傅海燕
- 作品数：12 被引量：32H指数：3
- 供职机构：生物化学与分子生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队杰出人才基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学更多>>
- 黑色素瘤相关抗原家族新基因restin的组织表达谱被引量：3
- 2006年
- Restin是从维甲酸诱导肿瘤分化细胞中克隆的一种黑色素瘤相关抗原家族(MAGE)的新成员.对该基因在不同组织、不同细胞系的表达水平进行研究,将有利于揭示其生物学功能.使用α3-2P-dCTP标记人restin编码区基因作为探针,针对12种不同成人组织mRNA的Multiple TissueNorthern(MTN)膜和含76种成人、胎儿及常用细胞系mRNA的Multiple Tissue Expression(MTE)Array膜进行杂交分析,同时利用地高辛标记探针对11种常见肿瘤组织进行原位杂交检测.结果显示,MTN膜杂交中,12种组织显示均一杂交条带,约1.8 kb,提示该基因可能不存在剪接变异体;MTE膜杂交中,正常组织中均有不同程度的表达,但在肿瘤细胞系中均低表达或者不表达;原位杂交的结果显示,在8种恶性肿瘤组织中均不表达,而在3种良性肿瘤组织中呈现较低的表达.结果提示,该基因在正常组织中的表达明显高于肿瘤组织和肿瘤细胞系,完全不同于其它MAGE-A、B、C的组织表达方式.结合该基因在维甲酸诱导分化的肿瘤细胞中高表达,推测restin可能与正常细胞的分化、增殖有关.
- 路凡胡沛臻傅海燕赵文明赵忠良
- 关键词：杂交
- 全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞周期和增殖活性的影响及restin基因表达的初步研究被引量：2
- 2006年
- 目的:检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)在乳腺癌MCF-7细胞周期、增殖、分化和凋亡过程中的作用,以及对。restin基因表达的影响,从而为研究其功能提供线索。方法:用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的变化;MTT 法检测细胞增殖活性;RT-PCR检测restin基因表达。结果:在ATRA诱导下,细胞出现G1期阻滞和生长抑制,增殖活性下降,restin基因开始表达,并呈增长趋势。结论:在ATRA诱导MCF-7细胞分化、凋亡过程中,ATRA能使MCF-7细胞 G1期阻滞,并能抑制MCF-7细胞生长,促使其凋亡,restin基因参与细胞周期的调控,特别是细胞凋亡。
- 姚允怡傅海燕雷初朝杨国栋李华路凡赵忠良
- 关键词：全反式维甲酸乳腺癌MCF-7细胞细胞周期RESTIN
- 荧光内参在校正Caspase-3／7活性检测偏差中的应用被引量：1
- 2010年
- 目的改进Caspase-3／7活性检测方法。方法在顺铂诱导的HeLa细胞凋亡模型中，分别利用传统的和改良的实验方法检测Caspase-3／7的活性变化，并与Western印迹实验结果进行方法学比较。结果改良的实验方法显示不同剂量顺铂诱导下，HeLa细胞Caspase-3／7活性有剂量依赖性增高，与Western印迹实验结果相一致，但传统实验方法显示HeLa细胞Caspase-3／7活性呈现先增高后降低的趋势。结论由于参测细胞数不同，导致这种Caspase-3／7活性检测方法不能真实反映细胞凋亡程度。本研究成功建立了一种新的改良型Caspase-3／7活性检测方式，这种检测方法可以排除不同凋亡诱导方式诱导细胞凋亡时所产生的因参测细胞数不同所造成的Caspase-3／7活性检测的误差。
- 晋亮杨国栋傅海燕卢晓昭韦梦影于芳卢兹凡
- 关键词：凋亡内参顺铂PARP
- 人α防御素融合表达、纯化及生物活性检测被引量：3
- 2006年
- 目的:获得大量重组人α防御素(HDα)并检测其活性,为其深入研究提供必要的材料。方法:体外化学合成得到带有羟氨裂解位点编码序列的HDα基因片段,克隆入pBV220-IL-4表达载体构建重组表达载体pBV220-IL-4-HDα。测序正确后将重组质粒转入大肠杆菌DH5α中进行温度诱导表达。经羟氨裂解去除IL-4后,对所得蛋白进行纯化、复性,以SDS-PAGE和生物学活性检测鉴定其特性。结果:经温度诱导后,融合蛋白主要以包涵体的形式表达,表达产物约占菌体总蛋白的20%;羟氨裂解切除IL-4后,所得目的蛋白的纯度约为99.8%。抑菌活性试验和克隆形成试验显示,所得HDα对细菌生长有明显的抑制作用。结论:成功地构建了HDα基因的重组表达质粒,获得稳定表达的工程菌,并建立了复性与纯化技术,为进一步对其进行功能研究与应用奠定了基础。
- 傅海燕张剑路凡蒲勤王孝功卢兹凡徐俊卿赵忠良
- 关键词：纯化生物学活性
- 含小鼠QKI基因腺病毒载体联合Herceptin协同作用对人乳腺癌细胞系SK-Br-3诱导凋亡的作用及其分子机制
- 目的:研究含小鼠QKI基因腺病毒载体联合Herceptin协同作用对高表达HER2的人乳腺癌细胞系SK-Br-3诱导凋亡的作用及其可能的分子机制。方法:应用MTT法检测亚毒性剂量下Herceptin单独作用与QKI基因腺...
- 韦梦影卢环宇傅海燕卢兹凡
- 文献传递
- 人Qki-5基因重组腺病毒的制备被引量：1
- 2008年
- 目的:构建针对Qki-5人重组腺病毒表达载体,并在能在转染该病毒的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中观察到该基因过表达效果。方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-Qki-5-IRES-EGFP与骨架载体共转化到大肠杆菌BJ5183中,同源重组得到重组腺病毒载体,后者转染HEK293细胞,包装并扩增出病毒颗粒。用获得的病毒感染Qki-5表达较低的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR和Westernblot方法检测细胞中基因表达的变化。结果:经限制性内切酶酶切鉴定,证实针对Qki-5基因的重组腺病毒载体构建成功。RT-PCR和Westernblot方法证实,在MDA-MB-231细胞中,Qki-5基因在mRNA和蛋白水平均有上升。结论:Qki-5腺病毒载体够建成功并且可以在乳腺癌细胞MDA-MB-231内表达。
- 白丽园于芳傅海燕杨国栋张杰晋亮卢兹凡
- 关键词：腺病毒乳腺癌
- p53对restin基因转录表达的调控作用被引量：1
- 2006年
- restin基因是Zhu等人从全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导肿瘤细胞分化时克隆得到的一种黑色素瘤抗原相关基因．前期研究表明,该基因与细胞周期阻滞有关．由于p53在细胞增殖调控中占据重要地位,并且与维甲酸具有诱导关系,因此本研究试图揭示维甲酸诱导restin基因表达是否与p53有关．将p53转染真核细胞,研究restin与p53的表达关系．结果表明p53能诱导restin基因转录增加．进一步分析发现,restin基因5′端上游约2 kb基因组序列中存在p53蛋白结合位点．扩增该序列构建荧光报告系统,检测到该报告系统可以接受维甲酸的诱导调控．在此基础上,研究p53对缺失p53结合位点的截短体报告质粒和p53结合位点突变后的报告质粒的作用,结果显示p53调控restin基因的表达与该基因上游序列区中的p53结合位点无关,推测p53对restin基因的表达调控可能还存在其他分子的相互作用．
- 王瑞华路凡傅海燕杨国栋吴有盛卢兹凡赵文明赵忠良
- 关键词：RESTINP53全反式维甲酸
- Restin基因启动子的克隆及其在HeLa细胞中的转录活性
- 2006年
- 目的:扩增细胞静息因子(restin)基因启动子并构建该启动子的荧光报告系统,探讨其对全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)刺激的反应.方法:①对restin基因上游约2000bp基因组序列进行计算机生物信息学分析.②利用PCR技术扩增restin基因上游序列,将其克隆入pG5-luc中,插入荧光素酶报告基因上游,取代5个GAL-4结合位点及腺病毒启动子,构建Rp-luc质粒.③将构建的质粒转染入He-La细胞,ATRA诱导检测该质粒中荧光素酶的表达.结果:酶切及测序结果均证实成功克隆了restin基因上游序列,已将该序列插入到荧光素酶基因的上游;ATRA诱导转入HeLa细胞中的真核表达载体Rp-luc,荧光素酶表达明显增加.结论:成功构建了含有restin基因启动子序列的荧光报告系统,为进一步研究restin基因功能及其转录调控奠定了基础.
- 王瑞华傅海燕杨国栋路凡赵忠良
- 关键词：RESTIN转录调控启动子全反式维甲酸
- 脂肪酸合酶与脂肪酸代谢及细胞因子的关系被引量：9
- 2012年
- 脂肪酸合酶(FASN),是一种大分子蛋白复合物,在内源性长链脂肪酸的合成中发挥着重要作用。研究证实脂肪酸代谢障碍可导致细胞因子的释放紊乱,与许多疾病发生相关,FASN的异常表达与某些疾病的发生、发展密切相关,尤其是在代谢性疾病如:肥胖、胰岛素抵抗中扮演了重要角色。本文对FASN蛋白的结构、功能、表达调控,以及与相关疾病细胞因子的关系进行了总结。
- 卢环宇韦梦影张更傅海燕
- 关键词：脂肪酸合酶肥胖游离脂肪酸细胞因子
- 医学研究生分子生物学实验教学的体会被引量：9
- 2006年
- 分子生物学实验技术既是分子生物学的重要组成部分，也是学科藉以发展所不可或缺的工具。对于分子生物学实验课的教学，通过教学实践，对于实验课教学内容的安排、教学形式的选择以及追求怎样的教学效果等问题提出了思考与看法。
- 路凡傅海燕卢兹凡
- 关键词：分子生物学教学效果医学研究生
