雷小春
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 供职机构：山西医科大学实验动物中心更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 甘丙肽重构基因GAL（intronII）的克隆以及甘丙肽小鼠NA神经元特异表达基因载体的构建
- 目的： 甘丙肽(galanin, GAL)是1983年发现的一种29氨基酸的神经肽(人甘丙肽为30个氨基酸),广泛存在于许多物种的神经系统,在人中枢神经系统中与许多经典的神经递质共存。当前的研究表明,GAL在许多生理和病...
- 雷小春
- 关键词：甘丙肽重叠延伸PCR转基因载体
- 文献传递
- 甘丙肽重构基因GAL(intronⅡ)的克隆及其过表达转基因载体的构建被引量：2
- 2011年
- 目的克隆甘丙肽重构基因GAL(intronⅡ),构建小鼠神经系统特异性表达甘丙肽(galanin,GAL)的转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),为制备GAL转基因小鼠做准备。方法通过常规PCR、RT-PCR及重叠延伸PCR(overlap extension PCR,OE-PCR)扩增出插入GAL第二内含子的GAL全长cDNA的重构基因GAL(intronⅡ),将GAL(intronⅡ)克隆入T载体进行酶切、测序鉴定;同时从psisCAT6α中切下血小板源性生长因子β链(platelet-derived growth factor beta polypeptide,PDGF-β)启动子片段连接到空载体pUC18上构建出重组载体pUC18/PDGF-β-promoter;然后将GAL(intronⅡ)定向克隆于pUC18/PDGF-β-promoter下游,构建转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ)。结果 PCR和限制性内切酶分析鉴定,表明获得转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ)。通过对重构基因GAL(intronⅡ)的GALcDNA和第二内含子序列测序证实其与GenBank中的标准序列一致,GAL(intronⅡ)中第二内含子插入的位置准确,且无移码。结论使用重叠延伸PCR扩增重构基因GAL(intronⅡ)并成功构建转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),为转基因小鼠制备奠定一定的实验基础。
- 雷小春刘田福司苏晋薛亮亮张引红
- 关键词：甘丙肽重叠延伸PCR转基因载体
- 甘丙肽重构基因GAL(intronⅡ)的克隆以及甘丙肽小鼠NA神经元特异表达转基因载体的构建
- 目的：
甘丙肽(galanin，GAL)是1983年发现的一种29氨基酸的神经肽(人甘丙肽为30个氨基酸)，广泛存在于许多物种的神经系统，在人中枢神经系统中与许多经典的神经递质共存。当前的研究表明，GAL在许多生理...
- 雷小春
- 关键词：甘丙肽重叠延伸PCR转基因载体生理病理
- 文献传递
- 大肠杆菌甲基化缺陷DM1菌株与普通DH5α菌株的感受态转化率的比较被引量：1
- 2010年
- 目的观察甲基化缺陷的大肠杆菌DM1菌株与普通DH5α菌株感受态转化效率的差别。方法用常规氯化钙法制备二者的感受态细胞,质粒转化后计算转化率。结果DM1菌株感受态细胞转化率为(2.2±0.3)×106CFU/μg,DH5α菌株感受态细胞转化率为(6.3±0.5)×106CFU/μg。结论成功建立一种高效制备甲基化缺陷菌株DM1感受态细胞的方法,虽然该法制备DM1感受态细胞转化效率比DH5α低2-3倍,但其能够高效满足质粒克隆实验中Dam或Dcm甲基化的限制性位点的使用要求。
- 薛亮亮司苏晋雷小春刘田福
- 关键词：感受态细胞甲基化DH5Α转化率
- 近交系C57小鼠与封闭群昆明小鼠超排卵数的比较被引量：5
- 2010年
- 目的观察C57B6小鼠(近交系)和昆明小鼠(封闭群)超排卵后卵母细胞数量的差别。方法分别对4周龄和7周龄C57B6小鼠与昆明小鼠注射孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG),进行超排卵处理,观察小鼠超排卵母细胞数量。结果超排卵母细胞数量为:4周龄昆明小鼠(16.2±2.5)个/只,7周龄(25.2±3.1)个/只;4周龄C57B6小鼠(9.8±1.2)个/只,7周龄C57B6小鼠(18.1±2.2)个/只。超排卵母细胞数量在同种小鼠不同周龄间和同周龄不同小鼠间比较,均有统计学差异(P<0.05)。结论昆明小鼠超排卵母细胞数量高于C57B6小鼠。
- 薛亮亮雷小春司苏晋刘田福
- 关键词：超排卵小鼠近交系封闭群
- 运用重叠延伸PCR技术构建在甘丙肽全长cDNA嵌入第二内含子的重构分子
- 2010年
- 构建嵌入第二内含子的甘丙肽(Galanin,GAL)全长基因组cDNA的重构分子。通过RT-PCR扩增出cDNA编区的序列,分别从基因组中扩增出cDNA的5′和3′端部分非编码序列;使用重叠延伸PCR(overlap extention PCR,OE-PCR)方法将三个片段重叠获得全长cDNA序列;再将全长cDNA从第三外显子第15个碱基处分成两部分,分开的cDNA前半部分和后半部分以及第二内含子进行重叠延伸获得重构分子,含有第二内含子的甘丙肽(GAL)全长基因组cDNA;将重构分子连入pMDI9-Tsimple载体。电泳分析观察到清晰的重构分子片段;测序显示重构分子由所设计的序列组成,第二内含子插入的位置准确,且无移码。使用重叠延伸PCR能够成功在cDNA中插入内含子获得一段重构基因。
- 雷小春司苏晋薛亮亮刘田福
- 关键词：重叠延伸PCR甘丙肽内含子
- 高转化效率甲基化酶缺陷大肠杆菌感受态细胞制备条件的优化被引量：1
- 2010年
- 目的优化高转化效率甲基化酶缺陷的大肠杆菌DM1感受态细胞的制备条件。方法采用不同生长状态、转化冰浴时间、热激时间及转化后复苏时间的大肠杆菌DM1制备感受态细胞,分析转化效率。结果 A600值为0.39和0.69的菌液制备感受态细胞,转化冰浴时间为30min,42℃热激处理90s,大肠杆菌DM1的转化效率最高;转化后复苏时间对细菌转化效率的影响不明显。结论已优化了高转化效率甲基化酶缺陷的大肠杆菌DM1感受态细胞的制备条件,可满足大部分在质粒中进行的常规克隆的需要。
- 司苏晋刘田福雷小春薛亮亮张引红
- 关键词：大肠杆菌感受态细胞
