序列同源性较高,分别为98.2%、86.4%和98.3%、86.5%。
- 滕蔓胡博冯丽丽樊剑鸣郅玉宝李秀杰邓瑞广罗俊
- 关键词：乙脑病毒BHK-21细胞病毒基因组
- 乙脑病毒猪源分离株CSF.XZ-2D感染BHK-21细胞毒的浓缩及纯化
- 2015年
- 研究了日本流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）猪源分离株CSF.XZ-2D感染的BHK-21细胞培养物中JEV的浓缩及纯化方法,对浓缩及纯化后的病毒TCID_（50）效价分别进行测定。结果表明,经差速离心后病毒液在4℃条件下分别以30 000 r/min、40 000 r/min、50 000r/min、60 000 r/min超速离心3 h,其中50 000 r/min超速离心可将绝大部分JEV病毒粒子充分沉淀至离心管底部,浓缩效果最佳;病毒沉淀用PBS重悬后进行不连续蔗糖密度梯度离心,病毒粒子主要集中在35%~50%的区带蔗糖层。
- 滕蔓冯丽丽罗俊樊剑鸣王方雨郅玉宝李秀杰邓瑞广张改平
- 关键词：乙脑病毒BHK-21细胞纯化
- H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的表达及纯化被引量：4
- 2008年
- 参考GenBank上发表的H5亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)基因序列设计引物,PCR扩增NA基因,再将其克隆到原核表达载体pET-32a中,用E.coliBL21(DE3)原核表达,SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定。Western-blot结果表明,表达产物具有免疫学活性,蛋白的分子量约为61 kDa,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理,表达蛋白能与H5亚型AIV阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。ELISA检测结果表明,用此纯化蛋白作为包被抗原检测H5N1亚型AIV神经氨酸酶抗体具有良好的灵敏性。
- 张改平李清州郝惠芳周玲王丽杨苏珍罗俊冯丽丽
- 关键词：禽流感病毒H5亚型
- 猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h蛋白原核表达条件的优化
- 2008年
- 为了提高猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ES Ag)M13h蛋白基因在大肠杆菌中的表达量,试验研究了培养基、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对pET32a-M13h融合蛋白表达量的影响。结果:使用TB培养基于37℃培养3 h后,采用终浓度为0.4 mmol/L的IPTG在37℃、100 r/min诱导培养4小时时,pET32a-M13h融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-M13h融合蛋白的分子质量与预计大小一致,约为30 ku;Western-blot检测结果表明pET32a-M13h融合蛋白能与猪囊尾蚴多克隆抗体发生特异性反应。
- 王秋霞鲁琨张改平宁长申赵光辉张丽萍冯丽丽
- 关键词：排泄分泌抗原原核表达
- 用于制备副猪嗜血杆菌疫苗的组合菌株、八价灭活疫苗及其应用
- 本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌血清1型、2型、4型、5型、7型、12型、13型、14型八价灭活疫苗制备及应用。该疫苗对1型、2型、4型、5型、7型、12型、13型、14型菌株的感染具有100%的...
- 徐引弟王治方冯丽丽张青娴朱文豪许峰焦文强李海利郎利敏张立宪游一王克领
- 文献传递
- 鸡新城疫病毒中和单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2017年
- 采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法,筛选获得14株分泌抗NDV单克隆抗体杂交瘤细胞株,其单克隆抗体腹水IPMA效价均在0.50×10-2~2.56×10-5(F48E8株和La Sota株)。血凝抑制试验(HI)结果表明,单克隆抗体1G6、2C1、4D2、5F2和13A5具有血凝抑制活性,其HI效价在(6~12)log2(F48E8株)和(9~11)log2(La Sota株)。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体5F2和13A5对F48E8株和La Sota株均有明显的病毒中和活性,中和效价分别为1∶400~1∶800和1∶25。夹心ELISA结果表明,单克隆抗体5F2识别NDV HN蛋白,13A5识别F蛋白。综上,成功制备了具有中和活性的NDV单克隆抗体(5F2和13A5)。
- 李青梅王丽冯丽丽张雨杭赵东杨艳艳邢广旭柴书军李赛赛张丽萍郭军庆张改平
- 关键词：鸡新城疫病毒单克隆抗体血凝抑制试验中和活性
- PRRSV XH-GD株NSP9缺失感染性克隆的构建被引量：1
- 2016年
- PRRSV的非结构蛋白NSP9是病毒的一种高度保守的非结构蛋白,为了研究病毒NSP9基因是否为病毒复制所必需基因,将PRRSV XH-GD株的NSP9基因通过融合PCR方法进行缺失,将缺失NSP9基因的感染性克隆转染BHK细胞并进行病毒的拯救。结果表明:不能进行有效的拯救,对照组可以成功拯救。说明NSP9基因的缺失对病毒产生致死的影响,而不是操作手段的问题导致无法成功拯救。
- 赵孟孟冯丽丽冯嘉萍冯松林王文佳张桂红
- 关键词：PRRSV感染性克隆拯救
- 牛IgG2 Fc受体的真核表达、纯化与结晶
- 2019年
- 【目的】制备牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)蛋白并分析其结构与生物学功能,为进一步研究其免疫学功能奠定基础。【方法】PCR扩增boFcγ2R的胞外区基因片段,将其克隆至真核表达载体pMT/BiP/V5-His A构建重组pMT/BiP-boFcγ2R-His质粒,利用果蝇胚胎Drosophila Schneider 2(S2)细胞表达boFcγ2R胞外区重组蛋白,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,利用Dot-blot验证其生物学功能;采用蒸汽扩散坐滴法对目的蛋白进行结晶,对晶体进行X-ray衍射分析;利用去糖基化酶Endo Hf和PNGase F对目的蛋白进行处理,以验证其糖基化修饰与晶体无衍射之间是否存在因果关系。【结果】PCR扩增获得了663 bp的boFcγ2R基因胞外区片段。成功构建了pMT/BiP-boFcγ2R-His载体,将其转染S2细胞后诱导表达出26 ku的boFcγ2R胞外区重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析的纯化方法得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白;Dot-blot结果显示,该蛋白具有较好的生物学功能。蛋白结晶的2个条件是:体积分数15%TacsimateTM(pH 7.0)、0.1 mol/L HEPES (pH 7.0)、20 g/L PEG 3350和0.1 mol/L HEPES (pH 7.5)、250 g/L PEG 3350。蛋白初筛晶体无衍射,去糖基化试验验证了boFcγ2R胞外区蛋白初筛晶体无衍射可能与其糖基化有关的推测。【结论】得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白,获得其初筛晶体。
- 黄晓静李睿马红芳马红芳冯丽丽乔松林邓瑞广
- 关键词：FC受体蛋白表达
