黎万玲
- 作品数：53 被引量：124H指数：6
- 供职机构：第三军医大学基础部全军免疫学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 嵌合跨膜型人CD55基因的重组逆病毒表达质粒的构建被引量：1
- 2001年
- 目的 构建嵌合跨膜型CD5 5基因的重组逆病毒表达质粒。方法 采用PCR技术扩增编码CD5 5信号肽及成熟蛋白胞外区 (-3 4 -3 0 4aa)的DNA片段 ,双侧引入EcoRⅠ、SspⅠ位点 ,与编码CD46分子的跨膜区及膜内区 (2 70～ 3 5 0aa)的DNA片段的5’末端自身的StuI位点连接 ,构建嵌合跨膜型CD5 5DNA片段 ,序列测定后将此嵌合CD5 5片段与pLXSN逆病毒载体连接构建重组表达质粒 ,酶切鉴定插入片段的方向。结果 DNA序列测定证实所构建的嵌合跨膜型CD5DNA阅读框完整、连接部位序列正确 ;HindⅢ酶切鉴定得到了正向插入的CD5 5TM pLXSN重组表达质粒。结论 我们成功构建了嵌合跨膜型CD5 5DNA片段及含此片段的重组逆病毒表达载体CD5 5TM pLXSN ,为进一步在真核细胞中表达嵌合分子 ,比较研究GPI锚固型CD5 5分子与细胞活化信号转导的关系建立良好对照并为应用跨膜型的CD5 5分子对PNH进行基因治疗奠定了分子生物学基础。
- 杜瑞琴白云黎万玲姜曼
- 关键词：质粒
- 人ICOSIg的真核表达及其对MLR反应的影响被引量：3
- 2005年
- 目的构建人ICOSIg基因的真核表达载体,表达并鉴定ICOSIg蛋白,初步研究其对MLR中细胞增殖以及对IL-10分泌的影响。方法从活化的人T细胞cDNA文库中以PCR方法扩增ICOS胞外区cDNA编码基因,并和人IgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中,采用脂质体转染COS-7细胞,G418筛选,用ELISA检测其表达情况,经蛋白A亲和纯化,用SDS-PAGE和Westernblotting进行鉴定。进一步通过3H-TdR掺入法和夹心ELSIA法探讨其对双向MLR反应中细胞增殖以及对IL-10分泌的影响。结果酶切和测序证实构建的ICOS膜外区和人IgG1Fc段基因序列正确、阅读框完整;ELISA、SDS-PAGE、Westernblot验证ICOSIg的正确表达;功能实验提示ICOSIg能抑制MLR中的细胞增殖和IL-10的分泌。结论成功构建并表达了ICOSIg,而获得的ICOSIg能抑制MLR。
- 许雪青白云王丰黎万玲杨晓亚王艳艳
- 关键词：共刺激分子混合淋巴细胞反应
- 免疫磁珠法分离人外周血CD4^+ CD25^+调节性T细胞被引量：13
- 2007年
- 目的建立人外周血单个核细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatery T cells,Treg)免疫磁性细胞分离方法(megnetic activated cell sorting,MACS),并鉴定其分离效率。方法采用免疫磁珠两步法(即阴性分选和阳性分选2步)分离人外周血单个核细胞中的CD4+CD25+调节性T细胞,首先采用生物素标记的鸡尾酒抗体和抗生物素标记的磁珠阴性分选CD4+T细胞,再用抗CD25+的磁珠阳性分选CD4+CD25+T细胞。分离后的细胞经抗体染色后再通过流式细胞仪检测其分离纯度;胞内因子染色检测其转录因子FOXP3的表达频率;台盼蓝染色检测细胞的存活率;3H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞增殖抑制效应。结果阴性分选CD4+T细胞的纯度为(92.2±1.7)%,阳性分选后CD4+CD25+Treg细胞的纯度为(95.1±1.2)%。胞内因子染色FOXP3在CD4+CD25+Treg细胞中的表达率为(80.4±1.2)%,台盼蓝染色细胞存活率为(95.6±3.3)%3。H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞具有明显的抑制作用。结论采用免疫磁性细胞分离技术能够高效、快速地得到一群纯度高并且细胞活力好的CD4+CD25+Treg,为进一步研究其功能提供了方便。
- 牛微杨曌尚小云傅晓岚唐艳黎万玲姜曼王莉吴玉章
- 关键词：CD4^+CD25^+调节性T细胞
- 重组跨膜型人CD55分子在小鼠NIH3 T3细胞上的表达及其补体溶破保护功能的研究被引量：1
- 2002年
- 目的 :在小鼠NIH3T3细胞转染表达人天然GPI锚固型CD5 5和重组跨膜型CD5 5 TM分子 ,观察比较它们对人补体溶破异源细胞的抑制功能。方法 :将带有CD5 5cDNA、CD5 5 TMcDNA的重组逆病毒表达质粒CD5 5 pLXSN、CD5 5TM pLXSN经脂质体法转染PA317细胞 ,用病毒上清感染小鼠成纤维母细胞NIH3T3。经G418加压筛选 ,利用FACS检测获得表达CD5 5和CD5 5 TM分子的阳性细胞克隆 ,通过MTT比色法比较两种分子对人血清补体溶破细胞的抑制功能有无差别。结果 :细胞转染筛选获得多个表达跨膜型人CD5 5分子的NIH3T3细胞克隆 ,补体杀伤试验证实其具有抑制人补体溶破的功能 ,且两种分子的补体抑制功能无明显差异。结论 :成功地建立了稳定表达天然CD5 5、跨膜型CD5 5分子的小鼠NIH3T3细胞 ,证实其表达的GPI型CD5 5分子和CD5 5TM分子均具有抑制人补体溶破细胞的功能 ,为进一步探讨应用跨膜型的CD5 5分子对PNH进行基因治疗奠定了基础。
- 姜曼杜瑞琴黎万玲白云
- 关键词：基因转染NIH3T3细胞
- 质粒表达型siRNA对SARS-CoV复制与感染干扰的初步研究被引量：5
- 2005年
- 目的 构建针对SARS CoV的特异性siRNA质粒 ,利用RNA干扰技术抑制该病毒复制与感染。方法 根据SARS CoV的全长基因序列 ,以 4个不同的部位为靶点 ,分别设计、合成含有 19nt干扰序列的一段寡核苷酸 ,将两两互补的寡核苷酸经退火后所形成的序列克隆到pSilencer 3 .1 H1载体中 ,构建表达siRNA的质粒。采用脂质体法将质粒转染VeroE6细胞 ,经潮霉素抗性筛选后 ,再对稳定表达的细胞进行细胞病变、病毒空斑形成和MTT实验 ,以观察干扰效应。结果 对所构建的质粒分别测序 ,确定其含有siRNA的序列与预期的特异性干扰序列一致。用不同浓度的SARS CoV感染转染质粒后的细胞 ,与阴性对照相比 ,其细胞病变减轻、活细胞显著增加 ,病毒空斑明显减少。结论 利用RNA干扰能有效的抑制SARS CoV在细胞中的复制 ,并对细胞有保护作用 ,为预防、治疗SARS提供了新的思路和方法。
- 李阳倪兵石辛甫王希良何仰东肖宇姜曼黎万玲吴玉章
- 关键词：SARS病毒RNA干扰小干扰RNA基因治疗
- 检测HT29细胞中CD133分子及某些免疫相关分子的表达
- 目的：检测CD133+的结肠癌细胞表面免疫相关分子的表达情况，初步了解该群细胞的免疫学特点。意义：已有研究表明CD133+的结肠癌细胞具有肿瘤干细胞的特点，检测其表面免疫相关分子的表达可增加对肿瘤干细胞特殊生物学特点的认...
- 植懿丹牟芝蓉黎万玲郭燕燕
- 关键词：CD133肿瘤干细胞免疫荧光检测
- 人重组CD137-Fc分子的构建与真核表达
- 2003年
- 目的 构建人CD13 7 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人CD13 7 Fc融合蛋白。方法 从cDNA文库中用PCR扩增CD13 7全长编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,,酶切后与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中 ,转染 2 93T细胞瞬时表达 ,用夹心ELISA检测其表达情况 ,经蛋白A亲和纯化 ,用SDS PAGE与免疫印迹进行鉴定。结果 测序证实构建的CD13 7与CD13 7 FccDNA阅读框完整 ,连接部位序列正确 ;ELISA证实CD13 7 Fc蛋白的表达 ;SDS PAGE与免疫印迹证实其为人CD13 7 Fc蛋白。结论 获得了纯化的hCD13 7 Fc融合蛋白 ,为探讨CD13 7在免疫自稳调节中的地位 ,以及探索CD13 7的其它生物学功能奠定了坚实的实验基础。
- 黄钢黎万玲姜曼白云
- 关键词：CD137真核表达
- 利用2DE-MS技术筛选和鉴定大肠癌血清标志物被引量：1
- 2012年
- 目的利用2DE-MS技术对大肠癌患者血清和正常人血清蛋白进行比较分析,筛选和鉴定差异蛋白。方法收集正常人(n=10)和大肠癌患者(n=15)术前血清,进行去除白蛋白和免疫球蛋白及脱盐浓缩预处理,应用2DE-PAGE分离处理后血清蛋白,比较两者的差异蛋白质点,采用MALDI-TOF分析鉴定差异蛋白质。结果血清经预处理后,可提高样品的上样量,2DE-PAGE图谱的蛋白质点数明显增加,水平条带明显减少。大肠癌患者血清中共筛选2个差异的蛋白点,经质谱鉴定为转甲状腺素蛋白(transthyretin,TTR)和细胞角蛋白1(cytokeratin-1,CK-1)。其中TTR在大肠癌患者血清中为低表达,而CK-1为高表达。大肠癌患者血清中TTR含量为(245.87±60.72)mg/L,明显低于大肠腺瘤组和正常血清组[分别为(299.53±67.91)、(311.31±67.01)mg/L,P<0.01]。结论 2DE-MS技术是筛选和鉴定疾病血清标志物的良好工具,TTR可能是大肠癌潜在的血清标志物。
- 何渝军牟芝蓉黎万玲刘宝华吴玉章
- 关键词：大肠癌蛋白质组学二维电泳血清标志物
- GPI锚固型CD46/CD55嵌合分子的设计及构建被引量：7
- 2002年
- 目的 选取调控补体活化中心环节C3转化酶的两种膜调节蛋白CD4 6和CD5 5 ,设计构建了新型的GPI锚固型CD4 6 /CD5 5嵌合分子。方法 以CD4 6cDNA和CD5 5cDNA为模板 ,通过PCR及PCR重叠延伸技术 (SOE)得到CD4 6 /CD5 5嵌合cDNA。为避免双分子连接后的空间结构和功能的变化 ,在CD4 6与CD5 5之间引入了多肽氨基酸接头 (Linker) ,然后克隆构建GPI锚固型CD4 6 /CD5 5 BluescriptM13克隆载体。结果 获得了阅读框完整、连接部位正确的GPI锚固型CD4 6 /CD5 5嵌合分子cDNA。结论 本研究为研制开发新一代的多功能。
- 张利永白云姜曼黎万玲
- 关键词：CD46CD55嵌合分子
- 蛋白质组学技术鉴定体内可激发免疫应答的结肠癌肿瘤相关抗原
- 肿瘤病人常常产生自身抗体,鉴定肿瘤自身抗原可能用于肿瘤的早期诊断和免疫治疗。我们利用血清学蛋白质组学分析(serologicaI proteomics analysis,SERPA)鉴定了结肠癌病人体内可激发体液免疫应答...
- 何渝军吴玉章牟芝蓉黎万玲邹丽云
- 文献传递
