- 定点突变和随机突变PCR构建噬菌体突变次级抗体库方法的比较
- 2013年
- 目的以突变Tomlinson I库中筛选的抗细胞黏附分子L1的胞外区单链抗体为例,对定点突变和随机突变两种构建噬菌体抗体次级库的方法进行比较。方法设计定点突变和随机PCR引物在基因水平经PCR、酶切、连接将已有噬菌粒引入突变后转染大肠杆菌构建噬菌体次级抗体库;之后使用噬菌体ELISA确定阳性单克隆比例,采用皮尔森χ2检验进行比较。结果两种方法构建的次级抗体库库容分别为1.4×106pfu/mL和2.5×106pfu/mL,两库阳性单克隆比例分别为32.5%和35.5%,二者相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论两种突变方法都有望获得高亲和力的抗体。
- 刘洋余洋王岩赵炜疆
- 神经调节因子Neuregulin-1及其受体ErbB2、ErbB4在恒河猴大脑、小脑的表达及分布被引量：1
- 2013年
- 目的神经调节因子(Neuregulin-1,Nrg1)是类表皮样生长因子家族重要成员,本研究观察比较恒河猴大脑皮质、白质及小脑皮、白质Nrg1及其受体ErbB2、ErbB4表达及分布。方法使用苏木精-伊红(HE)染色观察恒河猴大脑及小脑皮质、白质基本结构形态。使用免疫荧光双标法检测恒河猴大脑及小脑皮质、白质中Nrg1及其受体ErbB2和ErbB4表达与分布。结果免疫荧光显示Nrg1可与其受体ErbB2或ErbB4共定位表达于恒河猴大脑皮质部分细胞中;而在大脑白质,仅Nrg1与ErbB4存在明显定位。在小脑皮质细胞以及白质中均可见Nrg1与ErbB2明显定位,而ErbB4荧光信号则不明显,且Nrg1与ErbB4无明显共定位。结论本研究提示Nrg1及其受体ErbB2、ErbB4在恒河猴大脑小脑皮质及白质中存在着差异性表达和共定位,以Nrg1/ErbB为基础的旁分泌或自分泌机制有可能参与高等动物脑功能活动。
- 张庆慧黄佩芝梅金平刘洋余洋赵炜疆
- 关键词：恒河猴大脑小脑
- Neuregulin 1-β调控小鼠皮质和海马区神经黏附分子L1表达研究
- 背景：神经细胞黏附分子L1（L1）是免疫球蛋白超家族的重要成员，神经系统发育过程中L1对神经细胞存活、神经细胞迁移、突触形成、神经突生长及轴突导向有重要作用。新近研究发现，L1在多种肿瘤细胞中都有异常表达，且在肿瘤形成和...
- 余洋
- 关键词：原代培养蛋白表达胶质瘤
- 文献传递
- RNA干扰细胞黏附分子L1表达逆转胶质瘤U251细胞多药耐药
- 2013年
- 背景与目的:细胞黏附分子L1(cell adhesion molecule L1,L1CAM)是一种跨膜黏附蛋白,在神经系统发育及肿瘤发生中发挥重要作用。本研究运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制L1CAM表达,并探讨其对胶质瘤U251细胞多药耐药的逆转作用及相关分子机制。方法:将针对L1CAM的小干扰RNA(siL1)和阴性对照siRNA(siCon)转染人胶质瘤U251细胞。实验分3组:空白对照组(胶质瘤U251细胞)、阴性对照组(转染siCon的胶质瘤U251细胞)、实验组(转染siL1的胶质瘤U251细胞)。蛋白质印迹法(Western blotting)检测U251细胞中L1CAM、MRP1、DAKT及pERK1/2等蛋白表达。细胞增殖实验检测L1CAM对顺铂(cisplatin)和PI3K/AKT抑制剂LY294002抑制U251细胞增殖的影响。免疫荧光染色法检测抑制L1CAM表达对U251细胞系中AKT磷酸化情况的影响。结果:实验组L1CAM、DAKT、pERK1/2蛋白表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),但实验组多药耐药蛋白MRP1表达量以及Bcl-2α/Bax与阴性对照组和空白对照组相比无明显变化。实验组顺铂和LY294002对U251细胞增殖的抑制率高于阴性对照组和空白对照组,提示抑制L1CAM表达后细胞对顺铂和LY294002的敏感性增加。免疫荧光结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组细胞内AKT磷酸化信号明显降低。结论:RNAi抑制L1CAM表达能增强顺铂和LY294002对U251细胞增殖的抑制作用,并可抑制PI3K/AKT和MAPK信号激活,一定程度上可逆转胶质瘤细胞的多药耐药性。
- 余洋刘洋赵炜疆
- 关键词：SIRNA胶质瘤U251LY294002多药耐药
