陆柔剑
- 作品数：80 被引量：365H指数：12
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 北京地区成人呼吸道感染患者中HCoV-HKU1感染的初步分析与基因型确定被引量：3
- 2013年
- 目的：对北京地区成人呼吸道感染患者中人冠状病毒（HCoV）HKUl的感染状况进行初步分析，了解其流行分布、临床特点，并确定流行株的基因型别。方法：2011年1月～2012年1月从北京地区成人呼吸道感染患者中收集鼻咽拭子标本559份，利用靶向棘突蛋白S与核心蛋白N的2种巢式PCR方法进行HCoV—HKUl筛查，并对阳性片段进行序列测定，以确定其基因型别；同时，对阳性标本进行常见呼吸道病毒的共感染筛查，进而分析HCoV—HKUl感染的临床表现和流行病学特点。结果：559份鼻咽拭子标本中检出HCoV—HKUl阳性9例（1．61％），其中3例合并HCoV-0C43感染；感染患者临床表现为急性呼吸道症状，以发热（88．9％）、咽痛（66．7％）、寒颤（68％）、流涕（55．6％）和咳嗽（44_4％）为主，其中1例有系统性红斑狼疮史；阳性基因片段系统进化分析发现这9例感染均为HCoV—I-IKUlB型。结论：北京地区近年成人呼吸道感染患者中HCoV—HKUl感染率较低（1．61％）。其流行株基因型为B型。
- 段希洁陆柔剑俞晓燕彭堃王文周为民张陵林王仲谭文杰
- 关键词：人冠状病毒呼吸道感染成人基因型
- 人偏肺病毒TaqMan-MGB探针实时定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：7
- 2008年
- 目的:建立人偏肺病毒(hMPV)核酸特异的快速、敏感的TaqMan-MGB探针实时定量RT-PCR检测方法。方法:分别设计hMPV特异的引物与荧光标记探针,合成hMPV绝对定量RNA模板,建立实时荧光定量PCR方法,并与常规RT-PCR平行比较,对其灵敏性、特异性和可重复性,以及用于临床样本的适用性等进行评价。结果:本方法可对hMPV进行特异性诊断,检测灵敏度可达10拷贝/25μL,检测线性范围至少可达101～106拷贝/反应,且实验重复性好,初步应用于北京地区采集的158份临床鼻咽拭子标本,定量RT-PCR检出31份标本阳性,明显高于常规RT-PCR方法(22/158)。结论:建立了人偏肺病毒TaqMan-MGB探针定量RT-PCR检测方法,并初步证实可用于临床鼻咽拭子标本的检测,为开展hMPV的流行监测及临床早期诊断提供了技术手段。
- 陆柔剑张陵林谭文杰周为民王仲彭堃阮力
- 关键词：人偏肺病毒TAQMAN-MGB探针实时定量PCR
- 麻疹病毒血凝素基因助融合(Fusion helper)活性区的定位
- 1997年
- 在利用ＰＣＲ方法克隆麻疹病毒Ｌ４株血凝素（ＨＡ）基因的过程中，获得了一个助融合活性丢失的Ｂ号克隆。其氨基酸序列与具有助融合活性的Ａ号克隆相比，有４个位点不同，分别位于９６、１１７、１４８及５４３位。通过基因间部分序列的交换及定点回复突变，获得了相应位点的突变体。对这些突变体的助融合活性研究发现，１１７、１４８及５４３位氨基酸的改变不影响助融合活性，而当９６位脯氨酸定点回复突变为亮氨酸后，Ｂ克隆血凝素蛋白获得了助融合活性。提示ＨＡ蛋白９６位氨基酸是影响助融合活性的一个重要氨基酸。
- 杨克俭阮力孙朝辉陆柔剑朱既明
- 关键词：麻疹病毒血凝素基因
- 一种检测猴痘病毒B.1 lineage的引物探针组、试剂盒及应用
- 本发明提供了一种检测猴痘病毒B.1lineage的引物探针组、试剂盒及应用，涉及生物医药技术领域。本发明提供了一种检测猴痘病毒B.1lineage的引物探针组，不仅能够同时利用多重荧光定量PCR和数字PCR方法实现猴痘病...
- 谭文杰霍恕婷黄保英吴长城王文玲赵莉任姣陆柔剑
- 一种新型冠状病毒荧光定量PCR快速检测方法的应用评价被引量：1
- 2021年
- 目的建立并评价一种基于COYOTE■Flash20实时荧光定量PCR仪用于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸快速检测的方法。方法通过使用靶向SARS-CoV-2 ORF1ab和N基因的特异性引物探针组构建快速反应体系,并验证体系的灵敏度和特异性。同时,使用108例新型冠状病毒肺炎(COVID-19)临床样本对该方法进行应用评估。结果该检测方法无需核酸提取、手动操作时间仅用1 min,样本进、结果出,可以在30 min完成检测。该方法最低检测限为4×10^(2)拷贝/ml;与其他人类冠状病毒(包括HCoV-229E、HCoV-NL63、HCoV-OC43、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV)以及其他引起呼吸系统疾病的病毒无交叉反应。临床样本应用评估显示,与常规需要核酸提取的RT-qPCR的总符合率为98.15%。结论通过对SARS-CoV-2快速荧光定量PCR方法的应用评价发现,该方法操作简便、快速、特异、灵敏,适用于多种场景即时快速检测需求。
- 牛培华朱耀武陆柔剑彭静朱娜鲁艳军王文玲倪明谭文杰
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 一种灭活型样本保存液在新型冠状病毒核酸快速检测中的应用评价
- 2022年
- 目的评价含表面活性剂Triton X-100及NP40的灭活型样本保存液对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的灭活效果及其对核酸快速检测的影响。方法通过测定灭活型样本保存液对SARS-CoV-2灭活前后病毒滴度变化,评价保存液的灭活效果;用灭活型样本保存液洗脱含有SARSCoV-2模拟病毒的咽拭子样本,评价样本保存液对SARS-CoV-2核酸快速检测最低检测限和精密度的影响,并将SARS-CoV-2在灭活型样本保存液中保存不同时间以评价保存液对SARS-CoV-2核酸检测的影响。结果灭活型样本保存液在5 min内可使SARS-CoV-2滴度至少下降2.76×105倍;灭活型样本保存液对SARS-CoV-2核酸检测的灵敏度无影响,对SARS-CoV-2核酸检测Ct值的CV小于5%;SARS-CoV-2在灭活型样本保存液中于25℃或2℃~8℃条件下可至少稳定保存4 d。结论含表面活性剂Triton X-100及NP40的灭活型样本保存液可有效灭活SARS-CoV-2病毒,且灭活后病毒核酸检测不受影响,适用于核酸快速检测。
- 赵莉陆柔剑叶飞黄保英王慧娟谭文杰
- 关键词：冠状病毒科器官保存液核酸类
- 按痘苗病毒优势密码子改造HIV-1 gag基因提高表达水平的研究被引量：10
- 2005年
- 为确定痘苗病毒密码子偏向性与基因表达的关系及其在痘苗病毒与宿主细胞相互作用过程中的作用,按痘苗病毒的优势密码子对HIV-1gag基因进行改造,并对合成基因与野生型HIV-1gag基因在痘苗病毒载体系统的表达水平进行了研究。结果显示:①各目的基因分别正向插入了痘苗病毒TK区7.5k启动子下游;②免疫荧光检测显示,改造前后的gag基因均能够很好地在痘苗病毒中表达;③Westernblot检测显示,在相同感染量时,改造后的gag基因具有更高的表达水平;④流式细胞术检测显示,密码子改造后的gag基因较野生型gag基因表达水平提高约17%。上述结果表明:按照痘苗病毒优势密码子进行外源基因改造,可作为提高外源基因在痘苗病毒中表达的策略,同时提示,密码子偏向性是痘苗病毒与宿主细胞相互作用的重要调控因素。
- 张相民辛伟王世峰李仁清陆柔剑王文玲吕亦晨阮力
- 关键词：痘苗病毒基因表达HIV-1GAG基因
- 非复制重组痘苗病毒中白细胞介素6的表达及其对重组病毒免疫效果的影响被引量：6
- 2002年
- 目的 研究白细胞介素 6(IL 6)在非复制型痘苗病毒中的表达及其对重组痘苗病毒免疫效果的影响。方法 利用非复制型痘苗病毒表达载体pNEOCK1 1 β75IL6和重组病毒RVJ1 2 3 ,通过两步重组构建能同时表达IL 6和乙型肝炎病毒 (HBV)HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ1 2 3ΔCK1 1 β75IL6。免疫动物并观察其免疫效果。 结果 Southernblot证实痘苗病毒C、K片段间基因缺失的同时伴有IL 6基因的插入 ,IL 6和HBsAg可同时表达。鼻腔吸入分别免疫BALB c小鼠和新西兰白兔 ,ELISPOT实验证实免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗 HBsAgIgA、IgG抗体分泌细胞 (ASC)数比对照组 (RVJ1 2 3ΔCK1 1 β75)显著增加 ,并可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其他分泌液样品中检测到抗 HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体。与对照组相比 ,IgA、IgG抗体阳转率及抗体滴度提高。结论 非复制型痘苗病毒载体中表达的IL 6可增强其诱导的免疫反应 ,为细胞因子IL
- 郭斐陆柔剑孙朝晖马海伦李军阮力张颖妹马大龙
- 关键词：白细胞介素6免疫佐剂
- 重症急性呼吸道感染儿童中人博卡病毒的分型检测与基因进化分析被引量：6
- 2014年
- 目的 了解重症急性呼吸道感染住院儿童中人博卡病毒（HBoV）的感染状况,流行病学特征及其进化特征.方法 采用巢式PCR的方法,对来自北京儿童医院重症急性呼吸道感染住院儿童的259份鼻咽抽吸物,进行人博卡病毒（HBoV）分型检测与测序,同时进行了合并感染检测、流行病学、临床特点及基因多态性分析.结果 共检出56份人博卡病毒感染阳性标本,阳性率为21.6％,[95％ CI（16.0％～27.3％）,P＜0.0001],其中2岁以下儿童感染率较高.与其他呼吸道常见病毒的合并感染率为94.6％.HBoV阳性产物测序分析发现,人博卡病毒1型占96.4％ （54/56）,2、3型各1份.HBoV阳性株分型区（VP1/VP2）序列变异不明显.结论 人博卡病毒是儿童急性呼吸道感染常见的病原体,以I型最为常见,分型区（VP1/VP2）序列较保守.HBoV在重症急性呼吸道感染儿童中是否起到真正的致病作用还需进一步的研究.
- 李亚敏周为民王延群赵彦杰陆柔剑谢正德谭文杰
- 关键词：博卡病毒呼吸道感染种系发生
- 人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1常规RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用比较被引量：23
- 2008年
- 分别设计HCoV-NL63和HCoV-HKU1特异的引物与荧光标记探针,并合成含靶基因的模板RNA,建立常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR方法,对其灵敏性、特异性和可重复性以及用于临床样本的适用性等进行平行比较评价。结果表明:这两种方法皆可对HCoV-NL63或HCoV-HKU1进行特异性诊断,其中荧光定量RT-PCR方法检测灵敏度均可达10拷贝/25μL反应体积,不同批次重复检测结果间的变异系数均小于5%。上述方法应用于158份临床鼻咽拭子标本,其中荧光定量RT-PCR方法检出6份HCoV-NL63阳性标本,5份HCoV-HKU1阳性标本,而常规RT-PCR方法则分别检出HCoV-NL63阳性与HCoV-HKU1阳性各3份。对常规RT-PCR方法获得的阳性样品进行序列分析证实上述方法的可靠性。本实验成功建立了可用于临床标本检测的人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR检测方法,并初步证实荧光定量RT-PCR检测方法检出率明显高于常规RT-PCR方法,这为开展HCoV-NL63和HCoV-HKU1的流行监测及临床早期诊断提供了有效技术手段。
- 陆柔剑张陵林谭文杰周为民王仲彭堃阮力
- 关键词：人冠状病毒
