罗伟光
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
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- 发文基金：国家自然科学基金河南省教育厅科学技术研究重点项目河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 枯草芽孢杆菌源纤维素酶基因的克隆、表达及其酶学性质
- 当前人们对于纤维素酶的研究主要集中在单一基因的克隆与表达，而结晶纤维素的降解需要多种纤维素酶的协同作用才能彻底完成。在将复杂的纤维多聚体转化为小分子糖类过程中，纤维素酶复合酶系中的葡聚糖酶作用尤其突出。通过基因工程技术将...
- 罗伟光
- 关键词：枯草芽孢杆菌纤维素酶基因表达基因克隆酶学性质
- 一株土壤源高产纤维素酶芽孢杆菌的分离与鉴定被引量：3
- 2013年
- 为了获得产纤维素酶的芽孢杆菌,从河南省不同地方采集玉米地、秸杆垛的土壤样品58份,利用刚果红平板法分离产纤维素酶的芽孢杆菌,采用3,5-二硝基水杨酸法测定纤维素酶活,结合菌落特征、显微形态、生理生化试验和16SrDNA序列进行鉴定。结果表明,从样品中分离出的42株产纤维素酶菌株中筛选出一株产纤维素酶较高的菌株B.LY02,纤维素酶活力可达0.5351U/mL。该菌株呈短杆状,革兰氏染色阳性,能形成芽孢。基于16SrDNA序列同源性比较分析表明该菌株与Bacillus licheniformis strain CICC10095的亲缘关系最近,基因序列的同源性为96.5%,因此鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌。
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- 关键词：纤维素酶芽孢杆菌
- 双纤维素酶基因在乳酸杆菌中的融合分泌表达被引量：3
- 2014年
- 为提高纤维素的降解效率,将两种不同的纤维素酶基因在乳酸杆菌中融合表达,实现双纤维素酶在乳酸杆菌中的高效表达。根据两纤维素酶的基因序列设计两对引物,并在两基因间引入一段连接肽。通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)分别扩增得到两纤维素酶基因CelL15和CelL73,将其融合后连接到乳酸杆菌分泌性表达载体pMJ67中,构建重组表达质粒pMJ-CelL15-CelL73,电转化入乳酸杆菌Lactobacillus casei,利用红霉素MRS平板筛选阳性克隆,通过PCR验证获得了分泌表达双纤维素酶的重组乳酸杆菌。电泳实验结果表明重组乳酸杆菌成功表达了1个约为83 kD的融合蛋白。平板酶活力检测发现重组乳酸杆菌能明显降解底物中的羧甲基纤维素钠,培养液上清中纤维素酶酶活力可达1.25 U/mL。
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- 关键词：纤维素酶分泌
- 高产淀粉酶枯草芽胞杆菌的诱变选育和酶学性质研究
- 2013年
- 为了提高产淀粉酶枯草芽胞杆菌BacillussubtilisN21的酶活，试验采用紫外线对该菌株进行诱变，并对该淀粉酶的部分酶学性质进行了研究。结果表明，淀粉酶酶活由出发株的32．96U／mL增加到86．24U／mL．比原菌株酶活提高了161．65％。该酶的最适反应温度为35℃，最适pH值为7．0，在30—40℃，pH值为5．0～8．0条件下较稳定。Ca2＋和Mn2＋对酶有激活作用，Cu2＋、Zn2＋对酶有抑制作用，而Mg2＋、Fe2＋对其影响较小。说明筛选出1株产酶活性较强的突变菌株。
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- 关键词：诱变酶学性质
- 猪源高产蛋白酶芽胞杆菌的分离与鉴定被引量：1
- 2013年
- 利用酪蛋白培养基从猪粪便样品中分离产蛋白酶的芽胞杆菌,采用福林酚法测定其酶活力,对筛选到的高酶活菌株进行形态学、生理生化和分子鉴定。结果表明,从86株分离菌中筛选了一株酶活较大的菌株B.A464,革兰氏阳性菌,呈粗杆状,能形成卵圆形芽孢,16S rDNA序列长度是1 463 bp,与蜡样芽孢杆菌的同源性高达99%,鉴定为蜡样芽孢杆菌,所产蛋白酶活力为2.19×103U·mL-1。
- 李三栋丁轲罗伟光彭春平孙二刚刘永垒
- 关键词：蛋白酶芽孢杆菌RDNA
- 2个枯草芽孢杆菌源纤维素酶基因的克隆、融合表达及其酶学性质分析被引量：8
- 2017年
- 本试验旨在构建不同纤维素酶的融合表达系统及探讨融合纤维素酶的酶学性质。利用PCR技术从实验室前期分离的枯草芽孢杆菌中分别扩增2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,设计一段柔性接头(GSGGGS),通过酶切连接将2个纤维素酶基因构建在一个开放阅读框(ORF)内,插入到pET32a(+)中构建重组表达载体pET32a(+)-Cel42-Cel22,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,并对其酶学性质进行研究。结果表明:本试验成功克隆了2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,并构建了重组表达系统BL21(DE3)/pET32a(+)-Cel42-Cel22,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)估计其分子质量约为101 ku,粗酶液中葡聚糖内切酶活性为57.62 U/mL,葡聚糖外切酶活性为32.57 U/mL。试验所得融合纤维素酶Cel42-Cel22的最适反应温度为50℃,最适反应pH为6.0,温度在30~70℃范围内时可维持70%以上的纤维素酶活性,pH在4.0~9.0范围内时可保持75%以上的纤维素酶活性,除Mn^(2+)外的其他金属离子对纤维素酶的活性均具有一定的抑制作用,其中Hg^(2+)和Cu^(2+)对的抑制作用较明显。由此可见,本试验在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了融合纤维素酶Cel42-Cel22,且该酶具有一定的活性,可适应较宽广的温度和pH范围,对金属离子敏感。
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- 关键词：纤维素酶枯草芽孢杆菌克隆酶学性质
