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缪青梅: 作品数：27 被引量：97H指数：7; 供职机构：浙江省农业科学院更多>>; 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省重点科技计划浙江省公益性技术应用研究计划项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>

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一种用于检测转基因大豆g10evo-epsps基因的数字PCR方法: 本申请涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种用于转基因大豆g10evo‑epsps基因检测的数字PCR方法。该方法包括如下的步骤：1）提取转基因大豆基因组DNA；2）在微滴生成卡中加入PCR体系和微滴生成油生成微滴，将生成的...; 陈笑芸徐晓丽纪艺寿惠霞王鹏飞缪青梅汪小福徐俊锋; 文献传递

转基因抗虫玉米GAB-3转化体的定量PCR检测方法及试剂盒: 本发明公开了一种转基因抗虫玉米GAB‑3转化体的定量PCR检测引物对、检测探针和试剂盒，以及它们在转基因抗虫玉米GAB‑3转化体的定量PCR检测中的应用。本发明还公开了一种转基因抗虫玉米GAB‑3转化体的定量PCR检测方...; 陈笑芸缪青梅王鹏飞纪艺徐晓丽彭城汪小福徐俊锋

基于SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR建立生乳及乳制品沙门氏菌快速检测技术被引量：11: 2012年; 生乳易受沙门氏菌污染,并大量繁殖;经加工的乳制品细菌数大大减少,但仍存在沙门氏菌污染的风险。试验按生乳及乳制品沙门氏菌污染水平研究样品前处理方法,采用煮沸裂解法快速提取总DNA,针对沙门氏菌invA基因建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR快速检测技术。建立的方法具有良好的特异性和较高的灵敏度,其中生乳沙门氏菌检出限为102cfu.mL-1,方法的检测线性范围为102～108cfu.mL-1,相关系数(R2)为0.999,扩增效率为103%;乳制品沙门氏菌经16 h增菌后检出限达到1 cfu.[25 g(mL)]-1。该技术可用于生乳中沙门氏菌的高效筛查及定量检测,检测一个样品仅需3 h;同时,可用于乳制品的准确定性检测,检测周期为1 d;且方法重复性好、准确度高、操作简单,为乳制品企业快速检测沙门氏菌提供了有效的技术手段。; 张巧艳陈亭亭陈笑芸杨胜利缪青梅; 关键词：沙门氏菌荧光定量PCR SYBR 生乳乳制品

转g10-epsps基因耐除草剂大豆ZUTS-33转化体特异性检测方法的建立被引量：2: 2020年; 转g 10-epsps基因耐除草剂大豆ZUTS-33是由浙江大学研发的耐除草剂大豆品系,目前已进入生产性试验阶段。到目前为止尚无文献报道对该转基因新品种的检测方法,因此亟需建立精准的定量检测方法为农业转基因生物安全管理提供技术支持。根据耐除草剂大豆ZUTS-33品系外源基因插入位点特异序列设计引物和TaqMan探针,利用优化的实时荧光定量PCR检测方法评价该引物对和探针的特异性、准确度、精确度和重复性,并确定此检测方法的检测极限(limit of detection,LOD)和定量极限(limit of quantity,LOQ)。实验结果显示,研究所建立的转基因大豆ZUTS-33转化体特异性实时荧光定量PCR检测方法具有高度的品系鉴定特异性,准确度、精确度均符合要求,重复性较好,且检测方法的LOD达到20拷贝,LOQ达到40拷贝。研究结果为转g 10-epsps基因耐除草剂大豆ZUTS-33的身份识别和检测监测提供了有效的方法。; 缪青梅赵杨徐晓丽徐俊锋汪小福陈笑芸; 关键词：转基因大豆实时荧光定量PCR

转基因抗虫玉米GAB-3转化体的定量PCR检测方法及试剂盒: 本发明公开了一种转基因抗虫玉米GAB‑3转化体的定量PCR检测引物对、检测探针和试剂盒，以及它们在转基因抗虫玉米GAB‑3转化体的定量PCR检测中的应用。本发明还公开了一种转基因抗虫玉米GAB‑3转化体的定量PCR检测方...; 陈笑芸缪青梅王鹏飞纪艺徐晓丽彭城汪小福徐俊锋

转Cry1Ab基因水稻分子特征及其特异性PCR检测方法被引量：8: 2012年; 转Cry1Ab基因水稻Bt01为一种新型的转基因水稻,文章首先利用Southern blotting验证了外源基因Cry1Ab转入了Bt01中,且为单拷贝,再利用TAIL-PCR方法获得了其插入位点信息,根据获得的Bt01的5′端插入位点序列,设计了相应的定性与定量PCR检测体系的引物及探针,实验结果显示,定性PCR检测体系的最低检测极限(LOD)为10个拷贝,定量PCR检测体系的LOD为5拷贝,最低定量极限(LOQ)为10拷贝。同时为了验证建立的定量PCR体系的准确性,利用该体系检测已知转基因水稻Bt01含量分别为3%和0.5%的样品,定量结果分别为2.7%和0.47%。研究结果表明,该转化体特异性定性与定量检测方法具有高度的特异性和良好的灵敏性,为转基因水稻Bt01的身份识别和检测提供了有效的方法。; 汪小福陈笑芸张小明周育张焕春缪青梅方敬徐俊锋; 关键词：分子特征转基因 CRY1AB 特异性检测

不同TAIL-PCR通用引物在转基因大豆、水稻、油菜侧翼序列分离中的应用评价被引量：5: 2013年; 为研究不同转基因作物T-DNA插入位点侧翼序列分离中所用的通用简并引物对TAIL-PCR的影响,本研究使用5个通用简并引物分别对8个转基因大豆、30个转基因水稻和2个转基因油菜株系进行了TAIL-PCR分析,结果表明,5个简并引物在TAIL-PCR中的扩增效果存在显著差异,同一简并引物在不同转基因物种的扩增效果显著不同。AD1引物在转基因水稻和转基因油菜中扩增效果较好,AD2引物在转基因水稻、油菜和转基因大豆中扩增效果均较好,AD3引物在转基因水稻中扩增出1个株系,在转基因油菜中扩增出1个株系,但AD3引物与pFGC5941 T-DNA RB上游有匹配,不适用于以pFGC5941为载体的转基因材料分析。AD4和AD5 2个引物在3个转基因物种的扩增均较差。对AD1和AD2两个引物的TAIL-PCR扩增产物进行测序,结果表明,扩增产物均对应转基因材料的侧翼序列。研究表明,不同通用引物在不同转基因事件中侧翼序列的分离效果差异较大,通用引物AD1和AD2TAIL-PCR成功率最高。不同通用引物的应用效果不仅与不同物种有关,也与外源基因的插入位点有关,而且还与载体序列匹配程度相关。为提高TAIL-PCR中T-DNA插入位点侧翼序列分离成功率,建议同时采用多个通用引物平行扩增。; 陈笑芸汪小福刘仁虎张小明周育缪青梅徐俊锋; 关键词：TAIL-PCR 转基因大豆转基因水稻转基因油菜侧翼序列

食品分析水平测试计划(FAPAS)转基因检测能力验证中的方法分析与质量控制被引量：14: 2016年; 通过分析食品分析水平测试计划(Food analysis performanee assessment scheme,FAPAS)转基因检测的能力验证中对样品的定性和定量检测的要求,分析了转基因检测过程中关键环节的方法选择及相应的质量控制。根据比对参与FAPAS验证的其它实验室的数据,判断能力验证结果为满意。FAPAS实验室能力验证结果显示实验室的相关检测能力和水平。加强对转基因检测过程中的方法分析和质量控制,对提高检测水平有重要作用。; 汪小福陈笑芸缪青梅赵紫赋刘慧朱姝晴徐俊锋; 关键词：转基因检测 PCR检测

一种校准实时荧光定量PCR仪的方法: 本发明涉及生物分析领域。一种校准实时荧光定量PCR仪的方法，包括如下步骤：配制未知样品，进行实时荧光定量PCR反应，测定其拷贝数浓度，计算样本示值误差；将鸭源性IL‑2基因DNA标准物质进行系列稀释，进行标准曲线验证，计...; 陈笑芸徐晓丽徐俊锋汪小福缪青梅; 文献传递

转基因大豆中外源基因g10evo-epsps的qPCR检测方法的建立和验证被引量：1: 2021年; 耐除草剂基因g10evo-epsps在我国转基因农作物研发中常常被用作目标性状基因或筛选标记基因,因此可作为转基因成分检测的重要筛查基因,但目前缺少相应的检测方法。本研究旨在建立g10evo-epsps基因特异性的实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,从而为转基因大豆的监测提供一种稳定可靠的方法体系。本研究基于转基因大豆中的g10evo-epsps基因序列设计了qPCR检测引物和探针,并对检测方法的特异性、灵敏度、准确度和精确性进行了实验室内验证。结果显示,建立的g10evo-epspsqPCR检测方法能够特异性检测转基因大豆ZUTS-33中的g10evo-epsps目的基因;标准曲线分析表明,3次重复试验的扩增效率在90%以上,R2均大于0.99;方法的检测限(LOD)为不高于8拷贝,定量限(LOQ)推测为16拷贝;对含量为4.5%、2%、0.5%、0.09%和0.045%的转基因大豆ZUTS-33基因组DNA进行准确度分析,发现该方法测定的平均值和预期值之间的偏差为0.00%~11.11%,3次重复试验的RSDr为2.30%~17.10%。结果表明本研究建立的g10evo-epsps qPCR检测方法能够满足转基因大豆筛查检测的要求,为转基因大豆监管和标识提供技术支撑。; 徐晓丽纪艺陈笑芸王鹏飞缪青梅来勇敏徐俊锋; 关键词：大豆

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